Способ определения пировиноградной кислоты в крови

Авторы патента:

G01N33/52 - использование соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, например реактивной бумаги

Союз Советскнк

С оциалнстнчвскня

Ресоубйнк

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCKOMY СВИ ЮтИЛЬСтВУ (61) Дополнительиов к авт, сеид-ву (22) Заявлено 130280 (21) 2877502/28-13 (51 jN с присоединением заявки Но

G 01 М 33/52

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет(53) УДК 615. 3 (088 ° 8) Опубликовано 30.10.81, Ьюллатеиь Й9 40

Дата опубликования описания 3Q1081 (72) Автор изобретения

П.М.Бабаскин

Психиатрическая клиническая больница 9 им. П.П.Кащенко (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПИРОВИНОГРАДНОЙ

КИСЛОТЫ В КРОВИ

Экстинкция

Количество пировиноградной кислоты в стандарте, мкг

9 про2О бы

1,0

2,0

4,0

8,0

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в клинической биохимии при изучении энергетического обмена.

Известен способ определения пиро. виноградной кислоты в крови путем получения безбелкового фильтра с послецующей обработкой его динитрофенилгидразином и фотометрии смеси (1).

Однако известный способ трудоемок и недостаточно точен.

Цель изобретения вЂ” повышение точности способа и ускорение его.

Поставленная цель достигается тем, что способ определения пировиноградной кислоты в крови осуществляют путем получения безбелковогo фильтрата с последующей обработкой его динитрофенилгидразином и фотометрии смеси. в реакционную смесь после обработки ее дифенилгидразином вносят водный раствор NaOH.

Пример. 0,1 мл капиллярной крови вносят в центрифужную пробирку в которую предварительно наливают

1,9 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Содержимое смешивают и центрифугнруют 20 вЂ” 30 мин при

1500 об/мин. Надосадочную жидкость переносят в обыкновенную пробирку и прибавляют О, 4 мл О, 1%-ного динитрофенилгидролизина (ДНФГ) и ставят пробу на 20 мин в темное место. Затем приливают 1 мл 1%-ного раствора едкого натрия и через 5 мин фотометрируют при синем светофильтре в кюветах

5 мл. В качестве компенсационной жидкости берут контрольный раствор, который готовят также как опытную пробу, только вместо крови берут дистиллированную воду. Расчет проводятпо данным калибровки стандартного раствора пирувата натрия,кототжй обрабатывают так же как опытную пробу крови.

Калибровочная таблица

877436

Количество пирови ноградной кислоты, мгЪ, определенное по способу

Исследуемый субстрат известному предлагаемому

Стандартный раствор пирувата натрия с концентрацией пировиноградной кислоты

5 мгЪ

Пробы крови

4 вЂ” 5

2 вЂ” 3

0,4-0,7 0,9-1,2

Ьо о,z Á м«т С О,Ф 1000

Составитель С.Малютина

Редактор Е.Дичинская Техред A.Áàáèíåö Корректор А.Ференц

Заказ 9605/68 Тираж 910 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва,Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул.Проектная, По показателям калибровочной таблицЫ вычисляют цену одного деления экстинкции в микрограммах пировиноградной кислоты для каждой стандартной точки (1,0:4 = 0,25; 2,0:8 = 0,25;

4,0:16 0,25; 8,0:32 = 0,25) и pac: чет пировиноградной кислоты в исследуемой крови проводят по формуле

СК В х C„30OO

10 где количество пировиноградной кислоты в анализируемой крови;

С вЂ” объем крови, в котором требуется определить количество пировиноградной 15 кислоты; цена одного деления экстинкции,мкг пировиноградной кислоты;

Б - экстинкцияопытной пробы; 2О количество крови, идущей в опыт.

1ppp вЂ” перевод микрограммов в миллиграммы.

Для того, чтобы определить количество пировиноградной кислоты в

100 мл крови в опыт берут 0,1 мл. Цена одного деления экстинкции 0,25 мкг пировиноградной кислоты, экстинкция опытной йробы 5 делений. Подставляя цифровые данные в формулу, получают

Сравнительные данные количествен". ного анализа пировиноградной,кислоты представлены в таблице.

Из таблицы видно, что предлагаемый способ определения пирувата в

1,5 вЂ” 2 раза точнее известного.

Предлагаемый способ прост в выпол-. нении, не требует дефицитных реактивов и обеспечивает высокую точность.

Формула изобретения

Способ определения пировиноградной кислоты в крови путем получения безбелкового фильтрата с последующей обработкой его динитрофенилгидразином и фотометрии смеси, о т л и ч а-: ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа и ускорения его, в реакционную смесь после обработки ее дифенилгидразином вносят водный раствор NaOH.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Покровский A.A. Биохимические методы исследования в клинике. М., "Медицина", 1969, с. 254-255.

Способ определения пировиноградной кислоты в крови

Способ определения степени фибринолиза тромба // 855501

Способ определения гистамина в би-ологическом материале // 845099

Способ определения свободного гидрокси-пролина b плазме крови // 834518

Способ определения тканевой несов-местимости донора и реципиента // 828087

Способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях1изобретение относится к области медицины,, а именно к методам анализа лекарственных препаратов.известен способ количественного определения препаратов фенотиазинового ряда в биологических жидкостях путем экстракции их с последующим разделением жидкостной хроматографией [1].однако известный способ _трудоёмок, длителен' и не обеспечивает .высокой чувствительности и воспроизводимости результатов..цель изобретения ~ повышение точности способа.эта цель достигается путем экстр^кции препаратов с последующим ра^вделением жидкостной хроматографией. при этом хроматографию ведут на катионите, а в качестве элюентов ис- 20 пользуют смесь этанола и воды, взятых в соотношении 1:5 - 5:1 по объему с добавлением 0,1-5,0% смеси уксусной кислоты и дизтиламин'а в соотношении 5:4.' способ осуществляют следующим образом.образец биологической жидкости, содержащий один или несколько препа_- ратов фенотиазинового ряда, под- ' 30101525вергают экстракции при рн 9,5 хлороформом. затем экстракт упаривают, остаток растворяют в этаноле и вводят в колонку длиной от 10 до 50 см, заполненную сильньм катионитом, например партисилом 10- scx. через колонку пропускают смесь этанола и воды с добавлением диэтиламина и уксусной кислоты. время удерживания фенотиазиновых препаратов различно. детектирование выходящих из колонки разделенных konotohehtob осуществляют по поглощению уф-света в проточной кювете. поскольку все фенотиазиновые 'препараты характеризуются сильным поглощением уф~света, такой метод детектирования гарантирует высокую чувствительность анализа. содержание препарата опреде.пяют по калибровочному графику,пример 1. , построение калибровочного графика для анализа ч нонахлазина и этмозина.к 2 мл плазмы добавляют нонахлазин и этмозин в виде водных райтворов соответствующих гидрохлоридов. прибавляют 0,5 г сульфата аммония и 0,5 мл 10%-ного аммиака. экстрагируют 2 раза по 5 мл хлороформа. объединенный экстракт испаряют'в // 826242

Патент 826241 // 826241

Способ определения фосфоновыхкислот b биологических жидкостях // 819721

Средство для очистки сыворотки при фотометрических измерениях // 791267

Способ диагностики раковых заболеваний // 428278

Способ определения антиоксидантной активности плазмы крови // 2102757

Способ дифференциальной диагностики гемморрагической лихорадки с почечным синдромом от острых распираторных вирусных инфекций и воспалительных заболеваний почек // 2104540

Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и инфекционным болезням

Способ прогнозирования острого инфаркта миокарда // 2105981

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и предназначено для прогнозирования течения инфаркта миокарда

Способ определения влияния со*002 на генерацию супероксидного анион-радикала фагоцитами // 2108572

Изобретение относится к медицине и касается исследования влияния CO2 на генерацию супероксидного анионрадикала фагоцитами

Способ определения степени магниточувствительности человека // 2108581

Изобретение относится к медицине, в частности, к гигиене, может быть использовано для определения индивидуальной магниточувствительности человека при профотборе

Способ определения естественной киллерной активности лимфоцитов человека в условиях гипербарии // 2109288

Изобретение относится к области водолазной медицины и физиологии подводных погружений и может быть использовано для определения влияния факторов гипербарии (величины общего давления, вида используемой газовой смеси, типа водолазного спуска, параметров микроклимата в гипербарических комплексах и т.д.) на естественную киллерную активность лимфоцитов крови водолазов

Способ диагностики перинатальных нефропатий на стадии предболезни // 2110799

Способ определения бактериальных липополисахаридов // 2114436

Изобретение относится к медицине, а именно к способам количественного определения бактериальных липополисахаридов в процессе производства медицинских иммунобиологических препаратов

Способ обнаружения идентификации и/или количественной оценки материала, набор для анализа, оптический волновод, биосенсор // 2116349

Изобретение относится к генной инженерии, а именно к способу проведения анализов с помощью генных зондов и с использованием биосенсора, включающего детектор затухания колебаний

Способ определения количества бактерий в биопрепарате // 2117291

Изобретение относится к способам исследования биологических материалов с использованием соединений или составов для колориметрического, спектрофотометрического или флуорометрического анализа, в частности к способам определения количества бактерий в биопрепаратах, и может быть использовано в медицинской микробиологии и микробиологической промышленности