Способ определения специфического белка

 

(7l) Заявитель

PA уд р ивдицинский институт ии.И.И.Пирогова (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОГО

БЕЛКА

Изобретение относится к медицине, а именно к способам выявления специфической адсорбции белков.

Известен способ определения специфического белка путем адсорбции антигена последующим контактированием адсорбированного антигена с исследуемым материалом, содержащим специфический белок (1).

Однако известный способ сложен, î требует длительных измерений и обработки полученных результатов (от 2 ч до 2 суток) и не обеспечивает необходимой чувствительности при измерениях (чувствительность до 10 мг/мл)

Цель изобретения - ускорение и повышение чувствительности способа.

Эта цель достигается тем, что при осуществлении способа определения специфического белка путем адсорбции антигена с последующим контактированием адсорбированного антигена с исследуемым материалом, содержащим пецифический белок, адсорбцию анти2 гена осуществляют на поверхность регистрирующего датчика и по изменению теплофизических характеристик . датчика до и после контакта с исследуемым материалом определяют наличие специфического белка.

Способ осуществляется следующим образом.

В начале проводят адсорбцию антигена на стеклянную поверхность датчика, например, термореэистора, а затем регистрируют адсорбцию специфических антител. Для этого датчик, с предварительно очищенной поверхностью, погружают в раствор антигена, извлекают его, промывают поверхность в дистиллированной воде и помещают в физиологический раствор. Включают рабочий ток и по достижении стационарного режима работы датчика добавляют антисыворотку. В случае специфической адсорбции антисыворотки на поверхность датчика, нагруженного антигеном, наблюдают кинетическую

908360

Пример 2. Определение скорости адсорбционного взаимодействия предварительно истощенной антисыворотки против tgG человека и специфического антигена (эталонной сыворотки крови человека), Опыт проводился кривую, которую сравнивают с контрольной. Контрольную кривую получают для тех же сывороток, предварительно истощенных или неспецифичных к данному антигену. С ростом толщины адсорбционного слоя ухудшается отвод тепла от стеклянной поверхности датчика, увеличивается температурный градиент среды в приграничном слое поверхности датчика и уменьшается >в его сопротивление, что отмечается на регистрирующем устройстве. Адсорбция молекул А — например, на стекле приводит к почти полной потере активности антисыворотки, поэтому помещение такой поверхности в раствор с антигеном не дает нанесения по толщине адсорбционного слоя, что готовит об отсутствии специфической адсорбции.

При этом при адсорбции антигена на щ поверхности стекла адсорбционный слой всегда мономолекулярный и плотность его зависит от концентрации антигена.

Пример 1. Определение ад- д сорбционной скорости взаимодействия эталонной сыворотки крови человека со специфической антисывороткой (кроличьей) против J gG человека. Стеклянную поверхность терморезистора (например, типа МТ-54) тщательно очищают, помещают в кювету с антигеном известной концентрации 8 " х 10 мг/мл и составляют на 30 мин, затем вынимают, 10- 15 раз промывают в дистиллированной воде и погружают в термостатируемую кювету с физиологическим раствором (0,93 NaC1) в обьеме 1 мл и включают рабочий ток

Д =О,S+0,05 мА для терморезистора

МТ-54. Через 1-2 мин после установления стационарного режима работы терморезистора, регистрируют сопротивление R в нагруженном антигеном состоянии. Затем добавляют 0,02 раствора специфической антисыворотки против 1gG человека в разведении

1:4000 и регистрируют изменение сопротивления терморезистора со временем t в результате специфической ад50 сорбции макромолекул антисыворотки с антигеном.

4 по предлагаемому способу, только в физиологический раствор добавляют предварительно истощенную антисыворотку против 3цС человека. В результате многократных добавлений антигена (до 0,4 мл) не наблюдали изменения сопротивления терморезистора, что указывает на отсутствие специфической адсорбции антигена с предварительно истощенной специфической антисывороткой.

Пример 3. Определение специфической адсорбции иммуноглобулинов класса 3 g G в сыворот ке крови. иммунодефицитного больного до и после иммуноглобулиноте рапи и. Опыт проводился по предлагаемому способу, одна ко, после добавления 0,02 мл сыворотки больного через 30 мин изменение сопротивления терморезистора прекращается и устанавливается на новом равновесном уровне, что указывает на прекращение процесса адсорбции иммуно лобулинов. Определенные значения уровня адсорбцируемых иммуноглобулинов оказались длл больного 2 10 мг/мл

-2 и 5- 10 мг/мл до и после иммуноглобулинотера пии.

Таким образом приведенные исследования с помощью предлагаемого способа показали, что способ. позволяет сократить время исследования до 515 мин, повысить чувствительность до

-8

5 10 мг/мл концентрации исследуемых реагентов, выявить наличие и скорость специфической адсорбции белков, что увеличивает производительность опытов 5-6 раз, а также существенно упростить постановку и проведение исследований, при этом разброс данных, полученных предлагаемым способом, не превышает 5i, что обеспечивает высокую надежность и достоверность результатов. формула изобретения

Способ определения специфического белка путем адсорбции антигена с последующим контактированием адсорбционного антигена с исследуемым материалом, содержащим специфический белок, о т л и чающий с я тем, что, с целью ускорения и повышения чувствительности способа, адсорбцию антигена осуществляют на поверхность регистрирующего датчика и по изменению теплофизических характеристик датчика до и после контакта с иссле5 908360 6 дуемым материалом определяют наличие 1. Rothen А. пЕ tepsometriс stuспецифического белка. dies оФ thin films",J.Progress in

Источники информации, surface and membrane sciånå. 8, 1О, принятые во внимание при экспертизе 1974.

Составитель Ю.Алмазов

Редактор И.Тыкей Техред М.Рейвес КорректоР Г.Назарова

Заказ 678/6 Тираж 717 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, N-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", г.Ужгород, ул.Проектная, 4