Способ получения эпоксиагроклавина-1

 

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭПОКСИАГРОКЛАВИНА-1 формулы о4Х N-CH, заключающийся в том, что культивируют гриб Penici.lium согу 1 otiVi з 1 urn ИБФМ -F - 152 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и Лосфора, отделяют биомассу и выделяют эпоксиагроклавин-1 из куль- Q туральной жидкости известными метода S ми. ел

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЩИАЛИСТИЧЕСНИХ, РЕСПУБЛИН (19) (11) 3(Я) С 12 Р 17/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ; )5 — СН

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 2849353/28-13 (22) 10.12.79 (46) 23.04.84. Бюл. Р 15 (72) A.Ã.Êîçëîâñêèé, T.Ф.Соловьева, В.М.Аланин и Г.К.Скрябин (7.1) Институт биохимии и физиологии микроорганизмов AH СССР (53) 663.18(088.8) (56) 1. М.Лукнер Вторичный метаболизм у микроорганизмов, растениЯ и животных. "Мир", с.400, 1970.

2. М.Д.Машковский, Лекарственные средства. "Медицина", с.412-417,1972.

3. Т,A.Ãåíðè. Химия растительных алкалоидов. Госхимиздат, с.562-565, 1956.

4. А.М.Crider et а1, Б,Med,Chem.

20(11), 1977 (прототип). (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭПОКСИАГРОКЛАВИНА-1 формулы

О заключающийся в том, что культивируют гриб Penicillium ссгу1onhil»m

ИБФМ вЂ” à — 152 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и Аосфора, отделяют биомассу и выделяют эпоксиагроклавин-1 из куль. туральной жидкости известными метода Е ми.

955693

M-cH3

10

Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к способу получения нового химического соединения, представителю ряда эрголинов — биологически активных соединений, конкретно, эпок

5 сиагроклавину (6,8-диметил-8,9-эпоксиэрголин) Наиболее важным источником эрголиновых алкалоидов служат склероции различных видов аскомицетов рода

Claviceps, В последние годы эрголиновые производные были найдены также в грибах родов Aspergillus, Rhi—

zopus, Penicillium, причем некоторые клавиновые алкалоиды ранее не были найдены у представителей рода

Claviceps (1) .

Эта группа соединений обладает широким спектром биологической активности. Эргоалкалоиды широко применяются для получения ценных фармакологических препаратов. Так известно действие эргоалкалоидов не центральную нервную систему (2), на гладкую мускулатуру матки (3), ингибирование пролактина (4) .

Изобретение касается способа получения. нового, ранее не описанного эргоалкалоида, содержащего эпоксигруппу.

Эпоксиагроклавин прецставляет ин- 40 терес с точки зрения его биологической активности, как представитель класса аргоалкалоидов, и кроме того, является удобным объектом для получения производных эрголиновых алкалаидов. Биологическая активность

si гоалкалоидов, как правило, определяется наличием или отсутствием заместителей, а также характером этих заместителей в 8-м и 9-м положениях эрголинового ядра. В связи с этим эпоксиагроклавин, содержащий в качестве реакционного центра эпоксигруппу в положении 8,9 представляет исключительный интерес как исходное соединение для получения практически любых производных, биологическую активность которых можно варьировать, меняя характер заместителей.

Структура эпоксиагроклавиана установлена с помощью физико-химических 60 и химических методов.

Целью изобретения является получение ранее не описанного эпоксиагроклавиана микробиологическим способом. .65

Поставленная цель достиг ется тем, что в способе получения эпоксиагроклавиана-1 формулы кУльтивиРУют гРиб Pen i c i ilium corylophilum ИБФМ-F-152 на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и фосфора, отделяют биомассу и выделяют эпоксиагроклавин-1 иэ культуральной жидкости известными методами.

ГРиб P.corylophilum Dierckx ИБФМР-152 хранится в коллекции микроорганизмов ИБФМ AH СССР.

Морфологические признаки P.cory—

lophilumDierckx ИБФМ- -152.

Колонии на Чапек-агаре (10 дней, 25oC) имеют диаметр 3 см, радиально изрезанные, сначала войлочные, плотные, с развитием конидиальных структур становятся бархатистыми. Зональность выражена. Центральная часть сначала кремовая, с возрастом оливково-коричневых тонов, края более светлые, сначала бирюзового, затем серовато-зеленоватого (голубоватого) оттенка. Эксудат образуется ограниченно, в очень мелких бесцветных каплях. Запах заметный, но неопределенный. Обратная сторона коричневатоили серовато-черного цвета.

Конидиеносцы поднимаются от субстрата (в маргинальных областях) или отходят как веточки от тесно -"плетенных гиф (в других частях колонии) .

Длина варьирует от 40 до 200 м, а диаметр около 2 или 3 м. Кисточки изменяются по форме и размерам от типично бивертициллятных и ассиметричных до моновертициллятных структур.

Метулы 12-16 2-2,5 м, стеригмы 812 2 м. Конидиии округлошаровидные

2-2,5 м, гладкостенные, в длинных цепочках.

Пример . Условия культивирования Р,corylophilum Dierckx

ИБФМ-F-152.

Культуру Р.corylophium Dierckx

ИБФМ-F-152 поцдерживают в пробирках со скошенным сусло-агаром. Выращивание осуществляют в течение

5-7 дней при 24 С. Полученную культуру высеивают в колбы объемом

750 мл со 150 мл среди следующего состава, г/л: маннит — 50, янтарная кислота — 5,4, MUSD> 7Н О вЂ” 0,3, КН2Р0 -1,0, вода дистиллированная

1 л, значение рН среды доводят до

955693 .

Составитель N.Ëàðèíà

Редактор Л.утехина Техред A.Кч Корректор И.Эрдейи

«» е» °

Заказ 3878/1 Тираж 522 Подписное

ВНИИПИ ГосударствеНнОго Комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5, 2 концентрированным аммиаком, Куль тивирование проводят на качалке

24 С в течение 9 суток.

Выделение и очистка эпоксиагроклавина. 5,5 л культуральной жидкости отфильтровывают под вакуумом. Нативный раствор подщелачивают концентрированным аммиаком до рН 7,5 и экстрагируют хлороформом трижды по

1,7 л. Контроль за полнотой экстракции осуществляют с помощью реактива

Ван Урка, Объединенный хлороформенный экстракт высушивают над безводным Na

250 г, диаметр колонки 30 мл, элюент хлороформ:метанол:конц.аммиак=90: 2()

10:0 14 объем Фракций 15-17 мл. Контроль за ходом разделения осущест-. вляют методом ТСХ на пластинках

Silufol UV 254, обнаружение алкалоидов проводят с помощью реактива 25

Ван Урка. Фракции 33-122, содержа- щие эпоксиагроклавин, объединяют и упаривают в вакууме. Выход эпоксиагроклавина 494 мг, Дальнейшую очистку проводят высаживанием эпоксиагроклавина из хлороформа гексаном, Вещество дает положительную реакцию на эргоалкалоиды с реактивом

Ван Урка (фиолетовое окрашивание), является основанием, экстрагируется органическими растворителями при щелочных значениях рН. Оно хооршо растворимо в хлороформе, ацетоне, спиртах, в этилапетате, хуже — в гек-4" сане, гептане. Плохо растворяется в воде при щелочных значениях рН, легко растворимо при кислых значениях рН. Вещество вступае"; в реакции, типичные для эпоксисоединений 45

Эпоксиагроклавин представляет собой после очистки из смеси хлороформ/гексан белый аморфный порошок.

Ниже приведены его физико-химические характеристики. 50

Хроматографические характеристики

ТСХ, Silufol UV 254:метанол:хло роформ=1,4, Rf0,4, диэтиламин:хлороформ=1,9, Ry 0,61; метанол:хлороформ:конц.аммиак=20:80:0,2, R 0,61, окись алюминия (g акт) этанбл:хлороформ=4,96, К 0,48.

Масс-спектр, m /в % :154(81), 168(52),182(42), 196 (27), 197 35

211(70), 239(44), 254(100,М).

БРУтто-формула С,„Н ВN O определена масс-спектрометрйчески (Найдено 254,14189; рассчитано 254,14191).

Уф-спектр Я макс, нм (3g Е):: этанол 226(4,60), 276(3,76), 282(3,79), 292(3,72), 0,01 NHCIB спирте — 274 (3,79), 281 (3,81), 291 (3,75), 0,01 М!4аОН в спирте — 226(4,60, 276 (3,76), 282(3,79), 292(3,72).

Спектр ПМР (ССР4, Я м.а.):7,81 с(ТН,НН)7,1-6,8м.(ЗН,12-,13-, 14-Н) 6,54 с (IHc 2-Н) 3,6-2,6 м (7Н, 44, —, 4 Р, 5-, 7о .-,7$,9-,10-Н) .

ИК-спектр, (> СМ ): 3420, 2965-2800, 1625, 1610, 1475, 1450, 1350.

Данное вещество представляет прак. тический интерес как исходное соединение для получения ряда производных по эпоксигруппе, биологическую активность которых можно варьировать, меняя характер заметистелей в кольце 3 эрголина.

При нагревании эпоксиагроклавина1 в водном растворе соляной кислоты найдены продукты присоединения

HCF по эпоксигруппе 8-СЕ,9-ОН-агроклавин-1 и 8 — ОН, 9 - CE- агроклавин-1. При нагревании растворов эпоксиагроклавина-1 в этиловом спирте в присутствии катализатора происходит образование продуКтов присоединения этилового спирта по эпоксигруппе, Образование гликоля-8,9диоксиагроклавина водным раствором

Н>50<. При взаимодействии эпоксиагроклавина-1 с уксусной кислотой образуются оксиацетаты и диацетат агроклавина-1. Все перечисленные соединения получены с хорошими выходами (не менее 50%), охарактеризованы физико-химическими методами. !