Способ деконсервирования клеточных суспензий

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 13. 02. 81 (21) 3250423/28-13 (51) М. КЛ. с присоединением заявки ¹ (23) Приоритет

A 01 Ы 1/02

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УДК 611-018. .1(088.8) Опубликовано 150982. Бюллетень No 34

Дата опубликования описания 15.09.82 (72) Авторы изобретения

Н.С.Пушкарь, В.И.Вишневский, A Ã.Äóøåéêî, О.П.Маркова, В.И.Строна, Э.И.Обозная и Б.A.Ñêîðíÿêîâ / (71) Заявитель

Харьковский институт проблем криобиологии и криомедицины AH Украинской CCP (54) СПОСОБ ДЕКОНСЕРВИРОВАНИЯ КЛЕТОЧНЫХ

СУСПЕНЗИЯ

20

30

Изобретение относится к криобиологии, а именно к способам деконсервирования биологических материалов, в частности ядросодержащих клеток костного мозга.

Известен способ деконсервирования клеточных суспенэий, заключающийся в том, что клетки сначала . отогревают на водяной бане при 40 С, 0 а затем к ним добавляют для стимулирования процессов метаболизма препараты экэогенных нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) fl).

Однако известный способ обеспечивает сохранность только 68-70% клеток и не исключает компактизации клеточной суспенэии, приводящей к неравномерному распределению размороженных клеток по объему. Кроме того, необходимость введения в организм реципиента вместе с переливаемым костным мозгом биостимуляторов, стерилизация которых затруднена, создает угрозу нарушения стерильности переливной суспенэии.

Целью изобретения является повышение жизнеспособности размороженных клеток.

Поставленная цель достигается тем, что при осуществлении способа деконсервирования клеточных суспенэий путем отогрева на водяной бане на суспенэию после отогрева воздействуют ультразвуковыми колебаниями интенсивностью 0,2-0,8 Вт/см с и частотой 880-2700 кГц в течение

30 с — 3 мин.

Способ осуществляют следующим образ ом.

Клеточную взвесь, замороженную в ампулах или контейнерах, отогревают до положительных температур в бане при 40оС. После этого биологический материал в стерильных условиях переносят в стеклянный флакон, в котором на суспенэии воздействуют УЗ-колебаниями интенсивностью 0,2-0,8 Вт/см с и частотой 8802700 кГц.

Пример ° Контейнер с костным мозгом, замороженным с 15%

ПЭО-400 до -196 С, вынимают из жидкого азота и быстро в течение 5-10 с помещают в водяную баню с температурой 40 С, используя аппарат для размораживания биологических суспензий.

957811

Размораживание производят в течение 30 с до 5 С. Для равномерного отогревания внутреннего содержимого контейнер. подвергают постоянному покачиванию со скоростью 2 качания в

1 с в вертикальном направлении. 5

После этого клеточную взвесь переносят в стеклянный флакон, который размещают на ультразвуковом излучателе, обеспечив акустический контакт между преобразователем и донышком флакона, включают генератор ультразвука и обрабатывают размороженную суспензию ультразвуковыми колебаниями частотой

880 кГц и интенсивностью 0,4 Вт/см -. По истечении 3 мин генератор отклю- !5 чают. После этого определяют жизнеспособность клеток по эоэиновой пробе и количество их в 1 мкл суспензни.

Результаты деконсервации приведены в таблице.

Как видно, жизнеспособность клеток в озвученной суспенэии в среднем на 20% выше, чем в не озвученной.

При этом количество ядросодержа-. щих клеток в 1 мкл суспенэии после обработки ее ультразвуком несколько выше, чем до обработки. Это свидетельствует о том, что ультразвуковые колебания способствуют декомпактиэации клеточных ассоциатов, эа счет чего наблюдается более равномерное распределение клеток по объему суспенэии.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить процент сохранившихся в жизнеспособном состоянии клеток в среднем на 25Ъ.

957811 1

1

1 г . 1

CO 1

t

I

I !

1

+1 а (ч

<ф +1

CO Ch с с

01 а

СЧ (Ч с с

° -1 3 ЧР

Ф 00 CO

ГЧ

cl

Ю +1

О 1 о5 ца

1 о

D л

D о л о о о о л л о о о о о о

Л1 Л Л

1 1 а Й с с л

<р . +!

СО LO

CO Ф

° 3-1 . с

° -(с3

I

m 1tt ох 1 %

Ю 1

+! . с е о I

О +1 1

1 о о

Ю о о о о

Ill o

l1l CO о о о о о о о о о

CO СО О л сЧ

+1 о о о а

Ю tlat а + л

Ю

Ю

3 1 л 1

1

I

I ь

D о о о о о о а Ф

° 1 о о о о, о о. о о а

lD Ul СО

1 Л

+I е о о о

Р ) СЧ

О л(1Ч Ф! о о о о о о О Ф

1 1Ч о о о о о о о о ь о о сч (Ч П1 . Гс3

+1 1

X I

1

1

I .1 т

1

I

1

1

I

1

I

1

1

I

I

1

1 !

I

1

3

1

1 х

3-1 1

1 и о

o а 1 ц 1

L Х

1 о ,он не

u t." о х

1tI

Ж

I4 о

v с

r5

Ю о а

И

Ы

Ф

Р3 о х х

Л х

Ц Ц о о

Q,ë

Д1 х

0 Х

m o и Ф

Ф

Х

1": о

Х 1 1

Х 1 Ю ох

1tt 1 Х

Д 1 Ф Н а t цom t

Ф!ОО."!

ut O1tt

Х I И а 1

О1 1

Ц1МР

1 а

Э I O Х

a!OX

u t н

О1 OO

3:! ЦЮ

Х I 1 1

11 О ж!ох

ttl 1 Х а I Ф н

Ф1ЦОО

u I u3ox t

Х1 О133 о1 ха

М

Ф I 1 0) 1

Ц t Ф ь 1

I а

Э! ОХ ох

О1OO

3» 1 3:1 О

Х I 1 1

Х I lO I о х

rd 1 A I

Х I Э Н Я 1 а13:о 1

Ф!ио и! оФ х1 Иа о ц юЯ

1 C4 I

Ф 1 Ю Х I ц!ох

u1 н

О1OO

I ЦЮ 1

1 1

tCj 1 а 1 ох 1 х х I

<б х

m 1tt 1 ф 1 ох

C k

CO Ф л Й с с с с а л о m о о я) ф \ю Ul а а 1Р О Ф 1с3 1 ° ю ю а а

I

+t о о о о!

t 3.1 t л 1

957811

Формула изобретения

Составитель Л.Соловьев

Техред М. Надь Корректор B. Бутяга

Редактор М. Недолуженко

Заказ 6843/2 Тираж 699

БНИИПИ Государственного комитета СССР по цепам изобретений и открытий

1l3035, Москва, Ж-35, Рауиская наб., д. 4!5

Подписное

Филиал ППП Патент, г, Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ деконсервнрования клеточных суспензий путем отогрева на воцяной бане„ о т л и ч а ю щ и и я тем, что, с целью повьпаения жизнеспособности размороженных клеток, на суспензию после отогрева воздействуют ультразвуковыми колебаниями интенсивностью 0 22

0,8 Вт/см и частотой 880-2700 кГц в течение 30 с — 3 мин.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Криобиология и криомедицина. Сборник. Киев, Наукова думка, 1979, с. 57-б9,