Способ приготовления препарата живого нейрона беспозвоночного животного

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

Государственный комитет по делам изооретеиий и открытий

3(4ЧОЮЗ?М (72) Автор изобретения

ПАТАКИ ПЗО. ! ГЕХНИЧБСНЛН

БИЬЛНОТЕК4

О. С. Сотников

Ордена Трудового Красного Знамени институт физиологии им. И. П. Павлова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТА

ЖИВОГО НЕЙРОНА БЕСПОЗВОНОЧНОГО ЖИВОТНОГО

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в нейрофармакологии, нейрофизиологии.

Известен способ приготовления препарата живого нейрона беспозвоночного животного путем помещения ганглия в раствор протеолитических ферментов (1) .

Однако известный способ не позволяет сохранить целостную структуру всей нервной клетки.

Цель изобретения — сохранение целостной структуры всей нервной клетки.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу приготовления препарата живого нейрона беспозвоночного животного предварительно инъецируют 0,02—

0,05 /р-ны и раствор то го же фер мента в синусы межклеточного пространства ганглия и выдерживают его в растворе в течение 20 — 30 мин при концентрации

0,3 — 0,5 /о

Способ осуществляют следующим образом.

Внутрь синусов сосудисто-нервной системы беспозвоночного (например, Clione

1 imacina), которые омывают отдельные

2 клетки, вводят протеолитические ферменты в низких концентрациях (например, 0,02 — 0,05 /p-ная проназа ) для того, чтобы расщепить самую прочную межнейронную связь в области щели синапса, которая имеет белковую природу. После этого мозг беспозвоночного помещают в 0,3 — 0,5О/0-ную проназу, которая омывает капсулу ганглиев снаружи. Мозг выдерживают в растворе 20 -30 мин при 7 — 20 С. Затем его переносят в 0,05 — 0,5/р-ный раствор для наружной капсулы. Для этого коннективы мозга зажимают под пластамассовыми зажимами и под микроскопом типа МБС-2 производят декапсуляцию заточенными иглами, разделяя коллагеновые волокна в

1s направлении коннектив. Далее препарат переносят в морскую воду (или соответствующий раствор Рингера) . Продолжающуюся механическую препаровку на часовом стекле (без пипетирования объекта) осуществляют по ходу основных пучков нервных отростков в нейропиле и чередуют с покачиванием и промыванием объекта слабой струей раствора. Выделяют крупные и мелкие нейроны с большим количеством дендритных ветвлений вплоть до концевых

9723!!

Формула изобретения

Соста в и) ели (.. Ма:IloT HI(3

Редактор Н Безродная Тскред И. Верес Корректор Г. Огар

Заказ 8060/3 Тираж 887 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий! !3035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. проектная, 4 постсинаптических шипикоподобных структур и пресинаптических бутонов.

Пример. Морскому ангелу длиной 4 см ин ьециру(от 0,7 мл 0,05%-ного раствора

llf)0II33hl в синусну)о систему окологлото )ного первногo кольца. Препарируют нервное кольцо, состоящее из ганглиев и помещают еп) в 0,4 /0-ный раствор проназы на 25 мин для наружной обработки капсулы. Переносят препарат в 0,05%-ный раствор, закрепляк)т в чашке Петри коннективы пластмассовыми зажимами и под микроскопом

МБ(:-2 удаляют капсулу одного или двух га (глиеB. Тупыми электролитически зато (енными иглами осторожно разволокняIoT коллагеновые волокна в направлении нонн(ктив. Далее пипеткой осторожно пеР(. IIOCHT ПРCIIH!)BT I) МОРСК) IO ч(!)е (уя промывание объекта слабой струеи морской воды, с покачиванием и осторожным расплавлением, добиваются вымыва)IHB из ганглия cHd÷àëà групп интактных. !(ейронов, . а затем 6 одиночных нейроlH)H с (бхра)!едной системой дендри)чпих

IIcïN l(.Ii IIH; концевых бутонов и постсип а иГП )ЕСК I;<..ШИНИКОВ.

С помощью предлагаемого способа ocvгцествляют мягкую одновременную протеолитическу)о обработку всех структурных ко I iloH(. нтов нейрона сводя(цу/ю к MHHHvlvмх еп) травматизаци)о. В то же время проникаюпц(й B мсжклеточные и синаптич cKH( гцсли (!)(ряб! т разделяет наиболее прочную связь:.III пре- и постсинаптические компоIIOII1 IË.

f1олучгч!ный Hрепарат пригоден для дифф(:ренциа,!. цогo а)!ализа нейротропных веществ, действующих раздельно на преили постсинаптическую часть синапса, для поиска способов облегчения регенерации поврежденного синапса, определения реальной сократительной способности его компонентов. Препараты, полученные известными ранее способами, непригодны для этого.

Препарат, изготовленный предлагаемым способом, перспективен для исследования ионных токов в мембране отростков методикой фиксации потенциалов. Он является пока единственным препаратом отростка, который полностью лишен глиальной оболочки и имеет достаточные для исследования линейные размеры.

Способ приготовления препарата живого нейрона беспозвоночного животного путем помещения ганглия в раствор протеолитических ферментов, отличающийся тем, IT(), c цельк) сохранения целостной структуры всей нервной клетки, предварительно инъецируют 0,02 — 0,050%-ный раствор того же фермента в синусы межклеточного пространства ганглия и выдерживают его в растворе в течение 20 — 30 мин при концентрации 0,3--0,5%.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе !. Костенко М. Л., Вепринцев Б. Н. Выделение изолированных нейронов прудовика и их электрические характеристики.

В кн; Биофизика живой клетки вып. 3. Пу IIIH»o, !972, с. !32 )37.