Способ определения активности сукцинатдегидрогеназы в биологических объектах

 

(u>983542

ОП HCAHHE

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскнв

Социалистических

Республик (У11М g+ 3 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 12. 12. 80 (21) 3227638/28-13 с присоединением заявки М

G 0 I t> 33/50

Государственный комнтет

СССР по делам нзобретеннй н открытий (23) Приоритет—

РЗ) УДК 613.07 (.088. 8) Опубликовано 2312.82. Бюллетень йо 47

Дата опубликования описания 2312,82

В.М.Галкин, Е.М.Хватова, А.Н.Мошкова и. Т.С.Семенова :) l (72) А вторы изобретения

Горьковский медицинский институт им.С.М.Кирова (71) Заявитель (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ .АКТИВНОСТИ СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗЦ

В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ

1 2

Изобретение относится К медицине, а именно к способам биохимического исследования интенсивности дыхания и образования энергии в клетке мозга.

Известен способ определення.активности.сукцинатдегидрогеназы в биологических объектах путем измерения оптической плотности при 600 ммк

2,6-дихлорфеноли дефенола восстановлением при окислении сукцината (1). Однако известный способ длителен и не обеспечивает высокой точности.

Наиболее близким к предложенному является чисто химический способ определения активности сукцинатдегидрогенаэы в биологических объектах (2 1

Однако данный способ требует для анализа значительного времени, анализ сложен, способ не позволяет про- 2р водить комплексное определение активности сукцинатдегидрогенаэы и НАДН-дегидрогенаэы.

Целью изобретения является сокращение времени и упрощение анализа при комплексном определении активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и

НАДН-дегидрогеназы..

Эта цель достигается тем, что при осуществлении способа определения активности сукцинатдегидрогеназы в биологических объектах в пробе определяют активность НАДН-дегидрогеназы, а активность сукцинатдегидрогеназы рассчитывают по формуле у=а+Ь(х"х. )+c(x-хо) +д(x-х. ),(1)

2 где у — активность сукцинатдегидрогеназы; х — активность НАДН-дегидрогеназы в первом определении; х„ — активность НАДН-дегидрогеназы при повторном определении; а,Ь,c,d — эмпирические коэффициенты корреляционной зависимости

Способ осуществляют следующим образом.

Берут ткань мозга, в которой требуется определить активность ферментов, в том числе СДГ и НАДН-дегидрогенаэы. Обычным спектрофотометрнческим методом производят 2 замера активности НАДН-дегидрогеназы. Полу ченные данные выражают МКМ цитохрои с/мг белка митохондрий за 1 мин.

Затем по спецйальным таблицам определяют значения коэффициентов а, Ь с, d в зависимости от величины

НАДН-дегидрогеназы. Определенные

983542 у а+Ь (х-х )+с (х-x ) +d(x-x )3

2 2 2 х-х1 где х

Пример 1. Определение активности СДГ в ткани мозга здорового кролика-самца. Для определения активности СДГ ло предложенному способу в ткани мозга кролика проводят 2 замера активности НАДН-дегидрогеназы. Получают следующие результаты: активность

НАДН-дегидрогеназы при первом опреде- >0 ленки 13,4 МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий, при повторном определении - 12,8 МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий. Определ:.ат значения коэффициентов а,b, с, d для.интервала 25 значений активности НАДН-дегидро- . геназы 10,5-13,5, так как в него попадают результаты замеров. Получают следующие значения коэффициентов: a=14,5; Ь0,36; c=0,03; 30

0=0,008. Рассчитывают значения активности СДГ по формуле (1): у а+Ь(х-х „)+с(х-x „)2+d(x-x„)3=

=14, 5+0,36 (13, 4-12,8)-0,03(13, 4- $5

12 8)2-0 08(13 4 12 8)Ъ 14 690

{МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий). Для проверки проводят непосредственное экспериментальное опреде-,40 ление активности СДГ методом Поттера, результат — 14,697 ИКИ цитохрома е/мг белка митохондрий в 1 мин.

Предложенный способ применен при проведении определения активности сукцинатдегидрогеназы в 133 пробах ткани мозга при различных экспериментальных ситуациях: в нормальном состоянии организма 35 опЫтов, при гипоксии 18 опытов, при гипотермии

15 опытов, при сочетании гипоксии с гипотермией 65 опытов. При этом установлено, что предложенный способ упрощает анализ проб при комплексном определении активности сукцинатдегидрогеназы и НАДН-дегидрогеназы, так как активность определяется по результатам двух замеров, что сокращает время экспериментальных исследований.

Предложенный способ обеспечивает высокую точность. анализа, практически не отличающуюся от экспериментальных данных, и расширяет арсенал средств определения активности сукцинатдегидрогеназы.

Формула изобретения

Способ определения активности сукцинатдегидрогеназы в биологических объектах, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени и упрощения анализа при комплексном определении активности сукцинатдегидрогеназы и НАДН-дегидрогеназы, в пробе определяют активность НАДН-дегидрогеназы, а активность сукцинатдегидрогеназы рассчитывают по формуле у а+Ь(х-х.)+с(х-х.) +d(x-xÄ)

2 3 в экс; ерименте значения активности

НАДН-дегидрогеназы и найденные вели. чины а, Ь, с, d подставляют в формулу (1) и по ней рассчитывают активность СДГг

ya+b(x-х )+с(х-х„) +d(x"x„)

В особых интервалуах активности

НАДН-дегидрогеназы формула принимает вид Ъ

Пример 2. Определение активности СДГ в ткани мозга кролика,подвергшегося воздействию гипоксии. В исследуемой ткани мозга кролика, подвергшегося воздействию гипоксии, производят 2 замера активности НАДН-дегидрогеназы. Получают следующие 50 результаты: 38,2 MKM цитохрома с/мг белка митохондрий 38,1 ИКМ цитохрома c/Mã белка митохондрий. Определяют значения коэффициентов корреляционной кривой: а=20,8 b=4,93, с=0/ 55

d=-0,18. Полученные значения активности НАДН-дегидроназы и коэффициентов корреляционной кривой подставляют в формулу для определения активности СДГ: 60 у а+Ь (х-х )+с (х-х ) +d(x-х1)

t. 3

=20, 8+4, 9 3 (38, 2- 38, 1) +О (38, 2-38, 1)

-0,18(38,2-38,1) =21,293 (MKM цитохрома с/мг белка митохондрий). 65

Результат непосредственного экспериментального определения 21,287 МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий.

Пример 3 ° Определение активности СДГ в ткани мозга кролика, подвергшегося воздействию гипотермии.

В исследуемой ткани мозга кролика, подвергшегося воздействию гипотермии производят 2 замера активности НАДН-дегидрогенаэы. Получают результаты: в первом определении 24,1 MKM цитохрома c/ìã белка митохондрий, во втором определении 24, 1 МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий. Определены значения коэффициентов корреляционной кривой: а=20,675; Ь 6,36; c=-14,57;

d=45,26. Полученные результаты подставляют в формулу {1) и по ней рассчитывают активность СДГ: у=а+Ь(х-х„)+с(х-х„) +4(х-x„)

=20,675+6,36(24,1-24,1)-14,51(24,124 1) [phone] с 1)3 =20 675 (МКМ цитохрома с/мг белка митохондрий).

Результат непосредственного измерения методом Поттера 20,201 MKM цитохрома e/ìã белка митохондрий.

983542

Составитель Ю.Алмазов

Редактор И.Николайчук ТехредМ.Надь Корректор С.Шекмар

Заказ 9909/50 Тираж 887 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", г.ужгород, ул.Проектная, 4 где у — активность сукцинатдегидрогеназы; х †.активность НАДН-дегидрогеназы в первом определении; х„ - активность НАДН-дегидрогенаэы при повторном определенииф а, Ь, с, d — эмпирические коэффициенты корреляционной зависимости

Источники информацни принятые во внимание при экспертизе

1. Асатиани s ñ. Ферментные методы анализа, 1969, с. 428.

2. Лилли P. Патогистологическая техника и практическая гистохимия.

М., 1969, с. 349-358.