Способ выявления клеток панкреатических островков на гистологическом препарате

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ЯВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик п11993096 (61) Дополнительное к авт. свид-ву . (22) Заявлено 26.06.81(21) 3307177/28-13 р ц, g з с присоединением заявки Мо

G 01 N 1/28

А 61 В 10/00

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет

Опубликовано 300183. Бюллетень М4

{53) УДК 615. 475 (088. 8) Дата опубликования описания 300l.83

Л.A. Фаустов и A И. Едемский (72) Авторы изобретения

l с

Курский государственный медицинский Мнст 1тут.

-. (71) Заявитель (54) . СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ КЛЕТОК ПАНКРЕАТИЧЕСКИХ

ОСТРОВКОВ НА ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ

Изобретение относится к медицине, а именно гистологии, и может быть использовано для выявления гистоло" гических структур панкреатических островков.

Известен способ выявления клеток панкреатических островков на гисто; логическом препарате путем окрашива" ния нейтральными красителями, приготовленными по методу Бенсли и его модификациям (1).

Однако приготовление красителей занимает много времени, очень сложно, а их применение дает непостоянные результаты окраски островковых клеток.

Известен также способ выявления клеток панкреатических островков на гистологическом препарате, включающий их окрашнвание альдегид-фуксином (21 .

: Однако известный способ не .позволяет дифференцировать A- и. В- клетки панкреатических островков, кроме того, требуется проведение дополнительных окрасок, а введение в раствор альдегид-фуксина кислых красителей приводит к потере красящих свойств раствора.

Цель изобретения — дифференцирование A- и В- клеток панкреатических островков.

Укаэанная цель достигается согласно способу выявления клеток панкрватических островков на гистологическом препарате, включающему их окра шивание альдегид-фуксином, при кото1О ром окрашивание ведут в красителе состава, вес. Ъг

Альдегйд-фуксин 0,07"0,1

Этиловый спирт 90-95

Оранжевый Ж 0,1-0,1$

Вода Остальное з течение 15-20 с.

Окраску панкрватических островков проводят следующим образом.

Децарафинированные срезы поджелу2О дочной железы, наклеенные на предметные стекла белком с глицерином, окисляют в течение 15-20 с в смеси, содержащей 3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл 3%-ной серной кислоты и 44 мл дистиллированной воды.

Обесцвечивают срезы в 3%-ном растворе метабисульфита калия 15-20 с.

Промывают в дистиллированной во" зо 12М»

993096

Окрашивают в спиртовом растворе предлагаемого красителя (0,2 г сухого порошка растворяют в 50 мл 9бЪ-ого этилового спирта) в течение 15"20 мин.

Срезы промокают бумажным фильтром. 5

Препараты обеэвоживают в этиловом/ спирте и через ксилол заключают в канадский бальзам.

Результат окраски цитоплазма

В-клеток фиолетовая> цитоплазма А-кле1р ток и эритроциты оранжевые; ядра Aи В-клеток желтовато-коричневого цвета °

Пример 1. При патологоанатомическом вскрытии трупа мужчины обна- 1 ружена опухоль поджелудочной железы диаметром 0,5 см. Ткань опухоли фиксируют в 10Ъ-ном растворе нейтрального формалина в течение суток. Материал по общепринятой методике заливают в парафин. Готовят гистологические срезы толщиной 7 мкм и наклеивают их на предметные стекла белком с глицерийом. Срезы депарафинируют и окисляют их в течение 20 с в смеси из 3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл ЗЪ-ной серной кислоты и 44 мл дистиллированной воды. Затем срезы обесцвечивают в ЗЪ-ном водном растворе метабисульфита калия в течение 15 с и промыва- 3О ют в дистиллированной воде.. Срезы окрашивают в кислом спиртовом растворе предлагаемого красителя (0,2 r cy" хого красителя растворяют в 50 r

70Ъ-ого этилового спирта, подкислен- 35 ного 0,5 г соляной кислоты, удельный вес которой 1,2) в течение 20 мин, затем йромокают бумажным фильтром, обезвоживают в спиртах восходящей концентрации и через ксилол заключа- 4(1 ют в канадский бальзам.

При микроскопическом излучении гистологического препарата опухоли, окрашенного предлагаемым красителем, установлено, что цитоплазма опухоле-,45 вых клеток содержит альдегид-фуксинофильные гранулы фиолетового цвета.

Заключение: опухоль является В-клеточной.

Пример 2. При патологоанатомическом вскрытии трупа больной, страдавшей язвенной болезнью желудка, берут кусочек опухоли поджелудочной железы для гистологического исследования. Из материала, залитого в парафин, готовят среды, которые наклеивают на предметные стекла белком с глицерином. Срезы депарафинируют и окисляют их в течение 20 с в смеси из

3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл ЗЪ-ной 6О серной кислоты и 44 мл дистиллированной воды. Затем срезы обесцвечивают в ЗЪ-ном водном растворе метабисульфита калия в течение )5 с и проплывают в дистиллированной воде. Срезы 65 окрашивают в кислом спиртовом растворе предлагаемого красителя (О, 2 r сухого красителя растворяют в 50 г

70Ъ-ого этилового спирта, подкисленного 0,5 г соляной кислоты, удельный вес которой 1,2) в течение 20 мин, затем промокают бумажным фильтром, обеэвоживают в спиртах восходящей концентрации и через ксилол заключа(ют в канадский бальзам.

При микроскопическом изучении гистологического препарата установлено, что опухоль является аденомой островковой ткани солидного типа. Цитоплазма опухолевых клеток окрашена в оранжевый цвет она не содержит альдегид-фуксинофильных гранул фиолето" вого цвета, а также вакуолей.

Заключение: в поджелудочной железе имеется аденома из A-клеток, Пример 3. При вскрытии кролика через б суток после прививки в семенник опухоли Брауна-Пирс для гистологического изучения берут поджелудочную железу. Ее фиксируют в 10%ном растворе нейтрального формалина в течение суток. Ткань поджелудочной железы заливают в парафин по общепринятой методике. Приготавливают парафиновые срезы толщиной 7 мкм.

Срезы депарафинируют и окисляют их в течение 20 с в смеси из 3 мл насыщенного водного раствора марганцовокислого калия, 3 мл ЗЪ"ной серной кислоты и 44 мл дистиллированной воды. Затем срезы обесцвечивают в ЗЪном водном растворе метабисульфита калия в течение 15 с и промывают в дистиллированной воде. Срезы окрашивают в кислом спиртовом растворе предлагаемого красителя(0,2 г сухого красителя растворяют в 50 r 70Ъ-ого этилового спирта, подкисленного 0,5 г соляной кислоты, удельный вес которой

1,2)в течение 20 мин,затем промокают бумажным фильтром,обеэвоживают в спиртах восходящей концентрации и через ксилол заключают в канадский баль" зам.

При микроскопическом изучении поджелудочной железы установлено увеличение в панкреатических островках количества и размеров В-клеток и их ядер. В цитоплаэме В-клеток Уменьше" но содержание альдегид-фуксинофильных гранул фиолетового цвета.

Заключение: В-клетки находятся в состоянии гипертрофии.

Количество A-клеток, цитоплазма которых окрашена в оранжевый цвет, в островках уменьиено. Уменьшен также диаметр этих клеток и их ядер.

Заключение A""клетки находятся в состоянии атрофии.

Предлагаемый способ позволяет дифференцировать A- и В-клетки панкреатических островков. Кроме того, у»рощается и ускоряется способ окрас993096

Составитель С.Малютина

Редактор A.Ëåæíèíà Техред О.Неце Корректор В. Прохненко

Заказ 443/57 Тираж 871 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, г.ужгород, ул.Проектная, 4 кн, так как исключается необходимость последующей докраски A-клеТок и клеточных ядер, сокращается многоэтапность окраски за счет устранения процедуры дифференцировки препаратов в спиртах из-за способности красителя избирательно в разные цвета четко и чисто окрашивать В- и А»клетки,а также клеточные ядра. Краситель может быть применен в патологоанатомической практике для дифференциальной диагнос-IO тики опухолей, исходящих из разных клеток панкреатических островков,а также, в экспериментально-морфологических исследованиях для оценки морфо-функционального состояние гормонопроду- !5 цирующих клеток панкреатических островков.

Формула изобретения

Способ выявления клеток панкреатических островков на гистологическом препарате, включающий их окрашивание альдегид-фуксиногл, о т л и ч а ю щ ий с я тем, что, с целью дифференцирования я н В -клеток панкреатических островков, окрашнвание ведут в красителе состава, вес Os

Альдегнд-фуксин 0,07-0,1

Этиловый спирт 90-95

Оранжевый Ж О, 1-0, 15

Вода Остальное в течение 15-20 с.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Лилли P. Патогистологическая техника. Практическая гистохимия.

М., Мир, 1969, с. 274-279, 2. Фрайштат Д.M. Реактивы и препараты для микроскопии, М., Химия, 1980 с. 26.