Способ диагностики лимфолейкоза крупного рогатого скота

 

СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЛИМФОЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГДТОГО СКОТА по изменению интенсивности сверхслабого свечения сыворотки крови, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и расширения .диагностических средств, измерение сверхслабого свечения сыворотки крови npoaoi дят при любой фиксированной температуре в диапазоне 25 - 73°С. (Л с. 00 СП сд

„„SU„„1035517

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ. СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2866571/30-15 (22) 07.01.80 (46) 15.08,83. Бюп. № 30 (72) В. М. Медведев, Н. Ф. Северин, М. И. Бондаренко, Н. В. Кленина, А. Т. Шиков и А. И. Журавлев (71) Харьковский ордена Ленина физико-технический институт AH Украинской ССР, Украинский орцена Труцового Красного

Знамени научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии и

Московская орцена Трудового Красного

Знамени ветеринарная академия нм. К. И. Скрябина (53) 616-006:616-07(088.8) (56) 1. Лейкозы сельскохозяйственных животных. М., "Колос", 1975, с. 82-85.

2. Доронин Н. H. и цр. Лейкоз крупного рогатого скота. Киев, "Урожай, 1969, с. 55.

3. Авторское свицетельство СССР № 618411, кл. С 12 К 1/00, А 61 В 10/00, 1978.

4. Авторское свицетельство СССР № 595672, «л. G 01 N 33/48, 1978, Зсю » 01 H 33/48; A 61 8 10/00 (54) (57) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ

ЛИМФОЛЕЙКОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО

СКОТА по изменению интенсивности сверхслабого свечения сыворотки крови, отличающийся тем,что,с целью повышения точности и расширения . циагностических средств, измерение csepx« слабого свечения сыворотки крови прово цят при любой фиксированной температуре в диапазоне 25 - 73 С.

Отличие считается значимым, если оно по абсолютной величине превышает tS„ где величина t выбирается из распрецеления Стьюцента с целью получения ошиб ки первого роца, не превышающей занан» ный уровень значимости. Так как контроль ное и опытное распределений перекрыва ются, и уменьшение уровня значимости приводит к росту ошибки второго portaÄ увеличивать беспрецельно уровень значи мости нельзя. В исследованиях используются значения 4 =2, обеспечивающие вероятность ошибки первого роца не более 10% при п7 5, 1 . 10355

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к области цйагностики лей коза сельскохозяйственных животных.

Ивестен гематологический метод циаг» ностики лимфолейкоэа КРС путем учета количественных и качественных изменений лейкоцитов крови с использованием известных критериев, так называемых

"дейкозных ключей". Значительное увеличение количества лейкоцитов и процента 10 лимфоцитов служит одним иэ существенных признаков лейкоза t. 1 1 .

Одна.ко данный способ циагностики лейкоза с использованием различных ,"лейкозных ключей" нецостаточно эффективен, характеризуется низкой специфичностью. Совпацаемость его положительных результатов на лейкоэ не превышает 5060%. Эти нецостатки обусловлены чреэвы чайной вариабельностью гематологичес ких показателей при лейкозе: цо 75% больных лейкозом животных имеют сублейкемическую картину крови (незначи- тельное увеличение количества лейкоцитов); 5-10% - алейкемическую (количество лейкоцитов не увеличено) Г2) .

Известен способ циагностики лимфолейкоза. крупного рогатого скота, включающий обнаружение в крови животных

30 ,онкориа-вируса типа С с помощью цитотоксической реакции ï si

Однако данный метод требует получения онкориа-вируса в очищенном и концентрированном виде и гипериммунных сывороток на кроликах, что является сложной и длительной операцией.

Наиболее близким к прецлагаемому является способ циагностики злокачественных новообразований путем облучения об» разца плазмы крови ультрафиолетовым светом при 0 С с послецующей регистра- 45 о .цией его .послесвечения. По кинетике кривых послесвечения судят о наличии злокачественных новообразований у люцей Г4 3 °

Оцнако известный способ включает цополнительные операции: охлаждение образца плазмы крови и ультрафиолетовое облучение. Кроме того, постановка диагноза по данному методу основана на .анализе лишь. одного параметра — кинети- 55 ке кривых послесвечения, что снижает точность постановки диагноза, не устраняет влияние изменения .чувствительности

17 . 2 устанОВки ВОзмОжных сеэ киных и геогp& фических колебаний состава плазмы крови животных.

Известен также способ, основанный на явлении хемилюминисценции сыворотки крови и более низкой интенсивности хеми« люминисценции сыворотки при лейкозе в интервале 20 - 45 С. о

Бель изобретения - повышение точнос ти диагностирования лимфолейкоза круп ного рогатого скота и расширение циагностических срецств.

Бель постигается тем, что согласно способу диагностики лимфолейкоэа крупного рогатого скота по изменению интенсивности сверхслабого свечения сыворо1 ки крови измерение послецнего провопят при любой фиксированной температуре

В циапаэоне 25 - 73 C. о

На чертеже прецставлена температур ная зависимость сверхслабого свечения сыворотки крови животных.

Повышение нацежности диагностики согласно прецлагаемому способу постигается измерением сверхслабого свечения сыворотки крови. крупного рогатого скота при фиксированной температуре о из циапаэона температур 25-73 С, имеющую наибольшие отклонения, и при отличии интенсивности свечения от срецнего свечения контрольной группы заключают о наличии лейкоза. Иля этого вычисляется величина выборочной цисперсии (32) контрольной группы по форму ле

fl и величина свечения. с и 1 при выбранной фиксированной температуре цля данного опыта; - число животных., 1035

Время исслепования сокрашается

qo 25 мин за счет более быстрого изменения интенсивности сверхслабого свечения всего лишь в одной точке темпера турной кривой и более быстрого принятия решения.

Дальнейшее повышение нацежности обеспечивается изменением значений интенсивности при трех фиксировайных значениях темпеуатуры из циапазона температур 25-73 С и вычислением коэффициента формы кривой К4 по формуле

Т -Т Т -T г г з 2 2 г

2 1 T =T Э Т,Т.(15 где Т - меньшее из значений темпера1

T// pb

Т - срецнее из значений темпера2 туры;

Т - большее из значений темпера- 20

3 ту ры;

3 3 - значения интенсивностей сверх14 2I 3 слабого свечения при этих температурах соответственно.

Как установлено экспериментально, оптимальными значениями Т„, Т, Т оказалось 33; 50 и 67 С соответственно.

Поскольку берутся равноотстоящие цруг от цруга значения температур, то З0 формула для коэффициента формы кривой упрощается г д

/ зь ь

При этом если температурная зависимость сверхслабого свечения представляет собой экспоненту, то К = 1; большие значения К соответствуют кривым, растущим медленнее экспоненты, меньшие — быстрее.

ЕЬшение . о заболеваемости лимфолейкозом принимается если 40 гце lC - конффициент формы цля животного, подозреваемого на лейкоз;

К - среднее контрольной совокупности;

5 - дисперсия контр льной совоку - 45 ности;

+=Я .

Для проведения исследования используют сыворотку крови крупного рогатого

Скота, полученную стандартным способом, g0 к которой добавляется окисленный агент.

Берут 3 мл сыворотки, развеценной физиологическим раствором по 6%-ного со..держания белка, на которую наслаивают 1 мл олеиновой кислоты. Сверхслабое свечение регистрируют при помощи известной установки. Объект помешают в термостатированный бокс. Установка работает в

517 4 режиме счета фотонов, интенсивность потока вывоцят на стрелочный и пересчетный приборы, регистрируют на самописце температурную зависимость интенсНВНосТН потока фотонов сверхслабого свечения пвухслойной системьп сывороч ки крови KPC - олеиновая кислота.

Кривые контрольной совокупности об . рабатывают слепуюшим образом. Получают усрецненную кривую температурной зависимости сыворотки крови зцоровых животных и границы разброса кривых, срецнее и дисперсию контрольного распре- . деления цля значения интенсивности при 73 С и из значений интенсивности о при 33, 50 и 67 С вычисляют «оэффициент формы кривой.

Для получения паоаметров контрольного распределения исследуют сыворотку крови зцоровых коров с нормальными гематологическими показателями из благополучных по лейкозу и цругим инфек« ционным заболеваниям хозяйств, На 3 мл сыворотки крови наслаива ют 1 мл опеиновой кислоты и получа1от как,температурные зависимости сверкслабого свечения указанной сыворотки, так и значения интенсивности свечения при температурах ЗЗ, 50, 67, 73 С, при помощи вьциеуказанной установки.

Как установлено экспериментально кривые температурных зависимостей, интенсивности сверхслабого свечения сыворотки контрольных животных проходят близко цруг от цруга, максимальные от личия между кривыми не превышают 20% максимального значения. Следовательно, может быть предложен критерий заболевания, заключающийся в том, .что кривая температурной зависимости сыворотки кро- . ви животного, подозреваемого на лейкоз, выхоцит из области вариаций температур- . ных кривых нормальных животных.

Срепнее значение интенсивности при температуре 73 С составляло Э - -(3,85+

-Ю,16). 10 имп/с, при этом писйерсия контрольного р спр деления - 73=0,12 10

Таким образом, . . - 15=3,85 10-2-0, 12-10 =3, 15-10, 3- + 4 S =3,85 10Ъ- О, 12 10=4,55 10 и может быть предложен критерий забо левания, заключающийся в том, что значение интенсивности свечения сыворотки крови животного, подозреваемого на лейкоз, при 73 С ниже 3,15 10 имп/с или выше 4,55. 10 имп/сек, Срецний коэффициент формы контрольной совокупности К=0,90+0,07. При этом

17 б т.е. допущена ошибка при диагностике 20%; оказалось выше доверительной границы цля К 90% значений К, т.е. допущена ошибка при циагностнке 10%, Таким образом, наряду с уменьшением времени, необходимого для обнаружения лейкоза, имеется воэможность провоцить исследования большого обьема, эффективно отсеивая больной крупный рогатый скот, оэдоравливая поголовье стада, Возможно построение на основе предлагаемого изобретения переносной установки, позволяющей диагностировать лимфолейкоэ крупного рогатого скота в полевых условиях.

Кроме того, применение диагностики по по коэффициенту формы кривой (К) позволяет повысить надежность результатов не только за счет их обьективиэации, но и за счет уменьшения влияния таких факторов как изменение чувствительности прибора, сезонные колебания состава сыворотки крови и др.

5 10355 дисперсия контрольного распределения

5> «0,026, таким образом

К»4 В "0,90-2Я,ОГ6=0,58, КфtS",0,90+2%,026 1,22 и может быть предложен критерий заболевания, заключающийся в том, что значение коаффициента формы кривой сыво» ротки крови животного подозреваемого на лейкоэ, ниже 0,58 или выше 1,22.

Проводилось, исследование сыворотки 1О ф крови коров, признанных по клиническим, гематологическим, патологоанотомическим и гистологическим показателям больными лимфолейкоэом. Измерялись те же пара.метры, что и для контрольных животных 15 и сравнивались с контрольным распределением. Зкспериментально получены сле цуюшие результаты: из исследованных кри вых больннх животных 90% вышли из

1области вариаций контрольных кривых, >о

1 т.е. при диагностике указанным способом допушена ошибка 10% из доверительных границ при 73 С вышли 80% значений>

g фИ. ОД) 10 20 Л

Заказ 5824/45 Тираж 873 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-З5, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент", r. Ужгороц, ул. Проектная, 4

Составитель A. Макаров

Рецактор B. Ковтун Техред И.Метелева Корректор О. Тигор