Способ определения церулоплазмина в сыворотке крови

 

Изобретение относится к биохимии , в частности к клиническим лабораторным исследованиям. Цель изобретения - повышение точности способа при длительном хранении проб за счет добавления к пробе раствора этония в ацетатном буфере. Для этого в две опытные и одну контрольную пробирки вносят 2 МП ацетатного буфера, 0,1 мл исследуемой биологической жидкости и 0,1 мл 0,4-1,2%-ного раствора этония в ацетатном буфере. Пробы взбалтывают , закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при . В последукицие 120 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. Затем не позже 120-го дня определяют активность церулоплазмина во всех пробах, на что затрачивается значис тельно меньше рабочего времени. 2 табл. (Л

СО)ОЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

А1 (19) (И) (5)) 4 G 01 N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

СО

Ю

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3801787/28-14 (22) 09. 10.84 (46) 30. 11.86. Бюл. ¹ 44 (71) Черновицкий государственный медицинский институт (72) Г.M.ßðìoëü÷óê (53) 612.015.1 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР № 991303, кл. G 01 N 33/48, 1983. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к биохимии, в частности к клиническим лабораторным исследованиям. Цель изобретения — повышение точности способа при длительном хранении проб за счет добавления к пробе раствора этония в ацетатном буфере. Для этого в две опытные и одну контрольную пробирки вносят 2 мп ацетатного буфера, О, 1 мп исследуемой биологической жидкости и 0,1 мл 0,4-1,27-ного раствора этония в апетатном буфере. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при 5-10 С. В последующие

120 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике.

Затем не позже 120-ro дня определя. ют активность церулоплазмина во всех пробах, на что затрачивается значительно меньше рабочего времени.

2 табл.

800

1 1273

Изобретение относится к биохимии, в частности к клиническим лабораторным исследованиям.

Целью изобретения является повышение точности способа при длительном хранении проб за счет добавления к пробе раствора этония в ацетатном буфере.

Способ осуществляется следующим образом. 1О

В две опытные и одну контрольную пробирки вносят 2 мл ацетатного буфера, О, 1 мл исследуемой биологической жидкости и 0,1 мл 0,4-1,27.-ного раствора этония в ацетатном буфе- 15 ре. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при температуре 5-10 С. В последующие 120 дней аналогично подготовленные пробы на- 20 капливают в холодильнике. На 120-й день или в любой удобный для научного работника день, но не позже 120го дня, определяют активность церулоплазмина во всех пробах, на что затрачивается значительно меньше рабочего времени.

Пример. В две опытные и одну контрольную пробирки вносят 2 мл ацетатного буфера, 0,01 мп исследуе- 3О о мой биологической жидкости и 0,1 мл раствора этония. Пробы взбалтывают, закрывают резиновыми пробками и помещают на хранение в холодильник при 5-10 С. В последующие 120 дней аналогично подготовленные пробы накапливают в холодильнике. На 120-й или в любой удобный для научного работника день, но не позже 120-го дня, определяют активность церулоплазмина во всех накопившихся пробах, для чего в контрольные пробирки добавляют 1 мл раствора сульфита натрия и взбалтывают их содержимое. Во все пробирки вносят по 1 мп и-фенилендиамина, встряхивают и помещают их в водяной ультратермостат с температурой 37 С на 60 мин, взбалтывая их через каждые 2-5 мин. При этом церулоплазмин Взаимодействует с пфени лендиамином и превращает его в продукт синего цвета. Через 1 ч во все пробирки приливают по 7 мл н-бутилового спирта, в результате чего останавливается ферментативная реакция в опытных пробирках. Пробирки закрывают пробками, интенсивно встряхивают

30 с, помещают в ледяную баню на

10 минут, после чего центрифугируют со скоростью 1500 об/мин в течение

10 мин, отсасывают верхнюю бутаноловую фазу, переносят ее в кювету с толщиной рабочего слоя 10 мм и колориметрируют на ФЭК при длине световой волны 582 нм (фильтр Р 7) . Для выражения активности церулоплазмина в условных единицах среднюю арифметическую величину экстинкции, полученную при колориметрии двух параллельных опытных проб против контроля, умножают на 100 и делят на количество миллиграммов белка, содержащегося в 0,1 мл биологической жидкости. Содержание белка определяют по одной из известных методик.

В табл. 1 представлена зависимость экстинкции проб при определении активности церулоплазмина по известному способу (сыворотка Р 4) от сроков хранения проб, состоящих из

2 мл ацетатного буфера и О, 1 мл сыворотки крови человека, в холодильнике при 5-10 С.

В табл. 2 приведены экстинкции, полученные по предлагаемому способу в разные сроки хранения, проб, состоящих из 2 мл ацетатного буфера, О, 1 мл сыворотки крови и 0,4 мл этония.

Проведенные эксперименты в процессе испытаний предлагаемого способа подтверждают его экономический эффект, выражающийся в значительном снижении себестоимости одного анализа на активность церулоплазмина. Использование предлагаемого способа существенно экономит рабочее время научного сотрудника, а также затраты электроэнергии и облегчает выполнение научной работы.

Формула изобретения

Способ определения церулоплазмина в сыворотке крови путем добавления кпробе растворап-фенилендиамина, экстракции продукта реакции н-бутанолом с последующим фотометрическим измерением экстракта, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа при длительном хранениипроб,к пробе предварительно добавляют 0,4-1,5 -ный раствор этония в ацетатном буфере.

1273800

Таблица 1

Срок хранения, дни

Сыворотка, В

День забора 1

25

30

0,68 0,67 0,62 0,55 0,48 0,45 0,42 Пробы разлагаются

0,75 0,75 0,62 0,50 0,60

0,50 0,45

0,71 0,70 0,64 0,58 0,50 0,45 0,45

0,40 0,40

0,40 0 35

0,40 0,40

0,55 0,50 0,52 0,50 0,45

0,68 0,65 0,60 0,50 0,50

0,81 0,75 0,70 0,50 0,45

0,70 0,67 0,60 0,54 0,50 0,43 0,41

0,04 0,04 0,02 0,02 0,02 0,02 0,02. >0,5 (0,05 (0,01 (0,001 <0,001 (0,001

Таблица 2

Срок хранения, дни

Сыво120

60 80

100

140

0,67

1 0,68 0,65

0,66

0,63 0,65 0,70

0,65 0,42

0,70 0,38

0,73 0,43

0,75 0,77 0,75

0,70 0,75 0,77 0,77

0,60 0,70 0,75 0,73

0,60 0,55 0,62 0,62

0,71 0,65

0,68

0,55 0,55 0,57

0,57

0,70 0,70 0,73

0,65

0,68 0,70

0,72

0,70

0,81 0,75 0,80

0,75, 0,80 0,85 0,83

0,80 0,27

0,68 0,36

0,70 0,68 0,70 0,66 0,69 0,74 .0,72

0,03 0,04

0,03

0,02 0,04 0,03

0,03

0,03

0,04

)0,2 )0,5 >0,2 >0,5

>0,5

>0,5 (0,001

>0,5 ротка, У День забора 15

0,29

0,38