Индикаторная среда для определения оксидазной активности aerococcus viridans

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для идентафикации бактерий AerococcuSj viridans. Цель изобретения - повышение точности определения за счет стабилизации цветной реакции. Индикаторная среда состоит из двух слоев: первый слой - индикаторный , содержащий калий йодид, натрий селенит, крахмал и агар-агар; второй слой - ростовой, содержащий набор минерсшьных солей, витамины, аминокислоты, селективные агенты, глюкозу и агар. Компоненты индикаторной среды перемешивают в 1 л дистиллированной воды, расплавляют, стерилизуют и разливают в чашки Петри.После застывания на индикаторный слой наслаивают ростовой слой в количестве 10 мл. Ростовой слой готовят аналогично индикаторному. После застьшания среду засеивают исследуемыми микроорганизмами. Цветную раакцию учитывают через 18-22 ч, диаметр цветной зоны 4-6 мм, срок сохранения цветной реакции 7-14 сут. 1 табл. с е (Л 00 СП ;О ОО

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

C0LlHAËÈÑÒÈ×ЕСНИХ

РЕСПУБЛИК (50 4 С 12 Q 1/04 // (С 12 Q 1/04, С 12 В 1:01) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTQPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

hO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21} 4092913/31-13 (22) 16;07.86 (46) 15.12.87. Бюл. Р 46 (» ) Днепропетровский медицинский институт . (72) Г.Н.Кременчуцкий (53.) 576.8.093.1 (088.8) (56) Кременчуцкий Г.Н. Питательная. среда1для обнаружения перекиси водорода, продуцируемой микроорганизмами: Сб. Актуальные вопросы инфекционной патологии. Днепропетровск, 1983, с, 26-27.

АвтОрское свидетельство СССР

У 1253145, кл. С 12 Q 1/04, 1984. (54) ИНДИКАТОРНАЯ СРЕДА ДЛЯ ОПРЕДЕ

ЛЕНИЯ ОКСИДАЗНОИ АКТИВНОСТИ AEBOCOC-

CUS VIRIDANS (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для идентификации бактерий Aегоcoccus„ virilans, Цель иэобSU 1359301 А1 ретения — повышение точности определения за счет стабилизации цветной реакции. Индикаторная среда состоит из двух слоев: первый слой — индикаторный, содержащий калий йодид, натрий селенит, крахмал и агар-агар; второй слой — ростовой, содержащий набор минеральных солей, витамины, аминокислоты, селективные агенты, глюкозу и агар. Компоненты индйкаторной среды перемешивают в 1 л дистиллированной воды, расплавляют, стерилизуют и разливают в чашки Петри.Пос" ле застывания на индикаторный слой наслаивают ростовой слой в количестве 10 мл, Ростовой слой готовят аналогично индикаторному. После застывания среду засеивают исследуемыми микроорганизмами. Цветную реакцию учитывают через 18-22 ч, диаметр цветной эоны 4-6 мм, срок сохранения цветной реакции 7-14 сут. 1 табл, .1359301

Калий йодид

Натрий селенит

Крахмал растворимьй

Агар-агар

20,0

0,4

10,0

12,0

Смесь энергично перемешивают и расплавляют, стерилизуют при 1 ат

30 мин. Стерильную смесь разливают в чашки Петри по 10 мл, Чашки Петри экспонируют при комнатной температу

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для идентификации бактерий Аегосoccus viridans, Цель изобретения — повышение точности определения за счет стабилизации цветной реакции.

Среду готовят следующим образом.

Для приготовления ростового слоя в 1 л холодной воды последовательно растворяют компоненты, смесь энергично перемешивают и расплавляют.Стерилизуют при 1 ат 30 мин. Стерильную смесь разливают в чашки Петри со 15 сформированным индикаторным слоем по 10 мл. При застывании смесь фор- мирует ростовой слой синтетической индикаторной среды для Aегоcoccus

v г йап.;. Смесь для ростового слоя 20 может храниться в рефрижераторе в течение 4-8 нед.

Для приготовления индикаторного слоя в 1 л холодной дистиллированной воды последовательно растворяют компоненты, смесь энергично перемешивают и расплавляют, Стерилизуют при

1 ат 30 мин. Стерильную смесь разливают в чашки Петри по 10 мл, При эастывании смесь формирует индикаторный слой среды. Смесь для индикаторного слоя может храниться в рефрижераторе о при 4 С в течение 4-8 нед, Пример 1, Для приготовления индикаторной среды вначале готовят смесь для индикаторного слоя и формируют индикаторный слой разливанием расплавленной стерильной смеси по

10 мл в чашки Петри, После застывания индикаторного споя на него нас- 40 лаивают расплавленную, стерильную смесь для ростового слоя в количестве 10 мл. После застывания ростового слоя среда готова к использованию, Дпя приготовления индикаторного g5 слоя в 1 л холоцной дистиллированной воды последовательно растворяют, r: ре вплоть до полного застывания индикаторного слоя.

Для приготовления ростового слоя индикаторной среды в 1 л холодной дистиллированной воды последовательно растворяют, г:

Аммоний

3,0

0,6

1,4 хлорид

Аммоний нитрат

Натрий сульфат

Калий водородфосфат

Калий диво-дородфосфат

Магний сульфат

Марганец глицерофосфат

Натрий хлорид

Грамурин

Этоний

Никотиновая

2 2

0,6

0,06

0,3

12,5

0,025

0,001

0,04

0,0008 кислота

Биотин

Кальций панто0,8 тенат

Рибозо-5-фосфат

L-Глутаминовая кислота

DL-Валин

Инозит

Глюкоза

Агар-агар

0,008

0,4

0,0005

0,01

0,01

12,0

На поверхность готовой среды про изводят посев суспензии суточной культуры Aегоcoccus viridans (Mycococcus hypегоxydans) GK308v.о. из расчета 20-50 колониеобразующих еди ниц на 1 чашку со средои. Посевы инкубируют в термостате при 37 С. Через 18-22 ч производят учет цветной реакции среды на оксидазную активность Aегоcoccus viridans (Mycococ.cus hypегоxydans) GK308v.о.

Пример 2, Среду готовят в со. ответствии с примером

Для приготовления индикаторного слоя в 1 л холодной дистиллированСмесь энергично перемешивают и расплавляют, стерилизуют при 1 ат в

30 мин. Стерильную смесь по 10 мл наслаивают на готовый индикаторный слой в чашках Петри. Чашки Петри экспонируют при комнатной температуре вплоть до полного застывания ростового слоя

1359301 ной воды последовательно растворяют, г:

26,0

Калий йодид

Натрий селенит 0,5

Крахмал растворимый 15 0

Агар-агар 15,0

Для приготовления ростового слоя индикаторной среды в 1 л холодной дистиллированной воды последовательно растворяют, r:

4,0

0,6

1,6

Аммоний хлорид

Аммоний нитрат

Натрий сульфат

Калий водородфосфат

Калий диводородфосфат

Магний сульфат

Марганец глицерофосфат

Натрий хлорид

Грамурин

Никотиновая

2,4

0,8

0,08

0,4

15,0

0,03

0,05

0i0008 кислота

Биотин

Кальций пантотенат 1,0

Рибозо-5-фосфат 0,01

1г-Глутаминовая кислота 0 5

Р В алин 0,001

Инозит 0,02

Глюкоза 0,02

Агар-агар 13,0

На поверхность готовой среды про изводят посев суспензии суточной культуры Aегоcoccus viridans (Mycococcus hypегоxydans) GK308v,о. из расчета 20-50 колониеобразующих единиц на 1 чашку со средой, Посевы ино кубируют в термостате при 37 С. Через 18-22 ч производят учет цветной реакции среды на оксидазную активность Aегоcoccus viridans (Mycococcus hypегоxydans) GK308v.о.

Пример 3. Среду готовят в соответствии с примером 1.

Для приготовления индикаторного слоя в 1 л холодной дистиллированной воды последовательно растворяют,г:

Калий йодид 32,0

Натрий селенит 0,6

Крахмал растворимый 20,0

Агар-агар 17,0

Для приготовления ростового слоя индикаторной среды в 1 л холодной дистиллированной воды последователь5 но растворяют, г:

5 0

1,0

1,8

Аммоний хлорид

Аммоний нитрат

Натрий сульфат

Калий водородфосфат

Калий диводородфосфат

Магний сульфат

Марганец глицерофосфат

Натрий хлорид

Грамурин

Этоний

Никотиновая

1О

2,6

1,0

0,1

0 5

17,5

0,035

0,003

0,06

0,0012

Сравнительная хараКтеристика цветной реакции известной и предла

45 гаемой сред на оксидазную активность Aегоcoccus viridans (Mycococcus hypегоxydans) GK308v.о. приведена в таблице.

Использование индикаторной среды для оценки оксидазной активности

Aегоcoccus viridans позволяет получить более раннюю цветную реакцию (через 8-12 ч инкубации культуры вместо 24-48 ч при использовании известной среды), получить цветную ре. акцию у 85-97Х выросших колоний вместо 50-60Х при использовании известной среды, уменьшить колебания кислота

Биотин

Кальций пантотенат 1,2

Рибозо-5-фосфат 0,012

Ь-Глут ами нов ая кислота 0,6

DL-Валин 0,0015

Инозит 0i03

Глюкоза 0,03

Агар-агар 14,0

На поверхность готовой среды про изводят посев суспензии суточной культуры Aегоcoccus viridans (Mycococcus hypегоxydans) GK308v.о. из расчета 20-50 колониеобразующях еди ниц на 1 чашку со средой, Посевы ин» о кубируют в термостате при 37 С, Через 18-22 ч производят учет цветной реакции среды на осидазную актив40 ность Aегоcoccus viridans (Mycococcus hypегоxydans) GK308v.о.,1359301

l 0-2О

12-17

I л слой:

3-5

0,6-1 !,4-1,8

2,2-2,6

0,6-!

0,06-0,1

0,3-0,5

0,025-0,035

0,0008-0,0012

0,8-1,2 кальция

Рибозо-5-фосфат

Инозит

Никотиновая

09008-0,012

0,01-0,03

0,04-0,06

0,0005-0 0015 кислота

DL-Валин .Ь-Глутаминовая кислота

Глюкоза

0,4-096

0901 0903

0,001-09003

Этоний

Хлорид натрия

Агар-arap

Дистиллированная вода

1295 1795

12-14

1 л

Среда

Известная Иредлагаемая

24-48 8-12

50-60 85-97

4-6

2-3 цветной эоны вокруг колоний, достигающей 4-6 мм вместо 0-2 мм при использовании известной среды, удлинить срок сохранения оксидазной ре5 акции при инкубации культур в термостате и при их хранении при комнатной температуре до 7-14 сут вместо

2-3 сут при использовании известной среды. l0

Формула изобретения

Индикаторная среда для определения оксидаэной активности Aегоcoccus

vi.ridans, содержащая в нижнем индикаторном слое растворимый крахмал, иодид калия, селенит натрия, агарагар и дистиллированную воду, в верхнем ростовом слое — глюкозу, этоний, хлорид натрия, агар-агар, источник азота и .дистиллированную воду, о т - 20 л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения точности определения оксидазной активности за счет стабилизации цветной реакции среды, верхний ростовой слой дополнительно со- 25 держит сульфат натрия, однозамещенный фосфат калия, двуэамещенный фосфат калия, сульфат магния, глицерофосфат марганца, грамурин, биотин, пантотенат кальция, рибоэо-5-фосфат, ЗО иноэит, никотиновую кислоту, в качестве источника азата -- хлорид аммония9 нитрат аммония, DL-валин и Хглутаминовую кислоту при следующем соотношении компонентов9 г/q,:

Нижний индикаторный слой:

Иодид калия 20-32

Селенит натрия 0,4-0,8

Характеристика стабильности цветной реакции среды

Время появления цветной реакции, ч

Количество колоний популяции испытуемого штамма с цветной зоной окраски среды, %

Диаметр зоны цветной окраски среды вокруг колоний через

24 ч инкубации, мм

Срок сохранения цветной реакции среды при температуре инкубации или комнатной температуре, сут

Растворимый крахмал

Агар-агар

Дистиллированная вода

Верхний ростовой

Хлорид аммония

Нитрат аммония

Сульфат натрия

Однозамещенный фосфат калия

Двуэамещенный фосфат калия

Сульфат магния

Глицерофосфат марганца

Грамурин

Биотин

Пантотенат