Способ определения активности аргиназы мозга

 

Изобретение относится к биохимии . Цель изобретения - повьшение чувствительности и ускорение способа. Биологическую жидкость обрабатывают раствором формальдегида, наносят на сефадекс G-75, пpo ывaют и центрифугируют . Раствор аргинина наносят на колонку и затем колонку раствором трихлоруксусной кислоты. Способ может быть использован для диагностики неврологических заболеваний . СО СП СО -vj ю

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„.SU„„1359742 А 1 дц 4 G 01 N 33/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTHA

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ

АРГИНАЗЫ МОЗГА (57) Изобретение относится к биохимии. Цель изобретения — повьппение чувствительности и ускорение способа.

Биологическую жидкость обрабатывают раствором формальдегида, наносят на сефадекс G-75, промывают и центрифугируют. Раствор аргинина наносят на колонку и затем промывают колонку раствором трихлоруксусной кислоты.

Способ может быть использован для диагностики неврологических заболеваний. (21) 4054558/28-14 (22) 10,04.86 (46),15.12.87. Бюл. Р 46 (71) 1-й Московский медицинский институт им. И.M.Ñå÷åíîâà и Научноисследовательский институт неврологии AMH СССР (72) У,Т.Хаджимухамедов, Н.В.Лебедев, А.П.Xoxztoa, Т.С.Баскаева, И.А,Завалишин и 3.Г,Ларский . (53) 6)2.0)5 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

У 1212417, кл. G 0) N 33/48, 1984.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

1 135

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и неврологии.

Цель изобретения - повышение чувствительности и ускорение способа.

Способ осуществляют следующим образом.

1 мл биологической жидкости обрабатывают раствором формальдегида в конечной концентрации 0,1-0,3 М (в зависимости от вида биологической жидкости). На колонки центрифугирования размером 5 см (контроль и опыт) с набухшим сефадексом С-75 наносят по 1 мн раствора обработанной жидкости, колонку 2-3 раза промывают 2 мл 2Х-ным раствором хлористого калия, центрифугируют при 700g в течение 10-15 с, Далее, через опытную пробу пропускают 1 мп раствора,(содержит !00 мкм аминокислот) аргинина, после чего продукты реакции, оставшиеся на сефадексе, смывают 1 мл 15Х-ной трихлоруксусной кислоты (ТКУ) (в контрольную пробирку вносят 1 мп водного раствора аргинина) .

При определении мочевины в химические пробирки вносят 0,5 мп пробы (контроль H oIIblT) добавляют

2 мл рабочего раствора и ставят в кипящую баню на 15 мин, Затем пробу охлаждают в воде, измеряют оптическую плотность на спектрофотометре

СФ-24 при длине волны 525 нм, Пример 1, 1 r ткани мозга (большие полушария) кролика гомогенизировали в 9 мп 0,01 М раствора трис-буфера с содержанием хлористого калия в конечной концентрации

130 мкм молей; центрифугировали 10 мин IIpH 10 тысообв В мин надосйдок обрабатывали 10Х-ным раствором формальдегида до конечной концентрации 0,3 ммоля/мп, 2 мп центрифугата наносили на колонку размером 5 ° 1 см с приспособлением для центрифугирования; дважды (для удаления балластной аргиназы) промывали колонку раствором хлористого калия (240—

250 мкмолей), центрифугировали, вносили водный раствор аргинина (100 мкмоль), промывали колонку 1 мп

15Х-ного раствора ТХУ.

Содержание мочевины в надосадочной жидкости определяли с использова-. нием стандартных наборов фирмы "Ла9742 2

55 хема" (ЧССР) . Активность фермента после обработки предлагаемым методом составила 2,1 ед,/г ткани.

Пример 2. В крови здоровых людей имеется только печеночно-почечная форма фермента. Исследуемая мозговая форма фермента не присутствует в крови, В то же время активность мозговой формы фермента удалось выявить в крови больных с нарушением мозгового кровообращения, у которых зта форма фермента переходит в кровь, что видно из следующих данных, Больной Б., 50 лет. Поступил с диагнозом острое нарушение мозгового кровообращения в бассейне правой сред. ней мозговой артерии на фоне атеросклероза магистральных артерий головы. В неврологическом статусе: заторможенность, левосторонний гемипарез, двусторонний симптом Кернига, симптомы орального автоматизма, патологические симптомы Бабинского слева и Оппенгейма справа, Динамика активности мозговой формы аргиназы в крови: от 2 ед./л в первые сутки увеличилась до 8 ед,/л на 10-й день и до 22 ед./л на !5-й день от начала заболевания. На 29-й день, когда исчезли патологические пирамидные знаки и симптом Кернига, восстановилась двигательная активность в пораженных конечностях, активность мозговой формы фермента не определялась.

В случаях неблагоприятного течения активность мозговой формы фермента изменялась незначительно.

Больная Л., 63 r. находилась в

НИИ неврологии АМН СССР с диагнозом острое нарушение мозгового кровообращения в бассейне левой средней мозговой артерии. Левосторонний гемипареэ, Повторные тромбоэмболии мелких ветвей легочных артерий. Ревматический митральный порок сердца. Нарушение сердечноro ритма.

В неврологическом статусе при поступлении отмечался сопор, симптом

Кернига с 2-х сторон, нарушение дыхания типа Чейн-Стокка, сходящееся косоглазие, нарушение глотания, снижение чувствительности справа и правосторонний гемипареэ, дисфагия. Вызывались патологические симптомы Бабинского с 2-х сторон, симптом Чураева слева, симптом Оппенгейма и Редлиха

Способ определения активности аргиназы мозга путем нанесения образца биологической жидкости на сефадекс

G-75, промывания раствором хлористого калия, введения раствора аргикина с последующим определением мочевины, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности и ускорения способа, биологическую жидкость предварительно обрабатывают раствором формальдегида да конечной

- 25 концентрации 0,1-0,3 моль/л, раствор аргинина наносят на колонку, а продукты реакции смывают 10-15 -ным раствором трихлоруксусной ьжспоты.

Составитель Н. Гуляева

Редактор Т.Парфенова Техред Л.Сердюкова

Корректор В.Бутяга

Заказ 6151/48 Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушекая наб., д.4/5

Подпи сно е

Производственно-полиграфическое предприятие, г,Ужгород, ул. Проектная,4 з

135 справа, симптом Мари-Фуа справа. У больной выявлена сенсо-моторная афа" зия и грубое нарушение высших корковых функций.

Неврологический статус в течение

24 дней оставался без существенных изменений, Активность фермента в крови менялась незначительно: на 3-й день 8 ед;

13-й день 5 ед.; 23.день 6 ед.

Дальнейшее динамическое наблюдение 12 больных с острым нарушением мозгового кровообращения показало, что возрастание активности мозговой формы фермента происходит лишь в период выздоровления (до 60 ед.), тогда как в острой стадии заболевания активность фермента в сыворотке крови колеблется в пределах 2-12 ед./л.

Увеличение активности МФФ происходит в биологических жидкостях лишь на фоне появления первых признаков положительной клинической динамики заболевания, а в некоторых случаях пред шествует им.

Таким образом, определение активности мозговой формы аргиназы в сы9742

4 воротке крови у больных острыми нарушениями мозгового кровообращения имеет прогностический характер.

Предлагаемый способ по точности превосходит известный, является более простым, занимает меньше времени и может быть рекомендован для диагностики неврологических заболевании, Формула изобретения