Способ получения гепарина

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК.,И).„1 7511 (д) 4 А 61 К 31/725

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К flATEHTV

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 2897 802/28-14 (22) 20. 03. 80 (31 ) RI-705 (32) 21.03. 79 (33) HU (46) 15.02. 88. Бюл. В 6 (71) Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр

PT (HU) (72) Иштван Такач, Дьердь Керей, Янош Иллеш, Петер Рудольф, Пал

Гере, Ласло Цебе и Эржебет Несмельи (HU) (53) 615. 45: 615. 7 (088. 8) (56) Кожевникова И. В. Способы получения гепарина. M., 1977, с. 11. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАРИНА путем экстрагирования гепаринсодержащего сырья в щелочных условиях при нагревании, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, гепаринсодержащее сырье с 90-957.-ным содержанием сухого вещества обрабатывают 1,512Х-ным раствором поваренной соли при рН 8-12,8 при периодической или непрерывной противоточной экстракции при 20-80 С.

1375115

В качестве сырья, богатого гепарином, берется сырье, которое содержит минимально на 5-35Х (в расчете на сухое вещество) больше гепарина, 55 чем любое природное сырье.

Противоточную экстракцию проводят в аппарате периодического действия вплоть до полного извлечения или же

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, в частности к способам получения фармацевтических препаратов.

Цель изобретения — повышение выхода целевого продукта.

Поставленная цель достигается тем, что гепаринсодержащее сырье с

90-95Х-ным содержанием сухого вещест- 10 ва обрабатывают I 5-12 -ным раствором поваренной соли при рН 8- 12,8 при периодической или непрерывной проти-. о воточной экстракции при 20-80 С.

Способ осуществляют следующим 15 образом.

Богатое гепарином, аморфное, зернистое, с устойчивой формой сырье с большой удельной поверхностью, содержащее 90-95Х сухого вещества, в воднои среде при температуре и величине рН, оптимальных для данного способа переработки сырья, подвергают периодической или непрерывной противоточной экстракции солевым раствором. 25

Противоточную экстракцию проводят при 20-80 С, концентрации электролита (концентрации соли 1,5-12,0X) и при рН 8-12,8 или в 0,5-1 0 н.щелочном растворе.

В ходе всего процесса экстракции целесообразно поддерживать постоянство концентрации электролита, температуры и величины рН. Соотношение между экстругирующим солевым раст35 вором и сырьем следует установить та1 ким образом, чтобы образующаяся экстракционная вытяжка содержала 150300 1Е/мл гепарина. Для этого целесообразно поддерживать соотношение сухого вещества и жидкости примерно равным 1:5. Для установления величины рН применяют основания одновалентных или многовалентных металлов, целесообразно едкий натр или другие щелочи, обычно используемые для экстракции гепарина. B качестве электролита применяют любые соли, инертные по отношению к гепарину, предпочтительно хлористый натрий.

50 непрерывным образом, целесообразно в

U-образном экстракторе.

В качестве исходного материала применяют богатый гепарином сухой концентрат, который является зернистым и аморфным и имеет высокую удельную поверхность.

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Содержащее гепарин сырье аутолиэируют и экстрагируют в присутствии толуола растворами элект:= ролита, 20 Kl" этого материала интенсивно перемешивают в реакторе с рубашкой вместе со 100 кг тонкоизмельченных свиных кишок, содержащих 18% сухого вещества и 150 л 10%-ного раствора сульфата аммония. После. смео шения смесь нагревают до 38 С. Затем при перемешивании устанавливают ph смеси 8,8-9,2 прибавлением 40%-ного раствора едкого натра. Чтобы избежать вредных микробиологических процессов к смеси прибавляют 3 л толуола.

После прибавления ферментов при

38 С в течение 36 ч проводят аутолиз, при этом смесь время от времени перемешивают. Контролируют рН среды каждые 6 ч и по мере надобности устанавливают на заданную величину прибавлением 40%-ного раствора едкого натра.

После 36 ч аутолиза рН среды устанавливают равным 7,3-7,7 18Х.-ной соляной кислотой и смесь кипятят.

После 10-минутного кипячения отделяют скоагулировавшиеся части на сито чатом фильтре. Фильтрат при 60 С сепарируют, освободив его от жира.

Получают 638 г темно-коричневого экстракционного бульона, концентрация в котором гепарина составляет

18,1 1Е/мл, что соответствует

11,54 М1Е гепарина, Выход составляет ,лишь 76 .

Пример 2. 5 0 кг содержащего гепарин сухого концентрата разделяют на t0 равных частей. Эти порции, по

0,5 кг каждая, обрабатывают способом периодической пятиступенчатой противоточной экстракции. Отдельные стадии проводят следующим образом. Первую порцию высушенного концентрата о органа и подогретого до 40 С

0 25 н.раствора .едкого натра, содержащего 6 поваренной соли, прибавляют к 3,2 л экстракционной смеси.

Через 20 мин экстракт отфильтровыва1375115

ВНИИПИ Заказ 622/57 Тираж 655

Подписное

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4 ют под разрежением через воронку

Бюхнера. Поверхность фильтра образуется металлической сеткой с диаметром отверстий О,б мм. Первый экстрак- 5 ционный раствор собирают, определяют его объем и замеряют его гепариновую активность.

Влажный остаток органа, оставшийся на проволочном сите, снова смешивают 10 с подогретым до 40 С 0,25 н.раствором едкого натра, содержащим 6% поваренной соли, при этом снова устанавливают объем экстракционной смеси 3,2 л.

Вторую экстракцию уже однажды про- 15 экстрагированной массы органа проводят таким же способом. Фильтрат, образующийся при второй экстракции первой порции концентрата органа, смешивают со второй порцией высу- 20 шенного концентрата. Снова устанавливают объем экстракционной смеси .

3,2 л.

Последующие стадии соответственно проводят аналогично. В конечном ре- 25 зультате проводят периодическую противоточную экстракцию в 5 стадий.

Зкстракционный объем всегда составляет 3,2 л, температура 40 С.

Из 5 кг исходного материала, со- 30 держащего 90,4% сухого вещества, пятиступенчатой периодической экстракцией получают 2,599 М1Е гепарина.

П р и и е р 3. Содержащий гепарин сухой концентрат экстрагируют.

40 кг сырого материала хорошо перемешивают с 400 л воды. Устанавливают рН 2,7 соляной кислотой и о смесь нагревают до 38 С. Прибавляют пепсин в количестве, соответствующем

10 кг слизистой оболочки свиного желудка, затем снова устанавливают рН 2,7. При постоянном перемешивании в течение 20 ч проводят протеолиз, поддерживают температуру 37-39 С.

После 20-часового протеолиза устанавливают рН среды 8 0 40 -ным раствором едкого натра и к смеси прибавляют о при 37 С 20 л активированной смеси поджелудочной железы. Второй протеолиз продолжается 10 ч. Каждые 2 ч контролируют величину рН и по мере необходимости снова устанавливают ее

8,0 при помощи раствора едкого натра. Температуру поддерживают 37 С.

После второго протеолиза смесь кипятят и затем фильтруют через ситчатый фильтр. Получают 417 л фильтрата коричневого цвета, концентрация гепарина в котором составляет 32,0 1Е/мл, т.е. общее содержание гепарина равно

13,32 М1Е.

Пример 4. Богатый гепарином сухой концентрат экстрагируют непрерывным противоточным способом в

U -образном экстракторе.Высушенный исходный материал непрерывно подают в аппарат при помощи шнекового дозатора. Из распылительной головки, расположенной над дозатором, прибавляют о двойной объем подогретого до 70 С

0,55 н. раствора едкого натра, содержащего 6 пов аренной соли. Время пребывания материала в шнековом до-. затове составляет 10 мин.

Противотоком к набухшему материа лу, находящемуся в отдельных камерах

U-образного зкстрактора, подают0,1 н.раствора едкого натра, содержащего 6 поваренной соли.

В ходе непрерывной противоточной экстракции поддерживают постоянную о температуру 50 С, с целью улучшения массообмена включают вибратор, расположенный у днища U-образного экстрактора. Объем непрерывно образующегося почти совершенно прозрачного экстракта светло-соломенно †желто цвета замеряют при помощи ротаметра.

Концентрацию гепарина определяют в пробах, отбираемых каждые 0,5 ч.

Гепарин, содержащийся в экстракте, высаждают также непрерывно, образующийся осадок отделяют на фильтре барабанного типа.

Применяемая аппаратура имеет производительность 10 кг сухого концент» рата/ч, время пребывания составляет

35 мин. При 10-часовой работе получают 210 л экстракта, средняя активность которого по гепарину составляет 252 1Е/мл. Выход составляет

52,9 М1Е в расчете на 100 кг исходного материала, содержащего 90,4 сухого вещества.