Производные 5-формилтиено [2,3-d]пиримидина, обладающие противогерпетической активностью

 

Изобретение касается замещеннь х пиримидина , в. частности производных З-фтормилтиено 2,3-d пиримидина (ПМ) общей формулы -C CM-S-CR -СН-СН 0, где а) 1 I2, R -морфолииил: R Н; б) R ОСН ; R Н; в) R - морфолинил; R Вг, которые обладают противогерпетической активностью и могут быть использованы в медицине. Цель - создание более активных веществ указанного класса. Синтез ПМ ведут броми- , рованием 4-мopфoлинo-5-фopмилтиeнo 2,3-d пиримидина бромом в среде диметилформамида при комнатной темлерат ре. Выход %, т.пл. °С; брутто ф-ла: а) 75,156 - 157. С Н N О S: б) 71, 158 - 159, С в) 179, С Н N О SBr. Мака1мально переносимая кон11 10 3 2 центрация для переично-трипсиннзированных культур клеток фиброблааов эмбриона курицы составляет для ПМ 5 мкг/мл лри токсичности 250 - 500 иг/кг. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ ведомство ссср <госпАТент cccp)

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕН

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4129649/04 (22) 25.08.86

{46) 30.1193 Бюл. Na 43 — 44 (71) Всесоюзный научно-исследовательский химико-фармацевтический институт им.Серго Орджоникидзе (72) Каплина Н.В. Гринев АН.; Шведов В.И„Фомина

АН.; Николаева И.С.; Пушкина Т.В. (54) ПРОИЗВОДНЫЕ 5-ФОРМИЛТИЕНО. (2,3-0)ПИРИМИДИНА, ОБЛАДАВ1ЦИЕ ПРОТИВОГЕРПЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТЬЮ

:(57) Изобретение касается замещенных пиримидина„в частности производных 5-фтормилтиено (2,3-dl пиримидина (ПМ) общей формулы

¹CH-М=CR -С=СМ-S-Сй -CH-СН=О, где а)

1 2

<В) SU (1Ц 1391052 А1 (51) 5 C07D495 04 А61К31 505

R -морфолинип; R =Н; б) R =ОСН; R =Н; в) R

1 2 1 3 2 1 морфолинил; R =Br, которые обладают противогер2 петической активностью и могут быть использованы в медицине. Цель — создание более активных веществ указанного класса. Синтез ПМ ведут бромированием 4-морфопино-5-формилтиено(2,3 — сЦ пиримидина бромом в среде диметилформамида при комнатной температуре. Выход 96, тлл. C; брутто ф-.ла: а)?5, 156 — 15?, С Н N 0 $; б) ?1, 158 — 159, С Н N 0 $; в) 50, 1?8 — 1?9, 0622

С Н N О SEr. Максимально переносимая кон11 1О 3 2 центрация для первично-трипсинизированных культур клеток фибробластов эмбриона курицы составляет для ПМ 5 мкг/мл при токсичности 250 — 500. мг/кг. 2 табл.

1391052

Изобретение касается новых химических соединений ряда тиено(2,3-д)пиримидина, а именно производных

5-формилтиено(2,3-д)пиримидина обшей формулы 5

Ц

CHQ

10 .где Вi N .0 Яг- Н(1а):

Ri =-ОСНз, 1 г- Н (1б):

Л! =-М О,, Вг = Br (1в), обладающих противогерпетической активностью, Цель изобретения — производные тиено(2,3-д)пиримидина, обладающие более 20 выраженной противогерпетической активностью в отношении вирусов простого герпеса и меньшей токсичностью.

Пример 1.. Получение 4-морфолино-5формилтиено(2,3-д)пиримидина (!а). 25

A. Получение исходного соединения (!1а)-4-хлор-5-дибромметилтиено(2,3-d) пиримидина, Смесь 3,68 г(0,02 моль) 5-метил-4-хлортиено(2,3-д)пиримидина„7,12 г (0,04 моль) 30

М-бромсукцинимида, 0,01 г перекиси бензоила в 30 мл четыреххлористого углерода кипятят 30 мин. Реакционную массу промывают водой, растворитель упаривают в вакууме досуха, остаток кристаллизуют из 35 хлористого метилена.

Г!олучают 5,13 г (75%) 4-хлор-5-дибромметилтиено(2,3-д)пиримидина в виде криcòàëëè÷åñêîr0 порошка белого цвета с желтоватым оттенком, т.пл, 81-82 С 40 (СНгС!г)

Вычислено, %: С 24,5; Н 0,8; Br 46,7; С!

10,3; N8,2; S 9,4, С7Н4В ггС1КгЯ

Найдено, %: С 24.5; Н 0,9; Br 46,7; С1 45

10,?, N8,,2,; S 9 4.

Б. Получение целевого продукта(!а)-4-морфолино-5-формилтиено(2,:-djn pvvugusa.

Смесь 6,84 г (0,02 моль) 4-хлор-5-диб- 50 ромметилтиено(2,3-д)пиримидина в 100 мл бензола и 21 мл морфолина выдерживают при 50"C в течение 30 мин. Реакционную массу промывают водой, бензол отгоняют, K остатку при перемешивании добавляют 18 55 . мл воды и 20 мл 20%-ной Нг804. Образоцавшийся раствор оставляют на 12 ч при комнатной температуре, эистрагируют p .ëîðî<1 ормом, последний упаривают в вакууме. Остаток кристаллизуют из водного спирта (1:1).

Получают 3,68 г (75%) 4-морфолино-5формилтиено(2;3-д)пиримидина в виде кристаллического порошка белого цвета с кремовым оттенком. т.пл, 156 — 157 С, Вычислено, %: С 52,99; Н 4,44; N 16,85;

S,. 12,86

С» Н»ЛзОгЗ

Найдено, %: С 53,0; Н 4,46: N 16,81; S

12,9.

ИК-спектр, v, см: 1680(СО), Пример 2. Получение 4-метокси-5формилтиено(2,3-д)пиримидина (!б).

А. Получение исходного соединения (!!б) — 4-метокси-5-дибромметилтиено(2,3-д)пиримидина — проводят в условиях, описанных в примере 1а, из 3,6 г (0,02 моль) 4-метокси5-метилтиено(2;З-д)пиримидина, 7,12 r Nбромсукцинимида, 0,01 г перекиси бензоила в 30 мл четыреххлористого углерода.

Получают 5,74 (85%) 4-метокси-5-диб- . ромметилтиено(2.3-д)пиримидина в видекристаллического порошка кремового цвета, растворимого в хлоруглеводородах, спиртах. диоксане, т.пл, 76 — 77 С.

Вычислено, .: С 28,4; Н 1,8; Br 47,3; N

8,3; S9,5, СвНвВггНгОБ

Найдено, %. С 28,6; Н 1,8; В г47,3; N 8,2;

S 9,6. б. Получение целевого продукта (1б) 4метокси-5-формилтиено(2,3-д)пиримидина проводят в условиях примера 1б из 6,76 r (0,02 моль) 4-метокси-5-дибромметилтиено(2,3-д)пиримидина, 21 мл морфолина, 18 мл воды и 20 мл 20 -ной НгЯ04. После кислотного гидролиза продукт выпадает в осадок, Получают 2,75 r (71% ) 4-метокси-5-формилтиено(2,3-д)пиримидина s виде кристаллического .порошка кремового цвета, растворимого в спиртах, диоксане, хлоруглеводородах, т.пл. 158-159 С, Вычислено, %: С 49,5; Н 3,1; N 14,4; S

16,5.

С8Н61 !гОг

Найдено, : С 49,6; Н 3,3; N 14,5; S 16;6.

ИК-спектр, v, см ": 1680 (СО)..Пример 3. Получение 4-морфолино-5формил-б-бромтиено(2.3-д)пиримидина (1 в).

К раствору 2 г(0,008 моль) 4-морфолино5-формилтиено(2;3-д)пиримидина в 20 мл

ДМФА при перемешивании прикапывают

0,41 мл (0,008 моль) брома. Реакционную массу выдерживают при комнатной температуре 1 ч, выливают в воду. Выпавший оса1391052 док отфильтровывают, сушат и кристаллизуют из спирта.

Получают 1,3 r (50%) 4-марфолино-5формил-б-бромтиено(2,3-б)пиримидина в виде кристаллического порошка белого цве- 5 та с желтоватым оттенком, растворимого в спиртах. диаксане, т;пл. 178 — 179 С.

8ычислено, %: С 40.3; Н 3,7.: N 12,8; $

9,8; Вг24,4.

С» Н toNaOzSHr 10

Найдено, %: С 40..4; Н 3,5; N 12,8; $9,7;

Вг 24,4.

ИК-спектр, v, см . 1710 (C0).

Пример 4. Полученные соединения обладают противогерпетической активно-. 15 стью в отношении вирусов простого герпеса

t и П антигенных типов.

Изучение активности соединений общей формулы l проводят на культурах клеток по подавлению размножения вирусов. 20

Для изучения противагерпетической активности соединений используют первично-транеинизированную. культуру клеток фибробластов эмбриона курицы (ФЭК), которую получают путем трипсинизации 9- 25 дневных куриных эмбрионов. В качестве тест-вирусов используют вирусы герпеса простого! и I I анти енных типов (штаммы Л2 и Тр).

Двухдневный манослой культуры кпе- 30 ток инфицируют разведениями вируса, содержащими t0 — 1000 ТЦД5а в 0,4 мл. После адсорбции и удаления неадсорбировавшегося вируса (через 1 ч после инакуляции вируса) вносят изучаемые соединения в кон- 35 центрациях, составляющих 1/2 максимально переносимой для культуры. клеток концентрации, и в меньших концентрациях;

Результаты учитывают через 48 ч по способ: ности изучаемых соединений предотвра- 40 щать цитопатическае действие вируса на клетки и выражают количеством ингибирувмых 50% тканевых цитопатических доз вируса (ТЦД50).

Изучение вирусингибирующей активна- 45 сти предлагаемых соединений в отношении вируса простого герпеса проведена íà 1500 пробирках с монаслоем клеточной культуры

ФЭК.

Токсичность полученных соединений 50 изучают в опытах на культуре клеток ФЗК (96 пробирок) и на 120 белых нелинейных мышах массой тела 18 — 20 г.

На маиаслай 48-часовой культуры клеток ФЭК наносят питательную среду М 199, 55 содержащую испытуемое соединение в раз= личных концентрациях. В течение 5 дней проводят микроскопию клеточных культур . для выявления цитатаксическога действия соединений и определения максимально переносимой клетками концентрации (МИК). мышам испытуемые соединения вводят внутрь в виде взвеси в 1%-ном крахмальном геле в объеме 0,5 мл 1 раз в день в течение

5 дней. Наблюдение за выживаемостью животных проводят в течение 14 дней и определяют максимально переносимую дозу (МПД) соединения.

Результаты изучения полученных соединений приведены в табл,1 и 2, Сравнение проводят с известным 3-(и-оксифениламино)-4-оксо-5,6-ди метил-3.4-дигидротие но(2 ,3-сЦпиримидином (соединение А), обладающим вирусиигибирующим действием в отношении вируса простого герпеса в клеточной культуре ФЭК.

Результаты изучения полученных соединений свидетельствуют о том, что эти соединения обладают высокой вирусиигибирующей активностью в отношении вируса герпеса простого t антигеннаго типа, выращенного в клеточкой культуре

ФЗК. В концентрациях от 5 до 2 мкг/мл они подавляют репродукцию 2,0-2,25 Ig ТЦД5о вируса, Соединеиис А,уступает по активности . предлагаемым соединениям : в максимальна переносимой для клеток концентрации 5 мкг/мл она снижает инфекционный титр вируса на 1,0 tg ТЦД о, предлагаел1ое соединение 1б — иа 2,25!g ТЦПа.

Кроме того, соединения 1а и!б активны в отношении вируса герпеса простого It антигениого типа, соединение А такай активностью е обладает (см.табл.1).

Результаты изучения токсичности предлагаемых соединений свидетельствуют о там, что они харашо переносятся животными — при введении 1 раз в день в течение 5 дней ЧПД для мышей составляют 250 мг/кг (соединение Ii) и 500 мг/кг (соединения б,в}, менее токсичны, чем соединение А, УИД которого составляет 125 мг/.:t.

Для клетсчной культуры ФЗК "ЛПК для всех трех указанных соединений примерна

5 — 10 мкг/мл.

Предлагаемые соединения обладают более выраженным протиьогерпетическим действием и меньшей токсичиастью па сравнению с соединением А. (56) Харизоменова И.А. и др, Функциональные производные тиофена ХХ. Синтез и пративавирусная активность произРадиых

З-аминат11еиа(2,3-д)пирил1идина. Хим. фарм. журнал. 198I, т,15, N 9, с: 40-4 1.

1391052

Таблица 1

Результаты изучения противовирусной активности предлагаемых соединений 1а, 16, 1в, *ХТИ-обратная величина отношения минимальноактивной концентрации кмаксимально переносимой.

**p<0,01 (уровень достоверности).

***р<0,05.

Таблица 2

Результаты изучения токсичности предлагаемых соединений

Формула изобретения Rz-Hl

Производные 5-формилтиено t2,3-(t) пи- ® 1 римидинэ общей формулы 5 в) й2 Br, обладающие противогерпетической актив ностью. где а) / ""

В=И О ./

/ \

В=И О