Питательная среда для культивирования клеток человека и животных

 

Изобретение относится к области биотехнологии и касается культивирования клеток животных, необходимых для производства вирусных вакцин, моноклональных антител, биологически активных веществ, проведения диагностических исследований. Целью изобретения является повышение ростовых свойств питательной среды. Указанная цель достигается добавлением в синтетическую питательную среду, содержащую эмбриональную сыворотку крупного рогатого скота, экстракта цветочной пыльцы в количестве 1-15 % от общего объема. При этом повышается эффективность культивирования, улучшается качество клеток и увеличивается их репродукция. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК(191 SU (111

А1 (51)4 С 12 N 5/00, 5/02

3 .с., 3,")ЖМ

Ы .Е . 1 ..".,Ы3

< <

Б.":U.< у(О

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4367079/30-13 (22) 17,11.87 (46) 07.11.89. Бюл. Р 41 (71) Научно-производственное объединение "Биолар" (72) Г.Я.Витолс, В.Г.Дулманис и О.А.Стенгревицс (53) 591.044:591.81 (088.8) (56) Адамс P.Í. Методы культуры

) клеток для биохимиков. — M.: Мир, 1983, с. 214-221. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается культивирования

Изобретение относится к биотехнологии и касается культивирования клеток животных, необходимых для производства вирусных вакцин, моноклональных антител, биологически актив-. ных веществ, проведения диагностических исследований.

Целью изобретения является повышение ростовых свойств питательной среды.

Пример 1. Для экспериментальной проверки готовят питательную среду с добавлением экстракта цветочной пыльцы. Экстракт готовят по следующей схеме. Пыльцу экстрагируют двумя способами: 70%-ным этанолом при 37 С в течение 24 ч (потом этао нол удаляют), или деионизованной водой при 37 С в течении 12 ч при постоянном перемешиванни. Экстракцию проводят в соотношении растворителя к пыльце, равном 2:1. Осадок удаляют

2 клеток животных, необходимых для производства вирусных вакцин, моноклональных антител, биологически активных веществ, проведения диагностических исследований. Целью изобрете< ния является повышение ростовых < свойств питательной среды. Указанная цель достигается добавлением в синтетическую питательную среду, содержащую эмбриональную сыворотку крупного рогатого скота, экстракта цветочной пыльцы в количестве 1- 15% от общего объема. При этом повышается эффектчвность культивирования, улучшается качество клеток и увеличивается их репродукция. 1 табл. центрифугированием (1000 х 30 мин) .

Полученные экстракты смешивают и стерилизуют фильтрованием через 0,22 мкм фильтры. Готовый экстракт проверяют на стерильность и токсичность.

Проводят исследования разных сочетаний питательной среды с добавлением экстракта цветочной пыльцы и эмбриональной сыворотки в течение 6мес. на клетках животных. Полученные результаты приведены в таблице и показывают, что возможно уменьшение . количества эмбриональной сыворотки в составе питательной среды- добавлением экстракта цветочной пыльцы от 1 до

15% Добавление более высокого процента экстракта не дает существенного прироста клеток, а добавление экстракта меньше 1% не дает прироста клеток.

Питательная среда с добавлением !

5% эмбриональной сыворотки тоже при1520095 водит к увеличению роста клеток (до

105X), но тогда значительно увеличивается расход дорогой эмбриональной сыворо.ки.

Влияние содержания эмбриональнои сыворотки и экстракта цветочнои пыльцы в питательной среде на рост клеток приведено в таблице.

Прирост клеток по

Экстракт цветочной пыльцы, мас.%

Плотность клеток по

Плотность

Эмбриональная сывоклеток при культивировании с известному способу; тыс.кл/мл ротка, мас. отношению к контролю, % экстракта, тыс.кл/мл

300

280

260

325 ракт цветочной пыльцы 10; основная среда КРИ1-1640 89, культивируют клетки человеческой лимфобластомы. линии Raji в течение 4 мес. В этих условиях достигается прирост клеток до 101, а погибших клеток менее 5Х, что доказывает пригодность данной питательной среды для культивирования и других клеточных линий, а не только миелом.

Пример 4. На питательной среде, приготовленной по примеру 1, которая содержит следующие компоненты, %: эмбриональная сыворотка крупного рогатого скота 1; экстракт цветочной пыльцы 10; основная среда

ДАЛЕМ 89, культивируют клетки человеческой лимфобластомы линии Namalva в течение 6 мес. В этих условиях культивирования достигается прирост клеток 100-101Х, а погибших клеток менее 5 .

Пример 2. Используют питательную среду следующего состава, об. .: эмбриональная сыворотка круп- 40 ного рогатого скота 5; экстракт цветочной пыльцы 10; основная среда

ДНЕМ 85. Получают следующие результаты: прирост клеток 105Х, а погибших клеток менее 5 .. 45

Таким образом, при культивировании клеток мьпниной миеломы в питательной среде, которая содержит в основе среду ДИЕМ, практически достигается такая ее эффективность куль- 50 тивирования клеток и качество клеток, как при использовании питательной среды, которая в основе содержит среду RPM1-1640. . Пример 3. По аналогичной примеру 1 методике на питательной среде, которая содержит следующие компоненты, .: эмбриональная сыворотка крупного рогатого скота 1; экст10

5

5

5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,5

0,4

0,4

0,4

0,4

0,4

0,4

0,4 .15

0

0,8

5

17

0,8

5

17

0,8

5

Контроль

305

96

96

98

102

104

98

102

104

104

84

84

94

96

96

98

98

105

5 1520095 6

Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я ракт цветочной пыльцы при следующем соотношении компонентов, об.Х:

0,5-10

1-15

Остальное

Составитель С.Светлышев

Редактор И.Дербак Техред М.Ходанич Корректор А.Обручар

Заказ 6723/29 Тираж 501 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Проиеводственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãoðîä, ул. Гагарина, 101

Питательная среда для культивирования клеток человека и животных, включающая синтетическую питательную среду, стимулятор роста и эмбриональную сыворотку крупного .рогатого скота, отличающаяся тем, что, с целью повышения ростовых свойств питательной среды, в качестве стимулятора роста используют экст1

Эмбриональная сыворотка крупного рогатого скота

Экстракт цветочной пыльцы

Синтетическая питательная, среда

RPM1-1 640