Способ получения соли сульфоаденозил-l-метионина
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности. Исходные дрожжи обогащают сульфоаденозил-L-метионином. Клетки лизируют. Лизат очищают ультрафильтрацией через мембраны с пределом пор 10000 дальтон, пропускают через колонку со слабокислотной ионообменной смолой. Элюат пропускают через колонку с амберлитом со скоростью 0,2 - 1,0 объема жидкости в 1 ч на объем смолы и промывают через колонку с амберлитом. Затем промывают раствором дисульфоновой кислоты до исчезновения целевого продукта из элюата. Раствор подают в устройство обратного осмоса плоского типа, где использованы полиамидные обессоливающие мембраны. Полученный раствор высушивают распылением при 140-200°С. Растворимость целевого продукта повышается в 10 раз.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН (51) 4 С 12 И 1/06
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К llATEHTY
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ
ПРИ ГННТ СССР (21) 3898654/28-14 (22) 15.05.85 (31) 20938 A/84 (32) 16.05.84 (33) IT (46) 15.12.89. Бюл. 11 46 (71) Биорисерч С.п.А. (iT) (72) Федерико Геннари (1Т) (53) 615.45 (088.8) (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОЛИ СУЛЬФОАДЕНОЗИЛ-L-МЕТИОНИНА (57) Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности. Исходные дрожжи обогащают сульфоаденозил-L-метионином. Клетки лизируют.
Лизат очищают ультрафильтрацией через
Изобретение относится к химикофармацевтической промышленности и касается спосоЬа получения вещества общей формулы: сульфоадеНозил-L-метионин и (СН )„.(БО Н ),где п=1 до 2, m=3 до 12.
Целью изобретения является повышение растворимости целевого продукта по сравнению с аналогом.
Пример 1. Получение 0,2 н. растворов дисульфокислот общей формулы (СН ) „, (SO Н) е
75 л дистиллированной воды, 20 л
95ь-ного этанола и 5 л н-Ьутанола доЬавляют к 21,6 кг (100 моль) 1,4дибромЬутана. Добавляют 26,46 кг (210 моль) безводного сульфита натрия и смесь нагревают с обратным холодильником в течение 3 дней. По
"окончании реакции добавляют 20 л дистиллированной воды и смесь перего, SU 153(щК А >
2 мемЬраны с пределом пор 10000 дальтон, пропускают через колонку со слаЬокислотной ионооЬменной смолой.
Элюат пропускают через колонку с ам= берлитом со скоростью 0,2-1,0 объема жидкости в 1 ч на оЬъем смолы и про. мывают через колонку с амберлитом.
Затем промывают раствором дисульфоно/ вой кислоты до исчезновения целевого продукта из элюата. Раствор подают в устройство обратного осмоса плоского типа, где использованы полиамидные обессоливающие мембраны. Полученный раствор высушивают распь лением о при 140-200 С. Растворимость целевого продукта повышается в 10 раз. няют до тех пор, пока полностью не удалят спирты, Смесь разбавляют водой до конечного объема 60 л и нагревают до тех пор, пока не происходит полного растворения.
Полученную двунатриевую соль 1,4бутандисульфокислоты оставляют крисо таллизоваться в течение ночи при 4 С.
Продукт отфильтровывают и промывают и
10 л воды.
Ю
Маточные растворы концентрируют под вакуумом до объема 20 л и оставляют кристаллизоваться в течение ночи при 4 С. Продукт отфильтровывают и промывают 4 л воды. Крисгаллическую массу от двух фильтрований повторно суспендируют в 50 л воды и рас воряюг в горячих условиях. Раствор оставляют крисгаллизовагься в гечение ночи при
4 С. Продукт отфиль1ровываюг и прониваюг 5 л воды. Н;,гриевун соль Ьу ан1530100 дисульфокислоты высушивают под вакуумом.
Последующую фракцию продукта получают путем концентрирования маточных растворов до 1О л и выдерживания их для кристаллизации в течение ночи при
4 С с последующим отфильтровыванием продукта и сушки его под вакуумом.
Таким образом получают 25,2 кг двунатриевой соли-1,4-бутандисульфокислоты, моногидрата (90 моль, 904ный молярный выход).
Рассчитано, 4: С 17,1, Н 3,6, S 22,9.
СаH Найдено, 4: С 17,1; Н 3,7, S 22,9 ° Готовят колонку, содержащую 200 л смолы Amberlite IR 120, предварительнг 0 активированной 6 н. раствором НС1 до тех пор, пока из элюата не исчез ион Na, и промывают ее дистиллированной водой до тех пор, пока из элюата не исчез ион Сl 25 25,2 кг двунатриевой соли-1,4-byтандисульфокислоты, моногидрата растворяют в 300 л воды и подают в головную часть колонны. СоЬирают элюат, содержащий 1,4-Ьутандисульфокислоту, и колонку промывают водой до тех пор, пока значение рН элюата не достигло 4. Элюат разбавляют до конечного оЬъема 900 л, чтобы получить 0,2 н. раствор 1,4-бутандисульфокислоты, которую используют для получения соответствующей соли сульфоаденозил-L-метионина. Действуя аналогично,. но используя 20,2 кг 1,3-диЬромпропана в качестве исходного материала, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,3-пропандисульфокислоты. Используя 23 кг 1,5-диЬромпентана, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,5пентандисульфокислоты. Используя 24,4 кг 1.5-дибромогексана, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,6-гександисульфокислоты. Используя 27,2 кг 1,8-дибромоктана, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,8-октандисульфокислоты. Используя 30 кг 1,10-дибромодекана, получают 900 л 0,2 н. раствора 1,10-декандисульфокислоты. Пример 2. Получение сол1 сульфоаденоэил-L-метионин 1,5 (1,4-бутан- . 55 дисульфоната). 220 л этилацетата и 220 л воды добавляют при окружающей температуре к 1800 кг дрожжей, обогащенных сульфоаденозил-L-метионином (6,88 г/кг) по способу Шленка. После энергичного перемешивания в / течение 30 мин добавляют 1000 л 0,35 н. раствора серной кислоты и перемешивание продолжают еще в течение 1,5 ч. Смесь фильтруют через вращающийся фильтр, который промывают водой, чтобы получить 2800 л раствора, содержащего 4,40 г/л сульфоаденоэил-L-метионина, что равно 99,5 ь от количества, присутствующего в исходном материале. Раствор сульфоаденозил-L-метионинаполученный таким оЬразом (рН 2,5) подают в установку ультрафильтрации, где используют труЬчатые мемЬраны с задержкой 10000. Проникающий поток, прошедший через мемЬраны, соЬирают в подходящем сосуде, в то время как концентрат непрерывно рециркулируют до конечного оЬъема 200 л. В этом месте добавляют дистиллированную воду и продолжают рециркулирование до тех пор, пока полностью не экстрагируют сульфоаденозил-L-метионин. Получают 3500 л лизата, значение рН которого доводят до рН 5 путем добавления 2 н. раствора NaOH. Готовят колонку, содержащую 400 л смолы Amberlite С(; 50 в H форме, которую тщательно промывают дистиллированной водой. Лиэат пропускают через колонку смолы со скоростью 800 л/ч, которую поддерживают постоянной в течение всей процедуры. Затем последовательно пропускают 400 л дистиллированной воды, 3200 л 0,1 моль/л уксусной кислоты и 400 л дистиллированной воды. Сульфоаденозил-L-метионин элюируют 800 л 0,2 н. раствора 1,4-Ьутандисульфокислоты. 800 л полученного та ким образом элюата содержит приблизительно 10 кг сульфоаденоэил-L-метионина. Готовят колонку, содержащую 400 л смолы Amberlite ХА 4, которую предварительно активируют 800 л 0,1 н. раствора NaOH и 800 л 0,1 н. раствора Н Б04, а затем тщательно промывают дистиллированной водой. Ранее полученный раствор сульфоаденозил-L-метионина пропускают через колонку со с.коросгью 200 л/ч, 54,9 50 15301 причем скорость поддерживают постоянной в течение всего процесса. Затем через нее пропускают 400 л 0,02 н. раствора 1,4-бутандисульфокислоты. СоЬирают элюат, содержащий сульфоаденозил-L-метионин (примерно 1000 л, содержащих 1О кг сульфоаденозил-Lметионина). Раствор, полученный таким образом, подают в устройство обратного осмоса плоского типа, где использованы полиамидные оЬессоливающие мембраны. В этом устройстве раствор сульфоаденозил-Ь-метионина концентрируют до 80 л, содержащих 9,9 кг суль- 15 фоаденозил-Ь-метионина. ДоЬавляют 5 л 2 н. раствора Ьутандисульфокислоты. Раствор, полученный таким оЬразом, подают в распылительную осушительную установку, в которую подают 20 о воздух при 160 С. Сухой продукт непрерывно выводят их установки. Получают 18 кг порошкообразного продукта, имеющего при анализе следующий состав, 4: 25 Сульфоаденозил-Lметионин 1,4-Бутандисульфокислота 44,9 Н О 0,2 соответствующий соли сульфоаденозилL-метионин. 1,5 (1,4-бутандисульфонат). Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 30 вес.4 с образованием becc 35 цветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях. С помощью тонкослойной хроматографии найдено, что продукт не содержит 40 каких-либо примесей. Рассчитано, б: N 11,6; С 34,7, Н 5,1. С Н Нво Б 1 5C4 Н ОО6 S 2 Найдено, : N 11,5, С 34,8; Н 5,1. Ультрафиолетовый спектр продукта показывает максимум поглощения (в буфере при рН 4) при 258,5 нм с Е,„ = =193 ° Пример 3. Получение соли сульфоаденозил-L-метионин i1,5 (1,3пропандисульфоната). Следуют методике примера 2, но используют 1,3-пропандисульфокислоту вместо 1,4-бутандисульфокислоты. Получают 17,45 кг порошка, который при анализе показывает следующий состав, 4: Сульфоаденозил-Lметионин 56,5 1,3-Пропандисульфокислота 43,3 н20 0,2 соответствующий соли сульфоаденозилL-метионин 1,5 (1,3-пропандисульфонат). Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим. в воде до 30 вес.1 с образованием бесцветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях. Тонкослойная хроматография показывает, что продукт не содержит никаких примесей. Рассчитано, 4: N 11,9; С 33,2; Н 4,8. С, Н N O S 1,5 С НзОЬ Найдено, "4: N 11,9; С 33,1, Н 4,8. Ультрафиолетовый спектр продукта показывает максимум поглощения (в byфере при рН 4) при 258,5 нм с E«= =199 ° Пример 4. Получение соли сульфоаденозил-L-метионин 1,5 (1,5-пентандисульфоната). Следуют методике примера 2, но используют 1,5-пентандисульфокислоту вместо 1,4-бутандисульфокислоты. Получают 18,5 кг порошка, который при анализе показывает следующий состав, В: СульфоаденозилL-метионин 53,3 1,5-Пентадисульфокислота 46,5 Н О 0,2 соответствующий соли сульфоаденозилL-метионин 41,5 (1,5-пентандисульфоната). Продукт имеет форму кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 30 вес.4 с образованием Ьесцветного раствора и не растворим в обычных органических растворителях. Тонкослойная хроматография показывает, что продукт не содержит никаких приМесей. Рассчитано, 4: N 11,3, С 36,2, Н 5,4. С Н И О Б 1 4 5 С Н О Ь Найдено, ь: N 11,4, С 36,2, H53 ° Ультрафиолетовый спектр продукта (в буфере рН 4) показывает максимум поглощения при 258,5 нм с Е ;-188. 1530100 30 П р и м e p 5. Получение соли сульфоаденоэил-L-метионин 1,5 (1,6-гександисульфоната). Следуют методике примера 2, но используют 1,6-гександисульфокислоту вместо 1,4-бутандисульфокислоты. Получают 19 кг порошка, который при анализе дает следующий состав, Сульфоаденозил-L- 1О метионин 51,8 1,6-Гександисульфокислота 48 Н 0 0,2 соответствующий соли сульфоаденозил- 15 L-метионин>1,5 (1,6-гександисульфоната). Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 30 вес.Ф с образованием Ьесцветного раствора и не растворим I в обычных органических растворителях. Тонкослойная хроматография показывает, что продукт не содержит никаких примесей. Рассчитано, ь: N 10,9; С 37,6; Н 5,6. С„Н, И О Б-1>5 С Н, О Ь Найдено, 4: N 10,8, С 37 5> Н 5,6. Ультрафиолетовый спектр продукта (в буфере рН 4) показывает максимум поглощения при 258,5 нм с Е,.1,=182. Пример 6. Получение соли сульфоаденозил-L-метионин 1,5 (1,8октандисульфоната). Следуют методике примера 2, но 1,8-октандисульфокислоту используют вместо 1,4-бутандисульфокислоты. Получают 20 кг порошка, который при 40 анализе дает следующий состав, 4: Сульфоаденозил-Ьметионин 49,3 1,8-0ктандисульфокислота 50>5 45 Н 0 0,2 Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 30 вес.4 с оЬраэованием бесцветного раствора и не растворим 50 в обычных органических растворителях. Тонкослойная хроматография показывает, что продукт свободен от какихлибо примесей. Рассчитано, 4: N 10,4, С 40;0; Н 6,0. C> Q N O S > 1 > 5 (s H) Op S Найдено, б: N 10,4 С 39,9; Н 5,9. Ультрафиолетовый спектр продукта (в буфере рН 4) показывает максимум поглощения при 258,5 нм с Е1,173 . Пример 7. Получение соли сульфоаденозил-L-метионин 1,5 (1,10декандисульфоната) ° Следуют методике примера 2, но 1,10-декандисульфокислоту используют вместо 1,4-бутандисульфокислоты. Получают 21 кг порошка, который при анализе дает следующий состав, Сульфоаденозил-1.— метионин 46,8 1,10-Декандисульфоки ело ra 53 Н 0 0,2 соответствующий соли сульфоаденозилL-метионин.1,5 (1,10-деканд сульфоната). Продукт имеет вид кристаллического белого порошка, который растворим в воде до 20 вес. с образованием бесцветного раствора и не раст.ворим в обычных органических растворителях. Тонкослойная хроматография показывает, что продукт своЬоден от какихлибо примесей. Рассчитано, i: N 9,8; С 42,3; Н 6,5. Найдено, /: N 9,9; С 42,4; Н 6,5. Ультрафиолетовый спектр продукта (в буфере рН 4) показывает максимум при 258,5 нм с Е1 =164. Положительный эффект заключается в повышении растворимости по сравнению с аналогами, поскольку полученные соединения в 10 раэ более растворимы. формула иэоЬретения Способ получения соли сульфоаденозил-L-метионина общей формулы п(СН 2) „(So „l1) где и — 1...2; m 3 ° ° ° 12, заключающийся в том, что доЬавляют культуры дрожжей Saccharomyces Cerevisial, Torulopsic utilis, Candida utilis к целевому продукту, лизируют ,клетки раствора воды и этилацетата при соотношении 1:1, затем 0,35 н. серной кислоты, очищают лиэат ультрафильтрацией через мембраны с пределом пор 10000 дальтон, пропускают лиэат через колонку сп слаЬокислотной ионообменной смолой в Н-форме при рН 3,57 при скорости пропускания 1-3 объема 1530100 Составитель А.Иодль Редактор О,Спесивых Техред Л.Сердюкова Корре ор М.Пожо Заказ 7767/ 59 Тираж 501 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул.Гагарина, 1 )1 жидкосги в 1 ч на один объем смолы, элюат пропускают через колонку с амберлитом со скоростью 0,2-1 объема жидкости в части на объем смолы и промывают 20 млн раствором дисульфоновой кислоты до исчезновения целевого продукта из элюара, за ем концентрируют ультрафилырацией на мемГ>ранах полиамидного типа 100-200 г/л, высушивают распылением при 140-200"С, при этом температура воздуха на выходе составляет 40-100 С.
