Способ определения антител к воrdетеllа реrтussis в биологической жидкости

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицине для диагностики коклюша. Цель изобретения - упрощение способа. В способе применяется метод пластинчатой окрашенной латекс-микроагглютинации с коклюшным латексным диагностикумом. Предлагаемый способ прост в исполнении и по чувствительности не уступает иммуноферментному анализу.

(51) 5 G 01 N 33/53. ( (анализу (1С Уд Рг" Р Е 1-(1-((- ((1 (, 0 "А И ТЕ Г г10 1,1дО р,=;г1.ц:,с;-, 1,4 О-(.(; 1-1-,.„р.

i1P14 ГНЧТ СОС " (21) .4324698!28-14 (22) 03.11.87 (46) 07.01. 90. Бюл. 1!(1 (71) Казанский государственный медицинский институг им. С.В, Куйбышева (72) Н. ((. Амйите атрова, А.О. Киселев и О.С.Чечик (53) 61 5.873 (088,8) (56) Авторское свидетельство СССР

Р 1255929, .08.05,36

Изобретение относится к медицине, а именно к методам серологического анализа при ннйе(к(ционных заболевани— ях .

11ель изобретения — упрощение спо— соба.

Способ осуществляется следующим образом, Из бактериальной массы В.pertussi.s готовят дезинтеграт, которым сен— сибилизируют частицы полистиролового латекса, Исследуемый образец слюны или сыворотки краги смешивают с отмытым от несвязавшегсся антигена циагностикумом. Через 3-5 мин готовят из смеси мазок, высушивают, фиксируют и окрашивают фуксином и регистрируют результат под микроскопом при небольшом (50-60 раз) увеличении.

Пример 1. Для приготовления дезинтеграта маточную взвесь трехсуточной культуры коклюшных бактерий (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К

K)RDETELLA PERTUSSlS В БИОЛОГИЧЕСКОЙ

ЖИД КОСТ1( (57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицине для диагностики коклюша.

Пель. из об ре те н ия — yn роще н не с по соба. Б способе применяется метод пластинчатой окрашенной латекс-микроагглютина .ии с коклюшным латексным диагностикумом. Предлагаемый способ прост в исполнении и по чувствительности не уступает иь((муно(Ьсрментному содержащую 400 млрд микробных клеток в 1 мл, суспекдируют в 100 мл глиш нового буфера (ñîñòàâ: 7,3 г глицина, 10 г хлорида натрия, 1000 мл дистиллированной воды, рН 8. 2), центрифуги: руют при 15 000 об/мин в течение ( 30 мин. Надосадочную жицкость удаля— ют, а осадок растирают с песком в фарфоровой ступке в течение 15 мин, затем дезинтеграт суспендируют в

50 мл глицинового буфера и снова подвергают центрифугированию при

15 000 об/мин в течение 20 мин, Надосадочную жидкость, содержащую

775 мкг/мл белка, используют в качестве антигена для сенсибилизации латек са.

Дезинтеграт и латекс смешивают в объемном соотношении 2: 1, пробирку со

О смесью помещают в термостат при 37 С на 2 ч, затем для стабилизации полученного латексного диагностикума до1534405

Формула изобретения

Способ определения антител к Bordetella pertussis в биологической жидкости путем иммунологического анализа исследуемого материала с деэинтегратом бактерий, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью упрощения способа, дезинтегратом сенсибилизируют частицы полистиролового латекса, добавляют к исследуемому материалу, делают мазок, высушивают и окрашивают фуксином и определяют наличие антител к Bordete11à pertussis

Составитель lI Па юков

Редактор В.Петраш Техред N.Äèäûê Корректор С.Шекмар

Заказ 39

Тираж 501

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Рауш«кая наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат Патент". г.ужгород, ул. Гагарина,101 бавляют 3 ч эабуференного глицином физиологического раствора, содержащет о 0,1 Ж бычьего сывороточного альбумина и 0,037. азида калия. Данный диагностикум хранят при температуре 510 С не более 15 дней. Для постановки реакции латекс-агглютинации используют стеклянную пластинку, на которую наносят двукратные разведения исследуемой сыворотки или слюны в количе— ! стве 0 05 мл, к каждому разведению сследуемого субстрата добавляют по

С, 02 мл коклюшного латексного диаг остикума. Стекло слегка покачивают ля равномерного перемешивания инi,,ðåäèåíòoâ в течение 3 мин. Результат регистрируют визуально через 3-5 мин. !

Для более четкой регистрации результатов реакции необходимо высушить маз-20 юи, зафиксировать над пламенем спиртовки и окрасить разбавленным фукси— ном > затем краску смыть, снова высущить стекло и анализировать препарат под микроскопом (увеличение в 50- 25

6 0 раз) . !

Реакция оценивается качественно .

4+ — четка.я агглютинация част.иц ! латекса с образованием больших скоплен ий; ЗО

3+ — большие и малые скопления частиц латекса;

2+ — малые, но отчетливые скопления частиц латекса, имеются несагглютинированные,частицы. 35

l+ — слабая гранулярная агглютин акция — отсутствие агглютинации, харак те ризующеес я равномерным ра сп ред лением частиц латекса по всему cbo- pp н

Положительными считают реакции не менее чем на 2+.

Проведен анализ 275 образцов сыво- 4 ротки крови и слюны у детей с высевом коклюшного микроба и клинической картнной коклюша у детей, ревакцинированных АКДС-вакциной. Образцы слюны давали положительную ре акцию в ра эведениях от 1:40-1:80, образцы сыворотки крови — до 1:40000 — 1:1300000.

Все исследуемые образцы вызывали агглютинацию латексного диагностикума, контрольный латексный диагностикум не агглютинировал °

Пример 2. Диагностикум готовили и реакцию проводили как в примере 1, анализ иров али образ цы слюны в динамике от детей с положительным высевом коклюшного микроба вначале и через 15-20 дней после появления клинических признаков коклюша. Диагностикум реагиров ал в на чальном пе риоде лишь с образцом слюны одного ребенка при разведении до I:10.

Через 15-20 дней положительная реакция получена во всех образцах, титр антител в слюне 1:40-1:160.

Пример 3. Диагностикум готовили и реакцию проводили, как в примере i, но анализировали образцы слюны клинически здоровых непривитых детей. Положительных реакций выявлено не было °

Таким образом, предложенный способ определения антител к B;pertussis позволяет упростить процедуру серологического анализа и может быть применен как для оценки антительного ответа при заболевании, так и для опенки поствакционального ответа.