Способ диагностики диабетической микроангиопатии
Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики ангиопатий, и может быть использовано при дифференциальной диагностике диабетических микроангиопатий. Цель изобретения - повышение точности диагностики. При подозрении на диабетическую микроангиопатию у больного производят забор крови из вены в количестве 5 мл, отделяют сыворотку, помещают ее в целлофановый мешок и диализируют, помещая мешок в буферный раствор (0,001 М КН<SB POS="POST">2</SB>РО<SB POS="POST">4</SB> - КОН при PH 6,2). Время диализа 3 сут (первые сутки - при комнатной температуре, вторые и третьи - при 4°С). В результате эуглобулины выпадают в осадок, который отделяют центрифугированием, отмывают фосфатным буфером и растворяют в 0,5 мл 0,15 М NA<SB POS="POST">2</SB>HPO<SB POS="POST">4</SB><SP POS="POST">.</SP>2H<SB POS="POST">2</SB>O-KH<SB POS="POST">2</SB>PO<SB POS="POST">4</SB> - NACL при PH 7,2. С частью раствора эуглобулинов проводят качественную реакцию на присутствие в их составе альфа-гаптоглобина, используя моноспецифическую антисыворотку против альфа<SB POS="POST">2</SB>-гаптоглобина. С этой целью используют иммуноэлектрофорез, реакцию иммунопреципитации в агаре по Оухтерлони или метод двойной радиальной иммунодиффузии по Манчини. В случае обнаружения в эуглобулинах альфа<SB POS="POST">2</SB>-гаптоглобина ставится диагноз: диабетическая микроангиопатия. Метод обладает высокой специфичностью.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (g))g G 01 И 33/68
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И СКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
1 (21 ) 4371 787/28-14 (22) 01.02.88 (46) 15.05,90. Бюл, К - 18 (71) Киевский научно-исследовательский институт кардиологии им. акад.
Н.Д.Стражеско (72) P,А.Фролькис, В.А.Малыжев, Г.В.Дубровская и Г.М,Корнилина (53) 616.07 (088.8) (56) Гфимов А.С. Диабетические ангиопатии. Киев: Здоровье, 1973. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДИАБЕТИЧЕСКОЙ МИКРОАНГИОПАТИИ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики ангиопатий, и может быть использовано при дифференциальной диагностике диабетических микроангиопатий,Цель изобретения — повышение точности диагностики. При подозрении на диабетическую микроангиопатию у больного производят забор крови из вены в количестве 5 мл, отделяют сыворотку, помещают ее в целлофановый мешок и
Изобретение относится к медицине, а именно к способам диагностики ангиопатий, и может быть использовано при дифференциальной диагностике диабетических микроангиопатий, Целью изобретения является ловышение точности диагностики..
Способ осуществляют следующим образомом.
При подозрении на диабетическую микроангиопатию у пациента производят забор крови из локтевой вены наÄÄSUÄÄ 1564553 А 1
2 диализируют, помещая мелок в буферный раствор (0,00! М КН РΠ— КОН, рН 6,5). Время диализа 3 сут (первые сутки — при комнатной темпера- туре, вторые и третьи — при 4 С). В результате эуглобулины выпадают в осадок, который отделяют центрифугированием, отмывают фосфатным буфером и растворяют н 0,5 мл 0,15 М Иа НР0 х х 2Н О-КН<Р04-Na01 при рН 7,2. С частью раствора эуглобулинов проводят качественную реакцию на присутствие в их составе альфа -гаптоглобина, используя моноспецид ическую антисыворотку против альфа -гаптоглобина. С этой целью используют иммуноэлектрофорез,реакцию иммунопреципитации в агаре по Оухтерлони или метод двойной радиальной иммунодиффузии по Манчини, В случае обнаружения в эуглобулинах альфа -гаптоглобина ставится диагноз: диабетическая микроангиопатия. Метод обладает высокой специфичностью. 2 табл. тощак в количестве 5 мл. Кровь помещают в сухую чистую пробирку,инкубируют при 37 С 15 мин в термостате, а затем в холодильнике при 4 С еще
15 мин, Образовавшийся сгусток крови отделяют от стенок пробирки тонкой стеклянной палочкой и кровь центрифугируют в течение 20 мин при
1500 o6/ìèí. После центрифугирования отделившуь1ся сыворотку собирают в целлофановый диализный мешок, который помещают для диализа в буферный
,1564553 раствор с низкой иойной силой
0,001 М КН РО -КОН (рН 6,5). Объем диализирующего раствора 400-800 мл.
Время диализа 3 сут (первые сутки при комнатной температуре, вторые и третьи — при 4 С в холодильнике).
В результате этого эуглобулины сыворотки крови выпадают в осадок, который собирают после центрифугирования про- lð бы при комнатной температуре в течение
20 мин при 1500 об/мин,а .осадок эуглобулинов трижды отмывают фосфатным буфером описанного состава путем взбалтывания осадка в буфере и последующего центрифугирования. Отмытый осадок растворяют в буферном физиологическом растворе 0,15 М
Na "Севак", ЧССР). Электрофоретическое разделение белков эуглобулиновой фрак- <> ции проводят в l геле агара, приготовленном на барбиталовом буфере (рН 8,6, р 0,05) следующего состава: 10,3 г веронала натрия (мединала) + 1,85 г веронала в 500 мл дистиллированной воды, в аппарате для электрофореза агар — гель, В качест,ве электронного буфера используют барбиталовый буфер (pH 8,6, р 0,085) следующего состава: 10,3 г веронала 40 натрия (мединала) + 1,85 r веронала в 1000 мп дистиллированной воды,После окончания электрофореза в траншею для антисыворотки заливают моноспецифическую сыворотку к альфа -гап- 45 тоглобину и пластины с агаром инкубируют в течение 24 ч во влажной камере для прохождения реакции иммунопреципитации, которая проявляется В виде характерной дуги преципитации, 5О Окраску иммуноэлектрофореграмм осуществляют 0,25%-ным раствором кумаси R-250,. приготовленным на смеси метанол — дистиллированная вода — ледяная уксусная кислота в соотношении 5:5:1, Другими способами идентификации альфа -гаптоглобина в составе сывороточных эуглобулинов являются реакция иммунопреципитации в агаре по Оухтерлони или метод двойной радиальной иммунодиффузии по Манчини с применением готовых коммерческих моноспецифических антисывороток против альфа -гаптоглобина человека, В случае обнаружения в эуглобулинах альфа -гаптоглобина ставится диагноз: диабетическая микроангиопатия. Пример 1, Пациент К,, мужчина, 30 лет. Диагноз: сахарный диабет инсулинзависимый (Х тип) тяжелой формы в состоянии компенсации (колебания суточной гликемии не более 8-9 ммоль/лл при аглюкозурии). Из сыворотки крови данного больного выделяли эуглобулиновую фрак- цию, отмывали,ее фосфатным буфером 0,001 М (рН 6,5), а затем растворяли в 0,15 M фосфатном физиологическом буферном растворе описанного состава, Полученный раствор сывороточных эуглобулинов подвергали иммуноэлектрофоретическому анализу, В. качестве преципитирующей антисыворотки использования коммерческую моноспецифическую сыворотку против альфа -гаптоглобина человека ("Севак", ЧССР). На иммуноэлектрофореграмме выявляется четкая дуга преципитации в области альфа .-глобулинов, что указывает на наличие альфа -гаптоглобина в составе белков эуглобулиновой фракции. Поставлен диагноз: диабетическая микроангиопатия, г Для верификации поставленного диагноза у этого больного проводили капилляроскопию и капиллярографию ногтевого ложа пальцев ног и определяли сосудистую проницаемость, а также обследовали сосуды глаз с помощью биомикроскопии конъюктивы, прямой и обратной офтальмоскопии глазного дна с расширенным зрачком, Поражения co судов почек диагностировали на осно-, вании.исследования мочевого осадка. путем подсчета форменных элементов в трехчасовой и суточной порциях мочи и суточной протеинурии, В результате обследования 6bUI подтвержден поставленный диагноз: диабетическая микроангиопатия II— III ст. Это подтверждает высокую специфичность способа, Пример 2, Пациент М,, мужчина, 46 лет. 5 !5645 Поступил с диагнозом: ишемическая болезнь сердца; стенокардия напряжения и покоя III-IV функциональный класс. Атеросклероз венечных арте5 рий, НКО. Облитерирующий атеросклероз сосудов нижних конечностей, Диагноз верифицирован клиническими, биохимическими и инструментальными методами, включающими электрокардиограмму, велоэргометрию,селективную коронароангиографию, Больной предъявлял жалобы на чувство жажды, сухость во рту, зуд, В связи с этим был проведен анализ на уровень гликемии и глюкозурии. У боль" ного было выявлено повышение содержания.глюкозы в крови натощак и появление глюкозы в суточной порции мочи. На основании этого бып постав- 20 лен диагноз: сахарный диабет легкой формы, впервые выявленный, Поскольку у данного больного наблюдались выраженные сосудистые поражения, возникла необходимость диффе- 25 ренциальной диагностики ангиопатий с целью выбора адекватной тактики лечения, Для этого пациент был обследован по предлагаемому способу, В результате исследования альфа -ran- 30 тоглобин в составе эуглобулиновой фракции сыворотки крови не был обнаружен, что свидетельствует о том, что сосудистая патология у данного больного не диабетогенного.характера. Для верификации заявляемого способа больному проводили дополнительно исследования с помощью широко используемых способов диагностики диабетических микроангиопатий, в ре- 40 зультате которых не было выявлено специфических изменений, характерных для сахарного диабета, в сосудах микроциркуляции различной локализации, в частности в сосудах глаз и по- 45 чек. Данный пример указывает на то, что при применении предлагаемого способа создается возможность строго дифференцированного подхода в диагностике ангиопатий у больных сахарным диабетом, Пример 3. Пациент Т., мужчина, 55 лет. Диагноз: сахарный диабет средней тяжести в состоянии компенсации.Длительность болезни 6 мес. Во время пребывания в стационаре был обследован на предмет наличия ангиопатий с помощью капилляроскопии ногтевого ложа пальцев ног,определения сосудистой проницаемости,проведения биомикроскопии конъюнктивы,оф- тальмоскопии глазного дна,исследования мочевого осадка. На основании данных исследований не было выявлено патологических изменений в сосудах. Параллельно с проведением названного комплекса обследования у данного больного определяли наличие альфа -гаптоглобина в эуглобулиновой фракции по заявленному способу. Реакция на альфао-гаптоглобин положительная, Через 8 мес от момента обследования этот же больной повторно попал в отделение для стационарного лечения, где при клиническом осмотре бып поставлен диагноз: сахарный диабет средне-тяжелой формы, лабильное течение, При осмотре окулистом имело место равномерное расширение век с множественными микроаневризмами,располагающимися по ходу верхнего и нижнего темпорального сосудистого пучка, парамакулярно, Сделано заключение: диабетическая ангиопатия сетчатки, I стадия, Таким образом, данный клинический пример свидетельствует о том, что альфа -гаптоглобин образуется на стадии заболевания, когда микроангиопатия еще не поддается диагностике, т.е. на самых ранних этапах их образования. Следовательно, появление альфа-гаптоглобина в эуглобулиновой фракции сыворотки крови является одним из первых признаков формирующейся диабетической микроангиопатии. В табл,! представлены данные по определению альфа -гаптаглобина в составе эуглобулинов при различных сосудистых заболеваниях, в табл,2— уровень сывороточных эуглобулинов и качественный анализ на содержание в их составе альфа -гаптоглобина, Предлагаемый способ обладает высокой специфичностью, поскольку альфа -гаптоглобин, как видно из табл.! и следует из приведенных примеров, обнаруживается в составе эуглобулинов только при ангиопатии диабетогенного характера. Предлагаемый способ имеет сущест-, венные преимущества перед нрототипом. Как видно из табл.2, само по,1564553 Т а б л и ц а 1 Количество исследований с отрицательной реакцией на Ф гаптоглобин Количество исследований с положи» тельной реакцией на o(<-гаптоглобин Общее количество ис следова HHH Исследуемая группа лиц 47 62 16 О О себе повьпчение количества эуглобу-. линов в сыворотке крови не может быть надежным критерием для постановки диагноза диабетическая микроангиопатия, Таким образом, предлагаемый способ обладает высокой специфичностью при диагностике диабетических микро,ангиопатий. Здоровые доноры . 11 Больные сахарным диабетом без признаков поражения сосудов Больные сахарным диабетом с наличием микроангиопатий, Больные атеросклерозом без признаков сахарного диабета Больные гломерулонефритом 6 Больные тромбофлебитом 6 Больные тирео.токсикозом 23 Формула из обре тения Способ диагностики диабетической микроангиопатии путем клинико-лабораторного обследования, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью повьппе,ния точности диагностики, проводят качественное определение альфа-гаптоглобина в сыворотке крови и при наличии последнего диагностируют диабетическую мнкроангиопатию, ! 1564553 Т а б л и ц а 2 Количество исследований Исследуемая группа лиц Количество белка в эуглобулинах сыворотки крови, г/л (М+т) Здоровые доноры Больные са6, 36+0,22 харным диабетом без 10 26+!,09 харным диабетом с мик16,43+4;42 +! 14 8! +3, 11 11,03+1 8 12 росклерозом Составитель Э, llíãàíîB РедактоР М,Циткина ТехРед П.Олийнык Корректор !1,!цароши Тираж 508 Подписное Заказ 1157 ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Óæãîðîä, ул. Гагарина,101 признаков поражения сосудов Больные сароангиопатиями Больные гломерулонефритом Больные атеНаличие (+) или отсутствие (-) альфа гапто глобина в эуглобулинах
