Инкубационная среда для иммунорадиометрического определения пролактина в сыворотке крови
Изобретение относится к медицинскому микроанализу и может быть использовано в медицине для диагностики и контроля за лечением эндокринных заболеваний. Цель изобретения заключается в упрощении и увеличении чувствительности определения пролактина. Сущность изобретения состоит в том, что при иммунорадиометрическом определении пролактина в сыворотке крови инкубационная среда содержит антитела к пролактину в виде антисыворотки, в качестве белка-наполнителя - сыворотку крови лошади и дополнительно содержит полиэтиленгликоль при следующем соотношении компонентов, мас.% : антисыворотка к пролактину - (1,5 - 600) .10 -3 125I-антитела к пролактину (3 - 5 мКи/мг) - (1,5 - 12) .10 -7 сыворотка крови лошади 3,2 - 10 полиэтиленгликоль 5,0 - 7,5 NA 2HPO 4 - (8,0 - 50) .10 -2 NAH 2PO 4 - (4,0 - 24) .10 -3 NACL (4,0 - 90) .10 -2 дистиллированная вода остальное.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСГ1УЬ ЛИК (I% 1И) (S))S G 01 N 33/534
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Антисыв оро тк а к нролактину
I-Антитела к пролактину (35 мКи/мг) (1, 5-600) ° 10 (1,5-12) -IQ
Сыворотка крови лошади
Полизтиленгликоль
Ыа,НРО+
NaH F0<
NaCl
3, 2-1,0
5,0-7,5 (8, 0-50) ° 1О (4;0 24) ° 10 (4,0-90) 10
Дистиллиров анная вода
Ос тальное
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ fHHT СССР (21) 4444065/28-14 (22) 20, 06. 88 ч (46) 15.07.90. Бюл, В 26 (71) Институт биоорганической химии
АН БССР и Институт экспериментальной зндокринологии и химии гормонов . АМН .СССР (72) О,А,Стрельченок, 10,А.Панков, А, А, Булатов, О. В . Св иридов, Л.И. Сурвило и Л,П,Будникова (53) 612. 373(088.8) (56) Lee С. -Y e t а1. Biotechnol. and
Арр.1. Biochem, 1987, v.9, р.58-65. (54) ИНКУБАЦИОННАЯ СРЕДА ДЛЯ ИММУНОРАДИОМЕТРИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРОЛАКТИНА
В СЬ1ВОРОТКЕ КРОВИ (57) Изобретение относится к медицинскому микроанализу и может быть использовано в медицине для диагностики и контроля за лечением эндокринных
Изобретение относится к медицинскому микроаналиэу и может быть исполь.зовано в медицине для диагностики и контроля за лечением эндокринных заболеваний.
Целью изобретения является упрощение и увеличение чувствительности определения пролактина.
Цель достигается применением инкубационной среды, содержащей антисыворотку к пролактину„ меченному йодом125 антитела к пролактину, сыворотку крови лощади> полиэтиленгликоль, буферные соли и воду при следующем соотношении компонентов, мас.7:
2 заболеваний. Цель изобретения заключается в упрощении и увеличении чувствительности определения пролактина °
Сущность изобретения состоит в том, что при иммунорадиометрическом опре.— делении пролактина в сыворотке крови инкубационная среда содержит антитела к пролактину в виде сыворотки, в качестве белка-наполнителя — сывороту крови лошади и дополнительно содержит полиэтиленгликоль при следующем соотношении компонентов, мас.Ж: антисыворотка к пролактину (1,5-600)-10 — антитела к пролактину (3—
-5 мКи/мг) — (1,5-12) -10 ; сыворотка крови лошади 3,2-10; полиэтиленгликоль 5,0-7,5; Иа НРО, (8,0-50). 10
Иан РО (4,0-24) 10 ; NaC1 (4,0-90)» g+
xI0 ; дистиллироьанная вода остальное. 1 табл. С::
1578659
Антисьворотку к пролактину получа ют иммунизацией кроликов чистым npo" лактином человека. Для получения антител, меченных "2 1,кодируют мышиные моноклональные антитела, выделенные из асцитной жидкости аффинной хроматографией на иммобнлизованном пролактине. Антисыворотка и I-ан!
25 титела не дают перекрестной реакции 1О с гормонам роста, тиреотропным лютеи-. низирующнм и фолликулостимулирующим гормонами, а также с пролактином лошади.;
Пример 1, Иммунорадиометрическое определение пролактина в сыво- 15 ротке крови человека при оптимальных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды.
В эксперименте получают инкубаци-. онную среду. путем смешивания реаген" 2р тов и проводят иммунорадиометрическое определение пролактина в различных пробах сьворотки крови человека. Чувствительность анализа оценивают как наименьшую определяемую концентрацию 25 .гормона, достоверно (P w 0,0)) отличающуюся от нулевой, Инкубационную среду с оптимальными значениями содержания ингредиентов готовят следующим образом, К 100 мл Зр сьворотки крови лошади приливают 1 мл антисыворотки. к -пролактину, перемешивают и прибавляют 5 г Na NaH2P04,и 6 r NaCl. После растворения солей общий объем раствора доводят до 500 мл и при постоянном перемешивании приливают 500 мл 30%-ного раствора полиэтиленгликоля (мол,масса 4000-6000) . В аналитическую пробирку вносят 0,2 мл полученной смеси и 0,2мл40 раствора " I-антител к пролактину 12$ (200.нг), В результате получается инкубаци-. онная среда со следующими значениями содержания ингредиентов, мас.%: 45 Антисыворотка к пролактину 50 10 "Х-антитела к -7 пролактину 5,0 10 Сыворотка крови лошади 5,0 Полиэтйленгликоль 6,25 Na HP0< 25 10 НаН РО 12 ° 10 NaCl 30 10 Дис тиллиров акая 55 вода Остальное В пробирку вносят О,l.,ìë анализируемой сьворотки крови, встряхивают и проводят инкубацию в течение 3 ч при комнатной температуре. Затем жидкую фазу удаляют центрифугированием и измеряют скорость счета . 2 1 в, твердой фазе. Строят калибровочный график зависимости скорости счета " I от концентрации пролактина в калибровочных пробах и по этому графику определяют содержание пролактина в неизвестных пробах сыворотки, Результаты эксперимента приведены в таблице. Пример 2 ° Иммуиорадиометрическое определение пролактина в сыворотке крови человека при нижних граничных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды. Для проведения анализа используют инкубационную среду с нижними граничными значениями содержания ингредиентов, мас.%: Антисыворотка к пролактину l 5 ° 10 <25 I-Антитела к 1,5-10 12 -10 пролактину Сыворотка крови лошади 3,2 Полиэтиленгликоль 5, 0 яа НР04 8,0 10 NaH2PO 4,0 F10 NaC1 4,0 10 Дистиллированная вода Остальное Получение инкубационной среды и иммунорадиометрическое определение пролактина проводят, как описано в примере 1, за исключением того, что количества добавляемых ингредиентов инкубационной среды изменяют в соответствии с заданными значениями нижних граничных концентраций. Результаты эксперимента приведены в таблице. Пример 3, Иммунорадиометрическое определение пролактина в сыворотке крови человека при верхних граничных значениях содержания ингредиентов инкубационной среды. Для проведения анализа используют инкубационную среду с верхними граничными значениями содержания ингредиентов, мас.%: Антисьв о ро тк а к -э пролактину 600 10 "2 1-Антитела к пролактину Сьв оро тк а кров и лошади l0! 5786 Полиэтиленгликоль На2НР04 NaH Р04 NaC1 Дистиллированная вода 7,5 50 10 24 ° 10 90 10 Остальное (l, 5-1, 2) 0 5, 0-7,5 (8,0-50).10 (4,0"24) 10 (4,9-90) .10 коль Яа, НР04 КаЙ2Р04 NaC1 Дистиллированная вqpa етрического 0с тальное ри. Аналитические параметры нммунорадиом определения пролактина Инкубационная Измеренные концентрации пролахтина в сыворотсреда по ри- хах», нг/мл мерам 1 . 2 3 4 0,3 3,1 0,4 2,9 0,35 3,2 5,6 . 7,9 5,3 7,9 11,3 234 11,В 220 11,4 242 5,3 В,! Виды съворотох: 0 — не содержащая пролактина; 1,2 — здоровых мужчин; 3,4 — здоровых жеъщин; 5 - беремениънс женщин Расчетные значения минимальной определяемой концентрации, доса.+ товерно (P (0,01), отличающейся от нулевой. Составитель А.Скурат Техред Л. Сердюкова Коррек тор- Т. Малец Редактор Е.Копча Заказ 1915 Тираж 515 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 ° Производственно-издательский комбинат "Патент", r.Ужгород, ул. Гагарина, 101 Получение инкубационной среды и .иммунорадиометрическое определение пролактина проводят, как описано в примере 1, эа исключением того, что количества добавляемых ингредиентов инкубационной среды изменяют в соответствии с заданными значениями верх15 них граничных концентраций. Результаты эксперимента приведены в таблице. 20 При использовании предлагаемой инкубационной среды достигается более высокая чувствительность определения (0,3-0,4 мг/мл), чем в методе с использованием инкубационной среды — 25 прототипа (! мг/мл). Кроме того, достигается существенное упрощение процесса получения инкубационной среды, который включает одну простую стадно смешения ингредиентов в необходимых 3О пропорциях, не требует специальной очистки антител и исключает их поте59 б Формула изобретения Инкубационная среда для иммунора- диометрического определения пролактина в сыворотке крови, включающая антитела к пролактину, меченные йодом-! 25 антитела к пролактину, белок наполнитель, водный буферный раствор, отличающаяся тем, что, с целью упрощения и повышения чувствительности при использовании ее для определения, она содержит антитела к пролактину в виде антисыворотки, в качестве белка наполнителя — сыворотку крови лошади, буферного растворанатрийфосфатный буфер и дополнительно содержит полиэтиленгликоль при следующем соотношении компонентов, мас.Ж: Антисыворотка к пролактину (1,5-600):10 1 I-антитела к пролактину (35 мКи/мг) Сыворотка крови лошади 3,2-10 Полиэтиленгли
