Способ получения сорбента для аффинной хроматографии

 

Изобретение относится к биоспецифическим сорбентам и позволяет повысить сорбционную емкость и сократить длительность процесса получения сорбента. Хлопковые волокна обрабатывают водным раствором периодата натрия до степени окисления 5-10%, затем носитель обрабатывают 5-20%-ным раствором альбумина в физиологическом растворе при PH 8-10 в течение 6 ч. Носитель промывают водой и обрабатывают 2-5%-ным раствором гормона в 70%-ном диоксане в присутствии карбодиимида. Продукт промывают диоксаном. 80--ным водным этанолом и водой. Получают сорбент с содержанием гормона 15-25 мг/г. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 В 01 D 15/08

ГОСУДАРСТВ ЕННЫИ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4477192/28-26 (22) 17.08.88 (46) 23.08.90. Бюл, N 31 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт текстил ьно-галантерейной и ромышленности (72) Е,В,Богуславская, С,В.Стурчак, В.Н.Филатов и А.Д.Вирник (53) 543.544(088,8) (56) Туркова Я. Аффинная хроматография.—

М.: Мир, l980. с. 289, 353.

Plctras R.j., Szego С.М. Specific binding

sites for, otstrogen at the onter surfaces of

isolated endornetrlal cells. — Nature, 1977, ч.

265, М 6, р.66 — 72. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ COPBEHTA ДЛЯ

АФФИННОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Изобретение относится к биоспецифическим сорбентам и может быть использовано для выделения чистых белковых рецепторов и антител гормонов.

Целью изобретения является повышение сорбционной емкости и сокращение длительности процесса получения сорбента.

Пример 1. 10 г хлопковых волокон обрабатывают водным раствором периодата натрия при отношении иодной кислоты

0,07035 r на 1 г волокон при рН 4,5, модуле

5 и комнатной температуре в течение 24 ч.

Получают волокно со степенью окисления

5%, Полученное волокно обрабатывают 5%ным раствором альбумина в забуференном физиологическом растворе при рН 8, модуле

5 в течение 6 v при 20 С.

Волокно промывают водой в течение

1 ч при модуле 10 при 20 С и проводят,Я2„, l586740 А1 (57) Изобретение относится к биоспецифическим сорбентам и позволяет повысить сорбционную емкость и сократить длительность процесса получения сорбента. Хлопковые волокна обрабатывают водным раствором периодата натрия до степени окисления 5-10%, затем носитель обрабатывают 5 — 20%-ным раствором альбумина в физиологическом растворе при рН 8 — 10 в течение 6 ч. Носитель промывают водой и обрабатывают 2-5%-ным раствором гормона в 70%-ном диоксане в присутствии карбодиимида, Продукт промывают диоксаном, 80% — ным водным этанолом и водой. Получают сорбент с содержанием гормона 1525 мгlг. 2 табл. иммобилизацию гидрокортизона обработкой его 2%-ным раствором в 70%-ном водном диоксане в присутствии 50 мг

1-этил-3 3-диметиламинопропил)-карбодиимида. Обработку продолжают 4 ч и добавляют еще 50 мг карбодиимидаМодуль обработки 5. Время 14 ч при 20 С, Промывку целевого продукта проводят диоксаном в течение 1 ч при модуле 10 ч, 80%-ным водным этанолом при модуле 51 ч и водой при модуле 10 15 мин. Контроль качества промывки проводят спектрофотометрически. Целевой и родукт содержит

50 мг!г альбумина и 15 мг/г гемисукцината гидрокортизона (табл. 1).

Пример 2. 10 г хлопковых волокон окисляют по примеру 1, но при отношении иодной кислоты 0,09849 г на 1 r волокна.

Получают волокно со степенью окисления

7%. Полученное волокно обрабатывают1586740

Содержание гемисукцината гидрокортизона, мг/г

Количество сорбируемых клеток на г

Количество сорбируемых антител к гидрокортиэону, мгl г (сорбционная емкость

Содержание альбумина, мг/г

Носитель

Пример

3.7 10

45 10

6,0 10

1,0

12 10

120

2

Известный

Целлюлоза

Найлон

10%-ным раствором альбумина в эабуфе, ренном физиологическом растворе при рН

9, модуле 5 в течение 6 ч при 20 С. Волокно промывают водой и проводят иммобилизацию гидрокортиэона обработкой его 3%- 5 ным раствором в 70%-ном водном диоксане в условиях примера 1. Промывку проводят по примеру 1. Целевой продукт содержит

100 мг альбумина на 1 г носителя и 20 мг гемисукцината гидрокортизона на 1 г носи- 10 теля.

Пример 3. Окисление хлопковых ,волокон проводят по примеру 1, но при отношении иодной кислоты 0,1407 г на 1 г волокна. Получают волокно со степенью 15 окисления 10%. Полученное волокно обрабатывают 20%-ным раствором альбумина в зэбуференном физиологическом растворе при рН 10, модуле 5 в течение 6 ч при 20 С.

Волокно промывают. водой и проводят обра- 20 ботку 5%-ным раствором гидрокортиэона в

70 %-ном водном диоксане в условиях примера 1. Промывку проводят по примеру 1, Целевой продукт содержит 200 мг альбумина и 25 мл гормона на 1 г носителя. 25

Пример 4, 10 г хлопковых волокон обрабатывают по примеру 1 для получения волокна, содержащего 50 мг/г альбумина, Вместо гемисукцината гидрокортизона к содержащему альбумин волокну добавляют 30

2%-ный раствор гемисукцината эстрадиола и иммобилизацию его проводят по примеру

1 для гемисукцината гидрокортизона. Целевой продукт содержит 50 мг/г альбумина и

16 мгlг гемисукцината эстрадиола. 35

Сорбционные свойства йриведены в табл, 2.

Пример 5. 10 r хлопковых волокон обрабатывают по примеру 2, но вместо ге- 40 мисукцината гидрокортизона добавляют такое же количество гемисукцината эстрадиола, Промывку проводят по примеру

1. Целевой продукт содержит 100 мг альбумина на 1 г носителя и 22 мг гемисукцината 45 эстрадиола на 1 г носителя (табл, 2).

Пример 6. Окисление 10 г хлопкового волокна и иммобилизацию на него альбумина проводят по примеру 3. При обработке гормоном вместо гемисукцината гидрокортизона добавляют такое же количество гемисукцината эстрадиола (5%-ный раствор в

70%-ном диоксане в условиях примера 1), Промывку проводят по примеру 1. Целевой продукт содержит 200 мг альбумина и 27 мг гормона на 1 г носителя (табл, 2).

Данные по сорбционной емкости сорбентов, полученных предлагаемым и известным способами, представлены в табл. 1 и

2, Из табл, 1 и 2 видно, что предлагае ы: способ позволяет получить сорбент, содержащий в 10 раза больше иммобилизованного гормона, сорбционной емкостью в

220-370 раэ больше, чем у сорбента, получаемого по известному сг"осп g. Длительность процесса сокращается с 7,! до 40 ч, а получаемый сорбент не требует особых условий хранения и может храниться при атмосферном давлении и комнатной температуре.

Формула изобретения

Способ получения сорбента для аффинной хроматографии, включающий последовательную обработку текстильного носителя, содержащего альдегидные группы, водным раствором альбумина,и раствором гормона в 70%-ном водном диоксане в присутствии карбодиимида с последующей промывкой полученного сорбента. отличающийся тем, что, с целью повышения сорбционной емкости и сокращения длительности процесса, в качестве текстильного носителя используют альдегидсодержащий целлюлоэный материал со степенью окисления 5—

10%, обработку проводят 5-20%-ным раствором альбумина в физиологическом растворе при рН 8 — 10 до содержания альбумина 50 — 200 мг/г носителя и затем 2 — 5%ным раствором гормона до содержания

15-25 мг/г носителя и продукт последовательно промывают диоксаном, 80%-ным водным раствором этанола и водой.

Таблица 1

1586740

Таблица 2

Составитель Т,Чиликина

Техред М,Моргентал Корректор Э.Лончакова

Редактор И.Шулла

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 1О1

Заказ 2382 Тираж 571 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб„4/5