Способ получения препарата для перорального введения
Изобретение относится к ветеринарии , в частности к способам получения препаратов для перорального введения. Целью изобретения является повышение стабильности препарата в желудочно-кишечном тракте. Поставленная цель достигается тем, что наря- / ду с немодифицированными природными полипептидами в качестве носителей используют модифицированные природные полипептиды, например флатоилжелатину. Способ осуществляют.путем смешивания 0,5-10%-ного раствора биологически активного вещества последовательно с 2-10%-ным раствором белков соединительных тканей животных и 1-10%-ным раствором фталоилжелатины при 10-40°С в объемном соотношении . 1,0:0,1-5,0:0,1-5,0, после чего смесь либо высушивают и измельчают, либо охлаждают до образования геля, который измельчают и обрабатывают дубильными веществами и антиоксидантами. 2 табл. с S (Л
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН цц А 61 К 9/52
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ
Il0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
К АBTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21 ) 4638842/1 3 (22) 20. 01 . 89 (46) 30.03 ° 91. Бюл ° - 12 (71 ) Украинский научно-исследовательский ветеринарный институт и ИГУ им. М.В.Ломоносова (72) А.П.Лазарев, Т.А.Белодед, " Р.А.Гиззатуллина, А.В.Левашов и А.В.Кабанов (53) 615.3.34 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
Ф 1223454, кл. А 61 К 9/52, 21.10.83. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРЕПАРАТА ДЛЯ
ПЕРОРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ (57) Изобретение относится к ветери-, нарии, в частности к способам получения препаратов для перорального °
:введения. Целью изобретения является повышение стабильности препарата в
Изобретение относится к ветеринарии, в частности к способам получения препаратов для перорального введения.
Целью изобретения является повышение стабильности препарата в желудочно-кишечном тракте.
Пример 1. К 10 мл вирусосо, держащей жидкости (вакцинный штамм
БУК-628 вируса болезни Ауески свиней, исходный титр вируса 7,5 18 ТЦЦ о/уд концентрация белка 17) добавляют 5Еный раствор соединительно-тканных о белков в соотношении 1:4 при 20, С, тщательно перемешивают, вносят 1Х полиакриловой кислоты, снова тщаЯО 1637808 А 1
2 желудочно-кишечном тракте. Поставленная цель достигается тем, что наряду с немодифицированными природными полипептидами в качестве носителей используют модифицированные природные полипептиды, например флатоилжелатину. Способ осуществляют. путем смешивания 0,5-102-ного раствора биологически активного вещества последовательно с 2-103-ным раствором белков соединительных тканей животных и
1-10Х-ным раствором фталоилжелатины при 10-40 С в объемном соотношении
1,0:0,1-5,0:0,1-5,0, после чего смесь либо высушивают и измельчают, либо охлаждают до образования геля, который измельчают и обрабатывают дубильными веществами и антиоксидантами.
2 табл. тельно перемешивают охлаждают лиоУ Э филизируют, измельчают, высушивают . материал до частиц размером 0,1 мм или полученный гель измельчают до . G© гранул размером 1,0 мм и обрабатывают CO пылью таннина; Полученный препарат ин- QO инкубируют в течение 3-5 ч в желудочном соке свиней (рН 2;О). Затем доводят рН среды 7,5-8,5, инкубируют в течение 30 мин и титруют в культуре клеток почек поросенка СПЗВ. Титр Ъ вируса Бук-628 в этом случае опреде- Д. лялся на уровне 3,5-4,0 1Р ТЦД о/ > т.е . снижался на 3,5-4 порядка (в
1000 раз) .
Пример 2. К 10 мл вирусосодержащей жидкости (вакцинный штамм
1637808, БУК-628 вируса болезни Ауески свиней исходный титр вируса 7,5 1g ТЦД о, концентрация белка 1%) добавляют при перемешивании 5%-ный раствор соединительно-тканных белков, затем 3%-ный раствор фталоилжелатины (м.м. 4060 тыс., содержание связанных фталоильных групп 4-5%) в соотношении
1:0,5-0,5 при 20 С. Смесь охлаждают, лиофилизируют и измельчают. Получен.— ный препатат после инкубации в течение 3-5 ч в желудочном соке (рН 2,0) слабощелочной среде (рН 7,5-8,5) в течение 30 мин титруют в культуре клеток СПЭВ. Титр вируса БУК-628 определяют на уровне 7,0-7,5 18 Т1Щ ц д т.е. он фактически не снижался после инкубации в желудочном соке. Повышение устойчивости вируса болезни Ауески, иммобилизованного таким образом, достигается на 3-4 порядка.
Пример 3. Выполняется по . примеру 2, только используют растврры различных концентраций исходного продукта, немодифицированных соединительно-тканных белков и фталоипжелатины. Результаты определения инфекционной активности вируса болезни
Ауески, иммобилизованного в зависимости от соотношения компонентов, их концентрации и температурных режимов способа после инкубации в желудочном соке в течение 3-5 ч; представлены в табл. 1.
Из данных табл. 1 следует, что оптимальной концентрацией вирусосодержащей жидкости (исходный продукт) является 0,5-10%-ная концентрация (экс- перименты Р 3 7) оптимальной кон 40 центрацией раствора соединительнотканных белков животных — 2-10Х (эксперименты Р 0-12), оптимальной концентрацией раствора модифицированного полипептида (фталоилжелатины) — 45
1-10Х (эксперименты и 13-17) . Оптимальным соотношением компонентов (У:У:У) вирусосодержащая жидкость. раствор соединительно-тканных белков:раствор фталоилжелатины является
1:0,1-5,0:0,1-5,0 (данные экспериментов У 18-27, табл. 1). Оптимальные температурные режимы способа 10-40 С о (эксперименты 11 28-31, табл. 1) .
Пример 4 ° Выполняется по примеру 2, только на заключительном
55 этапе получения препарата вместо вы сушивания и измельчения смесь вирусосодержащей жидкости, растворов соединительно-.тканных белков и фталоилжелатины охлаждают до образования геля, который затем измельчали и обрабатывали пылью дубильных веществ (таннином) и антиоксидантов (аекорбиновой кислотой), После инкубации полученного таким образом препарата в желудочном соке (рН 2,0) в течение
3-5 .ч и далее обработкой в среде с рН 8,0 в течение 30 мин активность вируса болезни Ауесни в культуре клеток составляла 6,5-7,0 lg ТЦД @ „
Пример 5. Исходный препарат интерферона получают путем индукции лейкоцитов селезенки (культивируемых в среде 193) вирусом болезни Ньюкаст.— ла, штамм Н (10-100 Т1(Л о,дат„+ ) и фитогемагглютинином (20 мкг/мл кле» точной суспензии) в течение 20-24 ч.
Затем культуральную жидкость центри-. фугируют (2-5 тыс. g, 30 мин), лиофилизируют и полученный сухой препарат растворяют до концентрации белка 0,112Х. Такой препарат интерферона контролируют по его противовирусной активности в культуре клеток ПСП или СПЭВ против вируса визикулярного. стомати-г: та — ВВС (штамм Индиана, доза 1001000 ТБД ). .При этом титром интерферона является то наименьшее разведение препарата, которое предотвращает цитопатическое действие ВВС. В работе использовали исходные препарат ты интерферона с титром 2 10
В табл. 2 приведены данные по активности препарата интерферона, иммобилизованного согласно предлагаемого способа, с использованием немодифицированных белков соединительных тканей и модифицированного полипептида (фталоилжелатины) в зависимости от параметров компонентов и температурных режимов способа иммобилизации, после обработки желудочным соком свиней.
Данные, приведенные в табл. 2, свидетельствуют о том, что наиболее оптимальными параметрами предлагаемого способа являются следующие: 0,510%-ный раствор исходного продукта (в этом примере — интерферон) смеши- вают последовательно с 2-10Х-ным ра- створом соединительно-тканных белков и 1-10Х-ным раствором модифицированных природных белков (фталоилжелатио ны) при 10-40 С в соотношении VË::Ч
1:0,1-5,0:0,1-5,0, после чего либо высушивают и измельчают, либо охпаж1637308 дают до образования геля, который измельчают и обрабатывают дубильными веществами и антиоксидантами.
Таким образом, как в примере с использованием в качестве исходного . продукта вируса вакцинного штамма
ВУК-628 болезни Ауески, так и в примере с препаратом интерферона показана высокая воспроизводительность и зффективность предлагаемого способа. последующей обработкой дубильными ве- ществами, отличающийся тем, что, с целью повышения стабиль5 ности препарата в желудочно-.кишечном тракте, биологически активное вещество используют в концентрации 0,5102, а белки соединительных тканей животных в концентрации 2-103, в полученную смесь при 10-40 С дополнио тельно вводят 1-103-ный раствор фта- лоилжелатины при следующих объемных соотношениях, мас.ч.:
Раствор биологичес15 -ки активного вещества 1,0
Раствор белков соединительных тканей животных
20 1-10Х-ный раствор фтал оилжела тины
Формула изобретения
Способ получения препарата для перорального введения, включающий смешивание раствора биологически активного вещества с раствором белков соединительных тканей животных, охлаждение до образования геля с
0,1-5 0
0,1-5,0
Т а бл и ца 1
Активность вируса болезни Ауески, иммобилизованного с использованием нативных н модифицированных природных полипептидов, в зависимости от параметров компонентов и температурных режимов способа иммобилизации
ТемпеКонцентрация компонентов, Е
Титр зьруса болезни Ауески (БУК-628)после инкубацни препаратов в желудочном соке свиней в течение
3-5 ч и последующей выдержки в течение 30 мин в среде рН 8,0 (1а ТШ1зо(Ллл ) Эксперимент, Л
Соотношения
V:V:V вирусосодержащая жидкость:раствор соедннителььоратура получения
Раствор немодифицированных белВирусосодержащая жидкость (титр вируса болезни
Ауески),, Тц11 50/МЛ
Раствор модифицированного полипептидз (фталоилжелатины) смеси, с ков соединительных тканей житканных белков:раствор фталоилжеланотных тины
1:0:0
1:4:0
3,5
2 (прототип)
4
6
8
11
12
13
14
16
17
18
19
21
22
23
0,3
0,5
5,0
10,0
11,0
1
1
1
1
1
1
1
1
5
5
1
5
11
5
5
5
5
5
3
3
3
3
3
0,5
3
11
3
3
3
1:0,5:0,5
1: 0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1: 0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0 5:0 5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,1:0,5
1:0,5:0,5
1:5,0:0,5
1:6,0:0,5
1:0 5:0 05
1: 0,5:0, 1
5,0
6,0
7,0
4,5
4,0
4,5
5,5
7 5
6,5
6,0
5,5
7,0
7,5
6,5
5,5
5,5
6,0
7,5
6,0
5,5
4,5
6,0! 637808!
1Родолжение табл, !
Титр вируса болезни Ауески (БУК-628)после ннкубации препаратов в желудочном соке сви- . ней в течение
3-5 ч и последующей выдержки в течение 30 мин в среде рН 8,0 (>8 Т07(з1мл ) Эксперимент; 1З
Темпеб!тс.и шенин
Ч;Ч:V вирусосодержащая жидкость:раствор соединительноКонцентрация компонентов, Х ратура получения
Раствор немодлфицированных белРаствор модифицированного полипептида (фталоилжелатины) Внрусосодержащая жидкость (титр вируса болезни
Ауески), Т1 7(50/Nh смеси, ОС ков соединительных тканей жнтканных белков:раствор фталонлжела- . вотных тины
7,5
5,5
5 0
6,0
5,0
5,5
3,0
26
27
28
29
1:0,5:0,6
1:0,5:5,0
1:0,5:6,0
1:0 5:0 5
1:0,5:0,5
1: 0,5:0,5
1: 0,5:0,5
5 3
5 3
5 3
5 3
5 3
5 3
5 3
Таблица 2
Активность препарата интерферона, иммобилизованного с использованием нативных и модифицированных полипептидов, в зависимости от параметров компонентов и температурных режимов, после обработки желудочным соком свиней
Соотношения
Ч .Ч:V препарата. интерферона:раствор соединительно-тканных белков: раствор .фталоилжелатины
Концентрация компонентов, Х
Титр интерферона (разведение) после инкубации в желудочном соке свиней в течение 3-5 ч и последующей выдержки в течение 30 мин в среде с рН 8,0
Экспери мент, Ф
Температураа смеси, С ренара нтерфе она аствор одифицнованного олипепт ида фталоилелатины) аствор не одифициро анных бел ов соедиителъных каней
1:0:О 20
1:4:0 ° 20
2 (прото0
2 ° 10 тип) 3
5..6
9
11
12
13
14
16
17
18
19
21
22
23
24
26
27
28
29
0,3
0,5
5,0
10,0
11,0
1 °
1
1 !
1
1
1
1
1
1
1
1
5
5
5 .1
5
11
5
5
5
5
5
5
5
5
3
3
3
3
3
0,5
3
11
3
3
3
3
3
3
1:0,5:0,5
1:0 5!Оэ5
1:0,5: 0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:.0,5: 0,5
1:0,5: 0,5
1:0,5: 0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5 .1:0,5: 0,5
1:0,5: 0,5
1:0,5: 0,5
1:0,5:0,5
1: 0,5:0,5
1:0,5: 0,5
1:6,0:5,0
1:0,5: 0,05
1:0,5:0,1
1:0,5:0,6
1:0,5:5,0
1:0,5:6,0
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
1:0,5:0,5
42! ° 10
1 10
1 10
1 10
1 ° 10
2 ° 10
5 ° 10
1 ° 10
1 ° 10
1 ° 10
1 10
1 10з
1 10
1,10-г к
1 ° 10
1 10
1 10
1 ° 10
2. 10 — -зо— ! 10-2,т
2 10
2 10
1 10
1 1О
1 1 0- З,о
1,101 10
1 .10
