Питательная среда для выращивания микробактерий

 

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для культивирования возбудителя туберкулеза. Целью изобретения является повышение выхода бактериальной массы. Для этого в качестве основы среды используют ферментолизат дрожжей рода Candida и в состав среды дополнительно вводят стимулятор роста - лизат галобактерий. Выращивание культур проводят при 37°С в течение 52-60 дней. Выход бактериальной массы при этом составил 32,4-42,4 г/л. 3 табл.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)з С 12 N 1/20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCKOMY СВИДETEJlbCTBY (21) 4647115/13 (22) 24.12.88 (46) 30.06.91. Бюл. М 24 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.P. Коваленко (72) Г.И. 1(стинова, В.В. Корягин, В,И. Косенко, Н.П. QBANGHKQ Я.Я. Шкоп, Г.П. Головкина и О.И; Валихова (53) 576.8.093(088.8) (56) Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам .исследования, М., 1982, с. 80.

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности к получению питательных сред.

Целью изобретения является повышение выхода бактериальной массы и сокращение сроков культивирования.

Пример 1. Питательную среду для культивирования микобактерий готовят следующим образом (иэ расчета в г на 1 л).

Берут навески, г/л; аммония лимоннокислого двузамещенного 1,0-6,0; калия фосфорнокислого двузамещенного 3,0-10,0; лимонной кислоты 4,0-10,0; магния сернокислого 0,3-1,0; железа сернокислого 0,020,15; цинка сернокислого 0,1-0,5, растворяют в 200-300 см дистиллированной воды, добавляют 31,8-106,2 r глицерина. Далее берут навеску ферментолизата

5,0-25,0 г, заливают дистиллированной водой (200 см ), подогревают на водяной бане при постоянном помешивании до полного его растворения.

„„ Ы „„1659472A1 (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКОБАКТЕРИЙ (57) Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для культивирования возбудителя туберкулеза.

Целью изобретения является повышение выхода бактериальной массы. Для этого в качестве основы среды используют ферментолизат дрожжей рода Candida и в состав среды дополнительно вводят стимулятор роста — лизат галобактерий. Выращивание культур проводят при 37ОС в течение 52 — 60 дней. Выход бактериальной массы при этом составил 32,4 — 42,4 г/л. 3 табл.

Лиэат галобактерий готовят следующим образом. Берут 1-5 ч.биомассы галобактерий, 15 — 25 ч.физиологического раствора и гомогенизируют 15 — 20 мин, слой пены уда- д ляют.

Растворы ингредиентов и ферментолизатов смешивают, доводят дистиллированной водой до 1000 см, подщелачиаают

10 -ным раствором аммиака до рН 7,0-7,4, Ф фильтруют через бумажный фильтр, добав- 4 ляют 1 — 10 см лиэата галобактерий, разливают и стерилизуют текучим паром в течение 20-30 мин.

Пример 2. Питательную среду готовят согласно примеру 1.

Для приготовления 1 л питательной среды берут, г: ферментолиэат 5,0; аммоний лимоннокислый двузамещенный 1,0; калий фосфорнокислый двузамещенный 3,0; лимонную кислоту 4,0; магний сернокислый

0,3; железо сернокислое 0,02; цинк сернокислый 0,1; глицерин 31,8; лизат галобакте1659472 рий 0,003, дистиллированную воду — до 1 л.

Растворяют, доводят рН до 7,2, разливают по колбам и стерилиэуют текучим паром в течение 30 мин. Посев микобактерий проводят по общепринятой методике. Выращивают культуры в термостате при 37 С в течение 60 дней.

Выход бактериальной массы для разных видов микробактерий представлен в табл. 1-3.

Выход бактериальных клеток микобвктерий возбудителя туберкулеза бычьего . (штамм "8"), человеческого (штамм "192") и птичьего (штамм "780") видов с 1 л питатель ной среды составил оответственно 32,4;

31,7 и 36,5 г (см. табл. 1).

Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых микобактерий (штамм "18023") и атипичных микобактерий (штамм

fortuitum) представлен соответственно в табл. 2 и 3 и составляет 35,3 и 34,8 r с 1 л питательной среды. При осуществлении выращивания по прототипу выход биомассы составляет 13 г/л АСВ.

Пример 3, Культуру микобактерий возбудителя туберкулеза выращивают в термостате при 37 С на питательной среде следующего состава, г/л: ферментолиэат

20,0; аммоний лимоннокислый двузамещенный 4,0; калий фосфорнокислый, двузамещенный 6,0; лимонная кислота 6,0; магний сернокислый 0,6; железо сернокислое 0,08; цинк сернокислый 0,3; глицерин 53,1; лизат галобактерий 0,015; дистиллированная вода — до1л, рН 74, Выращивают культуры в термостате при 37 С в течение 55 дней.

Выход биомассы микобактерий возбудителя туберкулеза бычьего, человеческого и птичьего видов представлен в таблице 1 и составляет соответственно 41,2, 40,9 и 41,6 г/л АСВ. Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых и атипичных микобактерий представлен соответственно в таблицах 2 и

3 и составляет 40,4 и 39,5 г/л АСВ.

При осуществлении выращивания по прототипу выход биомассы составляет 13 г/л АСВ.

Пример 4. Возбудитель туберкулеза бычьего вида выращивают в колбах на питательной среде следующего состава, г/л: ферментолиэат 25,0; аммоний лимоннокислый двузамещенный 6,0; калий фосфорнокислый двузамещенный 10,0; лимонная

3,0-10,0

4,0-10,0

0,3-1,0

0,02-0,15

0,1-0,5

31 8 — 106,2

До 1л кислота 10,0; магний сернокислый 1,0; железо сернокислое 0,15; цинк сернокислый 0,5; глицерин 106,2; лизат галобактерий0,03; дистиллированная вода — до 1 л, рН 7,0.

5 Выращивание культуры в термостате при 37 С в течение 55 дней.

Выход бакмассы микобактерий возбудителя туберкулеза бычьего, человеческого и птичьего видов по данным табл. 1 состав10 ляет соответственно 42,4; 41,8 и 43,2 г/л

АСВ.

Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых и атипичных микобактерий составляет соответственно 44,1 (см. табл, 2) и

15 42,6 г/л АСВ (см. табл. 3).

Таким образом, на предложенной среде выход микобактерий выше в 3 — 3,5 раза по сравнению с контролем. Согласно предложенному способу можно культивировать

20 микобактерии с приростом бактериальных клеток на 30 — 3007 и заменить аспарагин на ферментолизат дрожжей рода Candlda.

Формула изобретения

Питательная среда для выращивания

25 микобактерий, содержащая источник органического азота, магний сернокислый, соли цинка, железа и r.èìoííoé кислоты, калий фосфорнокислый двузамещенный, лимонную кислоту, глицерин, дистиллированную

30 воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения выхода бактериальной массы и сокращения сроков культивирования, в качестве источника азота используют ферментолизат дрожжей рода Candlda и лиэат

35 галобактерий, в качестве солей цинка, железа и лимонной кислоты — цинк сернокислый, железо сернокислое и аммоний лимоннокислый двузамещенный при следующем количественном соотношении компонентов, 40 г/л:

Ферментолизат дрожжей рода Candida 5,0 — 25,0

P,изат галобактерий 0,003 — 0,03

Аммоний лимоннокислый

45 двуэамещенный 1,0-6,0

Калий фосфорнокислый двузамещенный

Лимонная кислота

Магний сернокислый

50 Железо сернокислое

Цинк сернокислый

Глицерин

Дистиллированная вода рН 7,0-7,4

1659472

I и -I

1О!

1 1 !

-с 1 = 1

Н1сЧ

Н le

М о сЧЬ СЧ л а к ° л

О ООлЬ

:Р

ОООл к к а

ОО О

О л сс

СЧ

О а сО

О О О О - Л c I О Ф л л в a a л л л в а

Ф Оо оосол е О 3

О л ссай, СЧ л б сс

О ООО л л л л °

Ф OO»О

ЛСЧ О 3 3 л а в в а

О Ф О Л СЧ

О

Ю

СЧ ф 1

М -ОМФ л к а л а

О МОЛ ссЪ

ОООО

° к л в

ФФОО

О

О

О

СЧ

О л 3 л

- — 1

Н I O i

H I сс1

Мв ОМCh

Л Л Л Л Л

О с 1 О с. О

CO

О ОФО л л л л 0 Ю О О

° \

СЧ

О л

Щ

М -ОМСЧ

Л Л Л Л Л

ОМО:ссс

О О 0 О в a a л

ФФОО

О а

СЧ .! Ф

I 1 1

1 1

1 3 4

I !

I. !

1 и 1

О 1

Ф

1

I

I

СЧ I

О\

СЧ

ООМО л в в в

М ОО

М е- ф О СЧ 0 \ л л л л л

О-ОлФ I

М М 1

1е ф с0 Сс!

О Э 0

Сс! Э

О л

Щ и-.

Ое О

Э 4 О

Э Се

И ас О О

Се1

СО О СЧ . л л л в л

О -ОлС Ъ С 1

СЧ

ООМО

a a л л

М ОО

О л

Ю. н ) 1

1 ф

СЧ

ООМО в л л

М б ОО

О СЧ O лф в л л

О аОЛСЧ

С 1 1

СЧ О а л л а

ОМ 1 ЛМ сс с

° I

34

О СЧ

& Ch

Э °

2 0

1е

1 О 0 w

1 М С4 Се

Оосссо л а а л

A

Ю л сГ

О л

СЧ

М Н

Н О

Рс Се

Э О

Н Х

A 0 с6 Э с0

Э

tI IC1

О О ф И

= Р

$ o.

f Ф

Н О А

Е»

0 5

Э ь U

Де 1С!

3 ! е 1 8 3

Ю

В я е

X Q X >Y, 0

О О Ж

0 О О Ж

О 3 Ж Э !е & И C4 Qe О

0 Э Э

ОИCC000, 9 63 Cl!

Й жа О V

Ф Ж Ж Д 6)

if Е g и ь4 еЛЛэеЛ

Ц

jg e

0 ICl

Э

1 3 I

0 1 сс! О 1

Э g qj

Х Ге 10

Рю I

Э & t(I с6 О I

М m tI 1

С Д О,сй 1

Таблица 2

Выход бактериальных клеток кислотоустойчивых микобактерий (штамм

"18023") с 1 л питательной среды (г АСВ) КонтОбразец питательной среды, г/л

Ингредиент роль ная, г/л

ЕЕЕ

5,0

5,0

6,0

4,0

2,0

1,0

10,0

10,0

1,0

О, 15

0,5

106,2

0,03

7,4

44,1

Таблица 3

Выход бактериальньм клеток атипичных микобактерий (fortuitum) с 1 л питательной среды (в г АСВ) КонтОбразец питательной среды, г/л

Ингредиенты рольная, г/л

I II III

20

5,0

4,0

6,0

1,0

Составитель Г.Соболева

Редактор Л, Герасимова Техред М.Моргентал Корректор М.Кучерявая

Заказ 1820 Тираж 384 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москвв, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, yn,Ãàràðèíà, 101

Аспарагин

Ферментолизат

Аммоний лимоннокислый двузамещенный

Калий фосфорнокислый двузамещенный

Лимонная кислота, Магний сернокислый

Железо сернокислое

Цинк сернокислый

Глицерин

Лизат галобактерий рН

Выход бакмассы с 1 л (г) Аспарагин

Ферментолизат

Аммоний лимоннокислый двуэамещенный

Калий фосфорнокислый двузамещенный

Лимойная кислота

Магний сернокислый

Железо сернокислое

Цинк сернокислый

Глицерин

Пизат галобактерий рН

Выход бакмассы с 1 л (r) 5,0

4,0

0,5

0,05

0,1

53,1

7,2

13,0

5,0

4,0

0,5

0,05

О,1

53,1

7,2

13,0

3,0

4,0

0,3

0,02

0,1

31,8

О, 003

7,2

35,3

3,0

4,0

0,3

0,02

0,1

31,8

О, 003

79 2

34,8

6,0

6,0

О,б

0,08

0,3

53,1

О, 015

7,3

40,4

6,0

6,0

0,6

0,08

0,3

53,1

О, 0015

7,3

39,5

10,0

10,0

1,0

0,15

0,5

106, 2

0,03

7,4