Сухой бактериальный препарат для получения продукта типа йогурт

 

Изобретение относится к молочной промышленности и биотехнологии и может быть использовано в качестве продукта, обладающего дезодорирующим действием, и в качестве добавки к кормам для животных и птиц. Цель изобретения - придание целевому продукту повышенного дезодорирующего эффекта . Изобретение заключается в создании композиции, содержащей по крайней мере один штамм молочнокислых палочек Lactobacillus deodorans,. Lactobacillus cleorans и смешанную культуру Lactobacillus sulfurica PERM P 7383 или PERM P 7384 и Lactobacillus nitrosus PERM P 7385 или PERM P 7386, из молочнокислых стрептококков Streptococcus faecalis PERM P 2083 или PERM P 7382, способных продуцировать антибиотики при соотношении культур от 150:1 до 0,01:1. Предусматривается дополнительное содержание от 0,5 до 0,15 мае.ч. Bacillus coagulans или Bacillus subtilis и/или 10-100 мае.ч. Bifidobacterium sp. A TCC 11146 или АТСС 11863. Отобранными штаммами засевают йогуртовую среду и выдерживают смесь в течение 48 ч при 37°С, получая в результате йогурт Полученный йогурт испытывают на запах и вкус и отбирают клетки, обладающие хорошим запахом и вкусом. 1 з.п. ф-лы, 4 табл. 3 с с& ел --4 -4

СОЮЗ СОВЕТСИИХ

СОЦИМИСТИЧЕСИИХ

РЕСГ1УБЛИН

4 А3

И ПАТЕНТУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

fl0 ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

flPM ГКНТ СССР (21) 3936954/13 (22) 16 ° 07 85 (46) 23,05 ° 91, Бюл. М 19 (71) Сейкенкай Фаундейшнл Джуридикл

Персон (JP) (72) Косеи Хата и Тосиюки Иаруока (JP) (53) 737 ° 1 3 (088 ° 8) (56) Biochem methods, 1979, v. 90, р 239, Патент США 11 3494832, кп ° 195-48, опублик. 1970.

Патент СШЛ te 4425366, кп. А 23 С 9/12, опублик °1,984 ° (54) СУХОЙ БАКТЕРИА11ЬНЫЙ ПРЕIIАРАТ

Д1И ПОЛУЧЕНИЯ ПРОДУКТА ТИПА ЙОГУРТ (57) Изобретение относится к молочной промышленности и биотехнологии и может быть использовано в качестве продукта, обладающего дезодорирующим действием, и в качестве добавки к корчам для животных и птиц, Цель изобретения - придание целевому продукту повышенного дезодорирующего эф"

Изобретение относится к молочной промышпеннОсти и биотехнологии и мо1жет быть использовано в качестве продукта, обладающего дезодорирующим действием, и в качестве добавки к .кормам для животных и птиц.

Цель .изобретения - придание целевому продукту повышенного, дезодори» рующего эффекта„

Изобретение заключается в создании композиции, содержащей по крайней (gl)g А 23 С 9/12, С 12 ?1 I /20

3 фекта, Изобретение заключается в создании композ иции, содержащей по крайней мере один штамм молочнокислых палочек Lactobacillus deodorans, Lactobacillus cleorans и смешанную культуру Lactobacillus sulfurica

РЕКИ P 7383 или FERN Р 7384 и 1.actobacillus nitrosus РЕКИ P 7385 или

РЕКИ Р 7386, из молочнокислых стрептококков Streptococcus faecalis

FERM P 2083 или FERM Р 7382, способ» ных продуцировать антибиотики при соотношении культур от 150:I до 0,01:1, Предусматривается дополнительное содержание от 0,5 до 0,15 мас„ч, Bacillus coagulans или Bacillus subtilis и/или 10-100 мас.ч Bifidobacterium

sp. АТСС 11146 или АТСС 11863 ° Ото бранными штаммами засевают йогуртовую среду и выдерживают смесь в течение

48 ч при 37 С, получая в результате иогурт Полученный йогурт испытывают на запах и вкус и отбирают клетки, обладающие хорошим запахом и вкусом, 1 . з,. и, ф-гы, 4 табл,. С мере один штамм молочнокислых палочек L.deodorans u L.cleorans и стрептококков Sterptococcus faecalis u смешанную культуру Lactobacillus

sulfurica u Lactobacillus nitrosus, отобранных с учетом дезодорирующего эффекта, наиболее сильно проявляющегося в указанном сочетании и при со» отношении культур от 150:1 до

0,01: 1 ° Кроме того, предусмотрено до полнительное сопержание О, 5-0, 15 мас . ч.!

651774

Bacillus соар 1апз или Bacillus subtilis и/илн 10»100 мас.ч. Bifidobacterium sp. АТСС 11146" илн АТСС 11853

Отличия четырех указанных типов

Lac tobacillus от известных ранее Lactobaci1l us следующие.

Дпя размножения известных штаммов обладающие запахом соединения, содержащие атомы серы, и обладающие запа- 10 хом соединения, содержащие a row азота, не являются необходимыми, Даже при добавке таких обладающих за пахом соединений к питательной среде, в которой известные штаммы Еас оЪаcillus не могут размножаться, размно жения их не происходит. Даже при добавке этих соединений на стадии логарифмического роста известных штаммов ускорение роста микроорганизмов не 20 наблюдают. Известные штаммы 1,actobacillus не потребляют этих соединений, которые полностью остаются в том количестве, в котором их добавляют, 25

Известные mxaMm> Lactobacillus разделяются в отношении ауксотропии на штаммы, которые могут размножаться в среде Стефансона - Ветмана (S " W) при добавлении к ней кислоты

Casamino и витаминов, и штаммы, которые не размножаются в этой среде, пока к ней помимо кислоты Casamino и витаминов не добавляются другие компоненты °

Известные штаммы Баса.оЬас111из размножаются в обычной среде хуже по сравнению c Hscherichia coli и тому подобных Так, способность их к размножению составляет 0,5 от соответствующей величины для Esche ichia coli. Их стационарная кишечная способность сохраняется в течение

1 2 дней Относительно их очищающей способности, даже в отношении обла- 45 дающих запахом сое,цинений, содержа» щих атомы углерода, ничего не известно i

Все четыре указаннь.х штаммов

Lac tobac il lu s обладают следующими свой50

essa Lactobacillus, Они являются грам-положительными, анаэробпыми или микроаэрофильными, представляют собой необразующие спор палочки, которые в зависимости от типа штамма мо5S гут быть сферическими, изогнутыми или нитеобразными; они неподвижны, отрицательны по отношению к каталаэе и ие снижают содержание нитратов; они не разлагают желатин, не проду» цируют индол или сероводород ° Некото» рые из них имеют биполярную окраску

Они не разлагают белки и жиры или разлагают их в очень сЛабои степени, Они лучше размножаются в анаэробных или микроэробных, чем в аэробных условиях, интенсивно разлагают сахара и стоики к кислотам. При использовании их для ферментации глюкозы образуется молочная кислота с выходом более 50%. Размножение их ускоряется прн добавке к питательной среде ук» сусной кислоты. Они непатогенные по отношению к животным и растениям

Lac tobacil lus cIearans оказывают очень мягкое действие даже при введении их орально в больших количествах и снижают содержание плохо пах» нущих веществ в испражнениях, не вы зывая неприятных ощущений при длительном использовании. Однако при прекращении приема штамм выводится из организма через кишечный тракт, те» ряя свою способность оказывать дезо дорирующее действие in vivo в течение непродолжительного времени

Дезодорирующая способность Lactobacillus deodorans на несколько по» рядков выше по сравнению с Lactobacil1us c1earans, и, кроме того, они полностью разлагают плохо пахнущие соединения.

Для каждого вида Lactobacillus от» бирают те клетки, которые имеют . большее значение (11. Lactobacil lus

1actis используемые в предлагаемом спо со б е, выделя ют, например, следую" щим образом.

В среде А (среда S-W + витамин +

+ агар, прн этом среда S-W имеет сле. дующий состав, r: КН РО l; NBSO+ х х 7Н О 0,7; NaC1 1; (NH )

Ре$0,1 7Н О О, 03; глюкоза 5) или в среде В (среда S-W + казалиновая кислота + агар) формируют колонию с по» мощью анаэробной культуры из фекалий °

После этого выращивают полученную колонию в среде LBS. Селективная среда для Lac tobac il lus 1ас t is состоит из, r: триптиказ 10; экстракт дрожжей 5; мясной экстракт 10; КН РО 6; кислый лимоннокислый аммоний 2; глю. коза 20; твин 80 1 (торговое название моноолеата поликсиэтиленсорбита» на); ацетат натрия 40; раствор В

i5 мл, ледяная уксусная кислота (99,5%), не требующая установления

5 !65 рН и стерилизации 3, 7 мп (раствор В имеет следующий состав, г: FeSO х х 7Н 0 0,5; HnSOg nH O 2,47; NaC1

0,5; MgS04 7Н 0 10; вода 250 мп), и собирают выращенные на ней бактериальные клетки. Эти клетки выращи» вают затем B обычной агаровой питательной среде и из всех получаемых штаммов оставляют только те, которые в точности отвечают определению Lactobасillus lactis..

После этого полученные штаммы разделяют в соответствии с величиной ауксотропии с помощью следующих питательных сред: глюкоза или крахмал, неорганические соли и вода (Ц); среда q с добавкой обладающего запахом соединения, содержащего атомы серы, азота или углерода, содержащегося н фекалиях (S) среда ц с добавкой витаминов, по-отдельности или в комбинации (8); среда а с добавкой одной ипи нескольких аминокислот (2); среда g с добавкой одного или нескольких особых витаминов (g); среда С1 с добавкой триптофана (); среда g c добавкой одной или нескольких аминокислот, содержащих атомы серы (Ж).

В указанной питательной среде под витаминами име|отся н виду витамины А, В 1 В, В и В, иикотинамид, пан тотенат кальция, витамины С и D1< и т д, Под особыми витаминами имеются в виду другие, отличные от перечисленных, витамины, такие как фоленая кислота, биотин и т и, Под амииокис лотами имеются в виде отличные от особых аминокислот и аминокислот, содержащих атомы серы, аминокислоты, такие как глицин, глут аминовая кислота, лизин, алании, фенилаланин, . альгинин, аспарагиновая кислота и . т ° и, Под аминокислотами, содержащими атомы серы, имеются в виду цистин, цистеин, метионин, таурин и т.д.

В качестве Streptococcus faecalis, используемых в предлагаемом способе, применяются микроорганизмы, добавляемые к кормам для домашних животных, Это должен быть штамм, способ ный продуцировать ант иб иоти к, поскольку вырабатываемый им антибиотик подавляет рост и размножение кишеч ных сапрофитон и косвенно способст» вует размножению Lactobacillus, ис йользуемых в предлагаемом изобретении, \

1774

35 на способность продуцировать антибиотики заключается н высевании

S trep tococcus faecal is на агароную питательную среду диаметром 10 мм, соде рж ащую с ilõар и Ca CO g выр ащинании в течение 48-72 ч ири 37 С,итрихо нои разно;исс больиых э ародышсй на

cpeде в р 1диальиом направлении от цент р» среды, ио крытой Strep tococ cus

1:а оса1i s, и продолжении выращивания в течеиие 24-48 ч для оирсцелеиия, иродуцируют ли Streptococcus faecalis антибиотики.

Антибиотики, вырабатываемые

Streptococcus faecalis, представляют

40 собой нестойкие к повышенным темпе» ратурам аминогл1окозиды. При этом один штамм продуцирует 4-5 видов антибиотиков, обладающих узким спектром антибактериальной активности, 45

5р Эти 4-5 видов антибиотиков с узким спектром антибактериальной активности вместе обладают такими же свойствами, как один антибиотик с очень широким спектром антибактериальной активности.

Streptococcus faecalis являются нетоксичными по сравнению с актив» ностью и метаболизмом других кишечных бактерий, доходящих до 100 биллионов, Для выделения таких Streptococcus

faecal is в качестве источника исполь« эуют фекалии челонека или домашних животных, Выращивание осуществляют

5 ° спрн 34 39 C в аэробных условиях (в течение 48 ч) в селективной для

Streptococ us faecalis питательнон среде, например среде SF, состоящеи

10 из, r: пелтон 20; глюкоза 5; К НР04.

4; И1 Р0 1,5; NaNO 0,5; NaC1 5;

ВСР (бромкреэоловый пурпурный)

0,032; агар 15; вода 1 л (pH Ь,97,2).

Полученные Streptococcus f aeca1 i s поцнергают исгытаниям на гемолиэ, оставляя иегемолитич. ские клетки, из которых отбирают те, которые облацают способностью продуцировать антибиотики Пол ученным ш таммом з а сенают питательную срепу, состоящую из снятого молока и сахароэы ° Иэ полученных в результате бактериальных клеток отбирают клетки, обладающие хорошим запахом и имеющие нужные по каэатели, и используют их для осу ществления предлагаемого изобретения, Типичный метод испытания штамма

1651 774

Относительно негемолитического штамма Streptococcus f.aecalis, продуцирующего антибиотики, "следует отметить, что он повышает активность Lactoba5

ci 1.lus Bzf xdobacterium и подавляет активность патогенных бактерий.

Предпочтительными штаммами $ ereptococcus faecalis являютсн штаммы, хранящиеся в Fermentation Research Institute (Япония) под номерами национальной регистрации РЕВИ-P 2082 и 7382 (номера международной регистрации IFO 14452 и 14453).

В соответствии с предлагаемым по 15 крайней мере один .из микроорганизмов

Lac tobac i 1 lus de odorans, Lac tobac illus c1earans и смешанный штамм LacсоЬас11lus sulfurica u Lactobacillus

ni trosus используются в комбинации с 20 упомянутым микроорганизмом Streptococcus f aecali s. Соотношение Lac tobacillus u Streptococcus faecalis в комбинации находится в пределах

25 (150:0.0t):1, предпочтительно (100"0,011:1 а наиболее предпочтительно (30-0,03):1, Наиболее целесообразно использовать пх в отношении !О:1, которое характерно для кишечной флоры„ При непа средственном нанесении на слизистую оболочку кожи

Lactobacillus используются в меньшем

I количестве,, чем S treptococcus, а именно в соотношении (1-0,03):1. При использовании Lactobacil lus sulfu- 3

riñà и Lactobacillus nitrosus для достижения того же эффекта, что и в случае Lac tob aci l lus c 1 ear ans, до статочно применять смесь Lactobacillus

sulfurica u Lactobacillus nitrosus, 40 в которой бы каждый из компонентов .находился .в таком же количестве, как и Lactobacillus clearans.

Для получения сухих бактериальных препаратов Lactobacillus u Strepto- 45

coccus faecalis с добавкой Bifidobacterium и/кли Bacillus достаточно смешать их в соотношении 5-15 мас,ч.

Lactobacillus, 10-100 мас„ч. Bifidobacterium и 0,05-0,15 мас.ч. Bacil- 50

lus на 1 мас ч, Streptococcus faeca-:

lis. При использовании комбинации четырех .указанных штаммов Lactobacillus u Streptococcus faecalis в соответствии с предлагаемым они могут также использоваться с добавкой

Bifidobacterium, Bacillus или смеси последних При использовании Bif idobacterium дезодорирующее действие с препарата сохраняется даже после прекращения приема его„Bacillus же повышает способность Lac tobacillus и Streptococcus перерабатывать плохо пахнущие вещества в процессе дезодорирования °

В качестве Bifidobacterium для осуществления предлагаемого изобре тения может использоваться штамм

Bifidobacterium, используемый для получения йогурта, или штамм, исполь зуемый в пищевых продуктах, В пред лагаемом изобретении используются штаммы, хранящиеся в АТСС.

В качестве Bifidobacterium для осуществления предлагаемого изобретения используются штампы Bacillus

coagulans, представляющие собой прекрасный бактериальный посевной материал для получения йогурта, штам» мы Bacillus coagulans, представляющие собой прекрасный бактериальный материал для ферментации сои, и т.п, Возможно также применение и других штаммов Baci11цз, использующихся при получении пищевых продуктов„ В1ЕЫоbacterium предпочтительно использо« вать в количестве, в 1-10 раз (по массе) превышающем количество LactoЪаci11us, à Bacillus в количестве, составляющем 1-0,01% от количества

Lactobacil1us.

Соотношение отдельных штаммов, полученных в результате предлагаемо го выращивания штаммов соответствует соотношению этих штаммов при добав ленни их до выращивания в питательную среду Однако для выращивания нескольких штаммов, включая Bifidobacterium, желательно подбирать та» кую питательную среду для одновре менного размножения бактерий, в кото» рой размножение Bifidobacterium npo исходило бы с высокой скоростью, для того чтобы размножение Bifidobacterium протекающее с более низкой скоростью, могло бы начаться раньше др гих видов штаммов.

Выделение Streptococcus faecalis осуществляют следующим образом, В качестве питательной среды ипользуют среду SF (20 r пептона, 5 г глюкозы, 4 г К<НРОь, 1,5 г КН РО4., 0,5 г NANO>, 5 r NaCl, 0,032 r ВСР, 15 r агара и 1 л воды; рН 6,9-7,2), представляющую собой селективную среду для выращивания S trep tococcus

f ae cali s Су спе ндируют в этой пита

1651 774

10 тельной среде фекалии человека или животных и осуществляют выращивание н аэробных условиях при 37 С в течение 48 ч, Кпетки, идентифицированные как

Streptococcus f aecalis, подвергают испытаниям на гемолиз и отбирают негемолитические клетки °

Испытывают отобранные клетки на слособносTb продуцировать антибиоти, ки и оставляют клетки, обладающие такой спо со бно ст ью, Отобранным штаммом засевают йогуртовую среду, состоящую из 100 г обез жиренного молока и !00 г сахароэы, и выдерживают смесь н течение 48 ч при

37 С, получая н результате йогурт, Попученный йогурт испытывают на запах и вкус и отбирают клетки, обладающие хорошими запахом и вкусом, Выделение клеток из пит атель» ной среды проводят следующим об» разом

В случае Lactohacillus clearans.

Lactobacillus deodorans, Lactobaci1lus sulfurica u Lac tobacil1us nitrosus, используемых в предлагаемом изобретении, а также Streptococcus

faecalis u Bacillus каждый иэ штаммов,по-отдельности высевают в упомянутую лактозную питательную среду

MRS а именно в среду, содержащую, г: мясной экстракт 10; пептон 1О; экстракт дрожжей 5; лактоза 20; твин-80 1 мп; К!! 1 04. 80,2; ацетат натрия 5; цитрат аммония 2; MgSO+ х х 7Н О 0,2; !"1пБО 4Н 0 0,05, прово о дят выращивание при 37 С в течение

72 ч и выделяют клетки с помощью охлаждаемой центрифуги.

В случае В i Еi dobac ter ium и сход» ный штамм высевают н лактоэную среду

MRS с добавкой 1 мг витамина В, 8 мг пантотената кальция и 0,1 мг биотина, о проводят выращивание при 37 С в те». чение 96 ч и отделяют клетки с помо» щью охлаждаемой центрифуги»

Отдепение клеток осуществляют следующим образом, I

Пример 1 ° Определяют сте пень дезодорирования Na

Штаммы Lactobacillus и Strepto"

coccus faecalis засевают в среду, содержащую,, г: мясной экстракт 5; пептон. 5; глюкоза 1; СаСОэ 1; фека» лии, содержащие О, 5 г Na< S - 9Н О или

0,5 г MI, 1, и осущестнляют выращивание для определения уменьшения спдержания Na, Получен ные результаты приведены н табл,:1 °

Для сраннения опыты повторяют в тех же условиях, но вместо смеси

Lac tobacillus u S treptococcus 1яеса11в используют, только штаммы Ьассо"

Ьасterium. Полученные результаты при ведены в табл, 2 °

Как видно из табл.2, при использовании комбинации Lactobacillus u

Streptococcus faecalis способность уснаинать обладающие запахом вещества возрастает на 10-20Х по сравнению с тем случаем, когда используются одни только Lactobacillus. Кроме того, Lactobaci llus deodorans поглощают обладающие запахом вещестна в большей сте пени, чем Lactobacillus сlеагапв.

Первые потребляют Иа Б 911, О и N1!» полностью в течение 72 ч, тогда как

25 Lactobacillus clearans их полностью не потребляют, Lactobacillus виНиrica u Lactobacillus nitrosus также не потребляют полностью обладающие запахом нещества, 3р Использовавшиеся н опытах штаммы перечислены в табл, 3.

Приведенные в табл.3 штаммы Q u E

Strep tococcus Eaecalis продуцируют антибиотики. Штаимы Q и с! S treptococcus faecalis»e продуцируют анти» биотикон. Штамм А 13aci1 lus предстанляет собой семенные клетки для получения йогурта (Bacil lus coagulans) .

Штамм В Bacillus представляет собой

40 семенные клетки для ферментации сои (Baci l lus sub ti lis ) .

Пример 2 ° Опыты по дезодо рации проводят с использованием штамма РЕКМ-Р У 7382, н дальнейшем

45 называемого штамм g (Strep tococcus

faecalis), и штаммон IFO 14253 и ! 4450.

К 1 г свежих экскрементов челове ка добавляют 9 мп изотонического раствора хлористого натрия, К одной части (смесь 1) полученной таким образом смеси добавляют 1 мп раствора с культурой клеток Lac tobacillus

clearans, а к другой части (смесь 2)

1 мп РаствоРа культУРы клеток ЬасСоbacillus clearans и 0,5 мп раствора культуры клеток штамма g, после че го обе порции выдерживают при 37 С о в течение 48 ч

il 165

На основании оценки интенсивности

sanaza делают вывод, что степень дезодорации выше в серии опытов со смесью 2, а количество недезодорировапных фекалий вдвое меньше, чем в случае смеси..1 ° Прн этом в последнем случае дезодорацию фекалий не наблюдают в двух из десяти опытов.

При оральном введении одних только

Lactobacillus clearans в комбинации с штаммом Q у сcт аaнuоoвuлnеeнuоo, что дезодорирующий эффект выше (степень дезо дориоования определяют путем анализа выделяющихся фекалий) в том случае, когда используется комбинация ЬасСоbacillus со штаммом 0, причем при этом всегда имеет место дезодорирование.

Результаты этих опытов (in vivo) свидетельствуют о том, что Lactobacil1us clearans, а также Lactobacil1us в сочетании со штаммом q сохраняют свою активность в кишечнике, в котором присутствуют фекалии (содержащие микроорганизмы, вызывающие гниение, большей частью анаэробные, (1 в количестве до 1,5 10 клеток на 1, фекалий). Хотя значительный эффект получен как при использовании только

Lactobacillus clearans, так и в спу чае комбинации их со штаммом тем не менее комбинация Lactobacillus .clearans со штаммом более эффективна„ Под эффективностью имеется в виду высокая степень дезодорирова ння и уменьшение числа случаев от сутствия дезодорирующего действия, Описанные опыты относятся к использованию Lactobacillus clearans, аналогичные сравнительные опыты про водят с использованием Lactobacillus

deodorans и смеси Lactobacillus sulfurica c Lactobacillus nitrosus (штаммы 1р0 14255, 14256, 14252, 14253), а именно сравнивают действие

Lac tobac i 1 lus de odorans u Lac tobaci11ив deodorans в комбинации со штаммом а, а также смеси Lactobacillus sulfurica u Lactobacillus

nitrosus с этой же смесью, но в комбинации со штаммом

При этом ту же тенденцию, как и в случае Lac tobacillus clearans, наблюдают. при использовании смеси

Lac tobaci1lus sul f urica u Lac tob acillus nitrosus.

Эффект действия штамма а больше в случае Lac tobaci 1 1 us de odorans, а

1774 именно при использовании штамма Q штамм Streptococcus faecalis, продуцирующий антибиотики, оказывает значительно более сильное действие в отношении уничтожения плохих запахов не только при оральном введении, но и при наружном применении препарата в области лобка у женщин.

II р и м е р 3. Получение йогурта, 11ри получении йогурта путем фермент ации Lac t ob aci l lus c 1earans u

Streptococcus faeca1is питательную среду для посевных клеток, содержащую 30 г обезжиренного молока и 3 г карбоната кальция (рН 7,0), разделяют на две части и стерилизуют, После этого засевают каждую из порций указанными штаммами и осуществляют выращивание при 37 С в течение 24 ч, по« лучая B результате посевные клетки

Lactobacillus clearans и Streptococ"

cus faecalis (количество клеток со» ставляет 1,5 ° 10 кл ° /ìë для Lacto"

25 bacillus сlеагапз и 2 109 кл./мп дпя

Strep tococcus faecalis) .

Параллельно стерилизуют 1000 мл среды для получения йогурта, состоя» щей из 100 г обезжиренного молока, 30 100 г сахарозы и 2 r агара.

К приготовленной таким образом среде для получения йогурта добавляют 10 мп посевных клеток Lactobacillus clearans, О, 8 мл посевных клеток

Streptococcus faecalis, осуществляют выращивание при 37 С в течение 24 ч, получая в результате йогурт °

Полученный йогурт содержит

2,5 10 кл /мп Lactobacillus clearans

4р и 2,5 ° 10 кл./мп Streptococcus fae". з

calis. Соотношение между Lactobacillus сlearans u Streptococcus faeca. lis равно 10:1 ° Этот йогурт вводят человеку и животным, 45 I

При получении йогурта фермента цией Lactobacillus clearans, Streptococcus f ae ca li s u Bi i dobac teri um посевные клетки Lactobacillus clea5р rans u Streptococcus faecalis полу чают путем приготовления питательной среды для посевных клеток, посева каждого из штаммов в питательную среду и выращивания при 37 С в тече о ние 24 w Bif idobacterium засевают в питательную среду для посевных клеток, состоящую из 30 r обезжиренного молока, i г цистеина, 1 мг вита мина В, 8 мг пантогената кальция и,1б5

0,1 г биотина, и осущестгпяют выращивание при 37 С в reчение 72 ч.

Параллельно стерилизуют ?00

0,1 мг биотина.

К полученной таким образ ом среде добавляют 10 мл посевных клеток

Bi f i dobac teri um и о существпя ют выращивание при 37 С в течение Зб.ч, о

Затем к питательной среде одно. временно,цобавляют 10 к1 посевны:; клеток 1 асгоЬас111иs c learans u

0,8 мп посевных клеток Streptococcus

faecalis и продо.гжают выращивание при 37 С в течение 36 ч, .1олучая в результате йогурт.

-Полученный так11м образом йогурт содержит 2 10 кл./мп Lactobacillus сl еагап я, 2 ° 108 кл. /и1 S t rep tococ c us

faecalis и. 3 -i 0 кл./мп В11112ОЬасterium, Соо Т11оше11ие между 1.actnbacillus сlеагаnsÄ Streptococcus f aecalis и Bi 13О17аc terium равно 10: 1: 157.

Пример 4. Получе11ие су хих препаратов.

Для получения полусухих препараTОВ З аCЕВс ЮТ ПО ОТДЕ JIЬ i!О СТН ".,ажДЫM штаммом 1.асгОЬас11"us с".вагапа и

Strep tococcus faeca1is оп icанную лактозную питате11ы1ую сре»г- Ж($, а также штаммом Вifidobacteгium соот" ветствующую питательную среду и осу ществпякт вырак1ива11ие каждой культу» ры„К 10 r влажных клеток, отобран» ных пу Tем центрифугирования,,добавляют по 300 г крахмала, в.-;|сушенного при повышенной температуре до осТа» точкой влажности 0,2%, и 1 r цистеина и перемешивают компоненты, получая в результате препарат с конеч ной влажностью 2i или 1ен=-е.

11олучение препаратов, содержащих

Lactobacillus с1еаг"пя и Streptococcus faecalis, ведут путем смешения высушенных и смешанных с крахмалом

10 г Lactobacillus clearans и 1 г

Streptococcus Хаеса11s. Полученным препаратом заполняют пузырьки, герме тически закупоривают их в атмосфере азота и хранят в темном прохладном. месте, l 774!

Получение препаратов, содержащих ь =c tob aci llus clea ran=, Б tге!7 Осогсия faeca is и Бгвidobacter 11ш, в" дут путем смешения высушенных Ii смеrmaIIIIhI7c с к1)ахмап :1" Они с: 1 "ным Образом ! 0 r La;-. tobaci1 ius c 2earan я, 1

S trep tocc cсus Гаес111 s и 100 г Bi f i— . О7ассег111ш. Полученным препаратом зя Олняют пузырьки, герметично заку нория;.ют нх в атмос;17епе а".- ота и храняi. в темном прахпадном месте

Дпя получения сухих препаратов

saceaaIcT rIo отдельности каждым штаммом Lac. obaci11ия сlеагапя u Strep ;:Ос ос сия гае ca 1 1G опи сан1ьу!О питательнуюю среду MRS, а также штаммом Blf1. . ..":Ь с ter iii!n соответствующую и! ., атель= пук среду»: Осуществляют выращивание

20 каждой культуры. Но 10 г влажных кле 1О к ха "p;0»" о i iç ште1 гмоп! .Ото б!7анных ,7! Те и 11е11тр11фуг11ро ваш.я, дис11ергиру н.; в 100 мп р lcтвора, содержащего

1% лактозы и 0,1% цистина, и получен

25 ную дисперсию высушивают с помощью сублнмацио гной сушк11„

Получение препаратов, содержащих

Lactobnñi2.1us c1earans u Streptococus 1аеса1i s, ведут путем смеше1гия

3Q 11ол У»1е111ых Опи санны11 Об!7аз Ом 10 г препарата живых кпеток Lactobacillus с" earn ns и 1 Г iipe11ар ата ж1113ых кл е ток Strep tococcus faecalis, 11олучен ным препаратом sапо.1няют ампулы H х17апят 11х

1!Опуч ение п17епгратов, содержащих

La=tohaci11us -.lеarans, Streptococcus faecalis u BI fidobacterium, ведут путем смеше1п1я полученных описанным способом 10 r Lactobacillus clearans, 1 г Streptо осспя faecalis и 100 г.

Bi f с!Оьассег117п7. из полученного пре

nap;iT; готовят таблетки, которые хра нят в пузырьках, 45

П 7 и м е р 5. Смешанную культу . ру Lactobacillus сlеагапя, Lactobac;.11us deoc1orans и смешанный штамм

Lactobaci llus sulfurica и/или LactoЪас llus nitrosus в равных количест

50 вах н Streptococcus faecalis и/или

Басi1111я genes получают с использова

1ием среды, состоящей из 1000 r молока Н!11» смеси молока и соевого со ка, 100 г сахарозы и 21-агара После

55 стеригп1з ации среды указанные штаммы инокулируют одновременно в среду в требуемом соотношении клеток и rioJI чают культуру при 37ОС в течение

24 ч для подготовки йогурта, содер1651774!

Т аб л и ц а !

Л)ет5 911<0

500

Lactobacillus ер сосо

cali s

24 с leatans

6587

6588

6589

ui tr osus

7386

sulfurica

7383

73 &4

1946

2742

2779

2781

2782

225 ppm ! 80

110

280 220

225 180

225 180

110 90

250

ppm 400

300

330

300

135

520

400 280 225

400 280 225

510 .515

515

6 1.0

О

0 о

О

О

7. 25

215 !

) 7 j

22 )

О

О

0

О

520 580

520 580

180 40

140 40

225 90

225 90

I &0 70

225 85 жащего ферментированное молоко, смесь молока и соевого сока, Смешанную культуру штаммов, используемую в предыдущем случае с добавлением Bifidobacterium получают в

5 упомянутой среде, в которую добавляют 1 г цистина, 1 мг витамина В

29

8 мг патогината кальция и 0,1 мг биотина в стерильных условиях, причем Bif idobacterium культивируют ранее при 37 С в течение 36 ч, затем другие штаммы засевают одновременно и культивирование продолжают при 37 С о в течение 36 ч для подготовки продукта, Полученный предлагаемый продукт обеспечивает лучший вкус и запах, чем сравниваемый образец, который по» лучен при ферментации только Lacto- 20

baci 1 lus.

Через 8 ч после инокуляции указанных Lactobacillus и/или Bacillus в среду инокулируют Streptococcus faecalis. Культивирование осуществляют 25 при 37 С в целом в течение 48 ч, Полученный продукт обеспечивает лучший вкус и запах по сравнению с продуктом, в котором указанные четыре штам" ма были засеяйы одновременно, Через 24 ч после инокуляции Bifidobacterium инокулируют Lactobaci llus и/или Bacillus. Спустя 8 ч инокулируют в указанную среду Streptococcus

f aeca li s. Купьтивирование проводят при 37 С в течение 48:ч, Полученный о 35 таким образом продукт обеспечивает лучший вкус и запах по сравнению с продуктом, в котором укаэанные четыре штамма быяи засеяны одновременно, Предлагаемый продукт может быть использован как добавка к корму, предназначенному для кормления животных, в том числе кошек, собак, поросят, а кроме этого, и для птиц

Фо рмул а из об рет ения

: 1 ° Сухой бактериальный препарат для получения продукта типа Йогурт, содержащий молочнокислые палочки

Lactobacillus и молочнокислые стрептококки Streptococcus, о т л ичающий ся тем, что, сцелью придания целевому продукту повышенного дезодорируюцего эффекта, он со» держит из молочнокислых палочек Lactobaci1lus по крайней мере один штамм Lac tobaci 1lus deodorans, Lactobacil lus clearans и смешанную культуру Lactobaci llus эс!1йиг1са РЕКИ P

7383 или PERM P 7384 и Lactobacillus

nitrosus РЕКИ P 7385 или FERM P 7386, из молочнокислых стрептококковStreptococcus f aecalis РЕКИ P 2083 или P- 7382, способные продуцировать антибиотики при соотношении культур (150-0,01):! °

:2„ Препарат по:п,1, о т л и ч а ю шийся тем, что он дополнительно содержит 0,5-0,15 мас.ч, Вaci llus

coagulans или Bacillus sibtilis и/или 10-100 мас.ч, Bifidobacterium

sp. АТСС 11146 или ATC 11863.!

1651774 табы1 ца 2

1а,Б 91!?!) 500

baci 11us

72 hrs

24 48

L.c1earaus

L.nitrosus

)..su)furica г

L.Deodorans

Таблиц а

Штамм

Lac tobaci 11цз

clearans

6587

6588

6589

6590

14253

)4254

Lactobac llus ае odorans

) 946

2742

2779

? 78)

". 782

14451

Lac tobaci 11us п trosus

7386

14257

14258

Lactobaci1lus вц1furica

7383

7384

14256

Strep tococcus

faecalis

)4452

2082 (® s сга7 и)

7382 (Qa s t; rain ) 14453

6569 (© strain)

14506 (Q) s train)

11146 (® strain)

1 l863 (Qpstr(an) Bifidobac terium

2930 (As train) 3335 (В strain) П р и м е ч а н и е: Регистрационные номера, приведенные на одной линии, относится к одному и тому же штамму, Используемое сокращенное название приведено в скобках после регистрационного номера

6587

6588

6589

7386

7383

7384

1946

2 742

2 779

2781

2 782

?50

5iO

?5G

250 !

5!5

250 ppm

2GG

5?5

О

О

О

400 300

350 250

350 250

300 150

400 300

400 300

515 590

530 650

200 50

150 50

250 100

250 100

"00 80

250 100

250 ppm

О

О

О

О

20

165! 774

Таблица 4 При мер

St со

70m+ 30S

50m + 50 В

Вкус Залах

Вкус Зал ах ах

° Ф

0

П р н м е ч а н и е: А отлично; В - хорошо; С довольно хорошо 0 - вкус и запах лодобно соевому соку; 70m +30S 70 масЛ молока и 30 мас,X соевого сока, 50m +50S 50 масХ молока и 50 мас X соевого сока, !

Составитель И.Привалова

Техред М.дидык Ко рр е к тор Л. Па тай

Редактор.И Дербак

Заказ 1612 Тираж 381 Подпи сно е

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, И-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул. Гагарина, 101

2

4

6

0

0

0

0 .0

В В В В . С С

А А А А С С

В А В А С С

В В B В С С

А А А А С С

А А А А D С

А А А А В В