Способ получения иммунных сывороток к вирусу гриппа
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (я)5 А 61 К 39/42
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (Л С: (21) 4650502/13 (22) 10.02.89 (46) 07,10.91. Бюл. М 37 (71) Научно-исследовательский институт вирусных препаратов AMH СССР (72) В.Ф.Семенков, О.Н.Агеева и И,В.Головлева (53) 615.373(088.8) (56) Практическая вирусология. — Ред.
Г.Штарке. М.: Колос, 1970. с.165-170.
Ровнова З.И. Вопросы вирусологии, 1959, 4, стр.465 — 470.
Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и вирусологии, и может быть использовано для получения специфических нефтрализующих антител к вирусу гриппа.
Цель изобретения — повышение активности сывороток.
Проводят трехкратную иммунизацию белых мышей внутримышечно с интервалом
7-10 дней, причем для 2 и 3 инъекций используют антиген, смешанный с полным адъювантом Фрейнда при соотношении вирус:адьювант (5 — 7):1.
Пример1. Патогенный для мышей вирус гриппа А/PR/8/34 культивируют в куриных эмбрионах. Очищают и концентрируют вирус методом ультрацентрифугирования в градиенте плотности сахарозы. Взвесь концентрированного вируса гриппа используют для введения мышам в мышцу бедра в объеме
0,1-0,15 мл с содержанием белка 2—
15 мкг/мышь. Для 2 и 3 инъекций к взвеси вируса добавляют полный адьювант Фрейнда при соотношении вирус:адъювант (5—
„,; Я2„„1681859 А1 (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУННЫХ
СЫВОРОТОК К ВИРУСУ ГРИППА (57) Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и вирусологии, и . может быть использовано для получения специфических нейтрализующих антител к вирусу гриппа. Цель изобретения — повышение активности сыворотки. Мышей иммунизируют 3-кратно внутримышечно с интервалом 7 — 10 дней, при этом для 2 и 3 инъекций используют вирус, эмульгированный в полном адъюванте Фрейнда при соотношении вирус:адъювант (5-7):1. 7 табл.
7):1 и непосредственно перед набором в шприц смешивают взбалтыванием с последующим введением смеси. На 8-10 день после 3 иммунизации у мышей забирают кровь из ретроорбитального сплетения и получают сыворотку, которую инактивируют нагреванием при 56 С в течение 30 мин.
Специфические антитела к вирусу гриппа определяют в реакциях вируснейтрализации (PH), торможения геммагглютинации (РТГА) и связывания комплемента (РСК) (см. табл.1).
В реакции преципитации в геле антисыворотка дает выраженные линии преципитации с вирусом гриппа (разрушенным).
Пример 2. Метод получения вируснейтрализующих антител к непатогенному для мышей штамму А/Краснодар/101/59 не отличается от описанного в примере 1 ° Результаты титрования сывороток представлены в табл.2, Наличие в полученных антисыворотках вируснейтрализующих антител доказывают методом аффинной хроматографии на им1681859
Таблица 1
Титры специфических антител к вирусу гриппа А/PR/8/34(HINI) после трехкратной иммунизации и
Сыворотки получают от 2-5 мышей, Таблица 2
Титры специфических антител к вирусу гриппа А/Краснодар/101/59 после трехкратной иммунитации мышей
Сыворотки получают от 4 — 6 мышей. муносорбенте, коньюгированным со специфическими вирусными антигенами (см. табл.3).
Препарат антител, обогащенный вируснейтралиэующей активностью, подавляет 5 репликацию вируса гриппа в легких инфицированных мышей и защищает от летального исхода 100 jo мышей (см.табл.4).
Пример 3. Метод получения вируснейтрализующих антител дан в примере 1. 10
Схема иммунизации в опытах 1--6. 1 инъекция 5 мкг вируса на мышь, через 7 дней 2 инъекция — 10 мкг вируса на мышь, через 7 дней 3 инъекция — 15 мкг вируса на мышь. Гипериммунные сыворотки получают 15 на 9 день после 3 иньекции. В отличие от предлагаемого способа иммунизации (применение адъюванта Фрейнда для 2 и 3 инъекций в указанном соотношении, группы 2 и 3, 5 и 6) используют адьювант Фрейнда в 20 соотношении к взвеси вируса 1:1, что сопровождается более низкими титрами вирусонейтрализующих антител (группы 1 и 4) и наличием летальности при иммунизации патогенным вирусом гриппа (группа 1). 25
Динамика титров вирусонейтрализующих антител после 1 — 5 внутримышечных инъекций вируса гриппа А/PR/8/34 приведена в табл.7.
Схема иммунизациии
1 инъекция вируса гриппа в дозе 5 мкг на мышь беэ адьюванта Фрейнда внутримышечно через 7-10 дней 2 инъекция вируса гриппа в дозе 5 — 10 мкг с полным адъювантом Фрейнда при соотношении вирус: адъювант (5 — 7):1 внутримышечно через 7-10 дней 3 инъекция вируса гриппа в дозе 5 — 15 мкг с полным адъювантом Фрейнда при соотношении вирус: адъювант (5 — 7);1 внутримышечно.
Гипериммунную сыворотку получают на
8-10 день после 3 инъекции вируса гриппа.
Формула изобретения
Способ получения иммунных сывороток к вирусу гриппа путем парентеральной иммунизации животных, отличающийся тем, что, с целью повышения активности сыворотки, иммунизацию проводят трехкратно внутримышечно с интервалом 7-10 дней, и ри этом для 2 и 3 иммунизаций используют вирус. эмульгированный в адъюванте Фрейнда при соотношении вирус:адью ва нт (5-7):1.
1681859
Таблица 3
Распределение биологических активностей в препаратах из фракционированной иммунной сыворотки
Таблица 4
Сравнение протективной активности препаратов из фракционированной иммунной сыворотки
П р и м е ч а н и е. Мыши заражаются интраназально дозой вируса 0,05 мл штамма
А/PR/8/34 1500 ЭИДщ, Выживаемость контрольных мышей составляет 16 ), Таблица 5
Титры специфических антител к патогенному А/PR/8/34(HtNi) и непатогенному А/Краснодар/101/59(H2N2) штаммам вируса гриппа при различных соотношениях адъюванта Фрейнда к взвеси вируса
1681859
Продолжение табл.5
Таблица 6
Динамика титров вирусонейтрализующих антител при различных интервалах между тремя внутримышечными инъекциями вируса гриппа А/PR/8
Табл и ца 7
Тит ы антител М и m после инъекциФ
Составитель С.Пылова
Редактор М.Стрельникова Техред M.Ìoðãåíòàë Корректор О.Кравцова
Заказ 3356 Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Число пуловых сывороток
2560 192 7625 + 584 14112 и 968 13920 -440 14230 + 532
