Способ определения лизосомальной активности лейкоцитов на мазках

 

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии. Целью является повышение точности способа за счет исключения побочного свечения ядер. Цель достигается тем, что при окрашивании применяют акридиновый оранжевый в концентрации 3,8-4 мкг/мл, при этом красят в течение 60- 90 мин при температуре 37°С. Облучение препаратов проводят ультрафиолетовым светом в диапазоне 300-500 нм, при этом активность определяют при возбуждающем свечении в диапазоне 635-645 нм. Способ позволяет значительно повысить точность определения лизосомальной активности в лейкоцитах за счет исключения побочного свечения ядерного вещества.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (l9) (1!) (si)s G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ЙЖЩЦ,(1 q

f с» »«

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

6 активности лиэосом.

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4477045/14 (22) 16.08.88 (46) 07.10.91. Бюл. М 37 (71) Челябинский медицинский институт (72) С.Н,Шамин, С.Н.Теплова и Е.А.Чухарева (53) 615.475(088,8) (56) Фрадкин В.А,Диагностика аллергии реакциями нвйтрофилов крови.— М.:Медицина, 1985, с.11. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИЗОСОМАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕЙКОЦИТОВ

НА МАЗКАХ (57) Изобретение относится к медицийе, а именно к иммунологии. Целью является поИзобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и предназначено для оценки функциональной активности лейкоцитов.

Целью изобретения является повышение точности способа за счет исключения свечения ядер.

Способ осуществляется следующим образом.

Берут плазму, обогащенную лейкоцитами в концентрации 10 клеток в 1 мл, из отстоявшейся в течение 60-90 мин при температуре 37 С венозной гепариниэирован-. ной крови. Далее смешивают взвесь клеток со средой 199 в соотношении 0,05:1 и наносят ее на покровное стекло, помещенное в пластиковую чашку Петри. Инкубируют при

3? С в течение 60 мин чашки Петри, после чего неприлипшие клетки удаляют путем промывания средой 199, на стекле остается только монослбй адгезированных клеток.

На стекле с монослоем лейкоцитов наносят раствор акридинового оранжевого красителя в среде 199 в конечной концентрации 4,0 мкг/мл и выдерживают препарат 60 мин при вышение точности способа за счет исключе- ° ния побочного свечения ядер. Цель достигается тем, что при окрашивании применяют акридиновый оранжевый в концентрации

3,8-4 мкг/мл, при этом красят в течение 6090 мин при температуре 37 С. Облучение препаратов проводят ультрафиолетовым светом в диапазоне 300-500 нм, при этом активность определяют при возбу)кдающем свечении в диапазоне 635-645 нм, Способ позволяет значительно повысить точность определения лизосомальной активности в лейкоцитах за счет исключения побочного свечения ядерного вещества.

37 С. После инкубации стекло с клетками трижды отмывают от акридиноваго оранжевого красителя средой 199, а затем помещают на предметное стекло клетками вниз, удалив избыток влаги фильтровальной бумагой. Клетки облучают возбужденным люминесцентным свечением в диапазоне

300-500 нм, используя для этой цели лампу д накаливания с иодным циклом КГМ 9-70 и светофильтрами СС-1 и БС-8. Далее осуществляют микрофлюориметрическую регист- рацию результатов, для чего применяют

ФМЭЛ с интерференционным светофильтром 15, выделяющим возбуждаемое свече- 0 ние в диапазоне 635-645 нм. фь

Проводят флюориметрию лизосомального свечения 100 клеток, результат записывают с помощью самописца Н-3010-1.

Определяют средний показатель свечения лизосом одного лейкоцита. При значениях средней активности лиэосом меньше 1,77й, +0,46 определяют снижение лизосомальной активности лейкоцитов, а при значениях этого показателя выше 1,78+0,46 — усиление

1682864

Состави-ель Л, Стебаева

Техред М.МОргентал Корректор Т. Палий

Редактор А. Мотыль

Заказ 34.06 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственнсго комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР l13035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-иэда,ельский комбинат Патент", —, Ужгород. ул.Гагарина, 101

Подбор концентраций акридинового оранжевого, а также Определенных светофильтров при облучении Объекта позволяет исключить полностью свечение ядер, то улучшает люминесценцию лизосом в цитоп- 5 лазме, делает более чистым фон, позволяет исключить побочное свечение.

Пример 1. Из крови получали плазму.

Брали плазму с клетками в концентрации

10 /мл из отстоявшейся в течение 60 мин 10

6 веноэной -гепариниэированной крови, Далее готовили монослой клет зк на покровном стекле в соответствии с общепринятой методикой. Инкубировали монослой В среде

199, содержащей акридиновый оранжевый 15 в конечной концентрации 4,0 мкгlмл в течение 60 мин. Трижды промытое стекло с кл етками помещают на предметное стеклс: и удаля10т избытОк Влаги фильтрОВальной бg" магой. 20

Готовый препарат исследуют при люминесцентной микроскопии.

Получили следунэщие значения лизосомальной активности у донора А, они равны

1,69 в, что свидетельствует О нормальной 25 лизосомальной активности лейкоцитов у данного человека, Таким образом, предложенный способ позволяет получить точные результаты с лизосомальной активности лейкоцитов. Снижение побочного свечения в клетках также создает чистый фон вокруг лиэосом, что позволяет исключить потери в активности при ее количественном учете, Формула изобретения

Способ определения лиэосомаль ной активности лейкоцитов на мазках путем их

Окрашивания раствором акридинОВОгО оранжевого с последующим облучением и оценкой активности по величине возбужденного свечения, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа за счет исключения свечения ядер, окрашивание проводят акридиновым оранжевым в концентрации 3,8-4 мкг/мл в течение 60-90 мин при температуре 37 С, а облучение проводят ультрафиолетовым светом в диапазоне

300-500 нм, при этом активность определяют при возбужденном свечении в диапазоне

635-645 нм.