Способ получения d-рибозы! :.\ i „ii i iiu ' ~'-<у'-'-. ••:':'ц"'~"' '^[ ..ja^ij i ^ilr-i

 

l7274I

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ, Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 31.!!!.1964. (№ 891621/23-4) Кл. 12о, 6 с присоединением заявки №

Приоритет

МПК С 08b

УДК 547.455.522.022.2 (088.8) Государственный комитет по делам изобретений и открытий СССР

Опуоликовапо 07,7!!.1965. Бголлетснь ¹ 14

Дата опубликования описания 13Х111.1965

Авторы изобретения T. В. Бичуль, В. М, Почиковская, 3. П. Сапожникова, М. А. Колосов и

Л. П. Козлова

Государственный институт прикладной химии

Заявитель

f1 —.г и ll. :, l

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ В-РИБОЗЬ!

Подггисная pynna № 50

Известен способ получения D-рибозы, фиксированно меченной тритием, заключающийся в том, что D-рибоно-у-лактон восстанавливают борогидридом лития, меченным тритием, в растворе пиридина. Для очистки разбавленный неактивным носителем продукт выделяют из реакционной смеси трехкратной перекристаллизацией из смеси метанола и 2-пропанола.

С целью повышения чистоты целевого продукта, предложен способ получения D-рибозы, фиксированно меченной тритием, заключающийся в том, что D-рибоно-у-лактон восстанавливают борогидридом натрия, меченным тритием, в растворе сухого тетрагидрофурана.

Для очистки разбавленный неактивным носителем продукт выделяют из реакционной смеси добавлением к раствору анилина и сернокислого натрия. Образующуюся при этом комплексную соль «а-аггилин-N-D-рибопиранозида-1-Т с сернокислым натр ием» подвергают гидролизу.

Пример 1. Реакцию восстановления проводят в закрытой пробирке в атмосфере чистого азота. Выделившийся в процессе реакции тритий сжигают над окисью меди при

270 С до образования Т.О. К 0,0877 г (90,4 мкюри) борогидрида натрия-Т добавляют раствор D-рибоно-у-лактона (0,5003 г) в сухом тетрагидрофуране (30 л.г).

Реакционную смесь оставляют на 20 час при комнатной температуре. Затем в течение часа к смеси добавляют по каплям 14 мл воды.

Реакционную массу упаривают досуха в вакууме при 35 — 40 С. Сухой остаток растворяют в воде, водный раствор обрабатывают смолами КУ-1 и ЭДЭ-10П в статических условиях до отсутствия натрия и кислоты. Полученный нейтральный раствор очищают углем, фильтруют и фильтрат упа ривают в вакууме (35 ——

40 С) до сиропа.

Выход чистого сухого сиропа 0,320 г (63% в пересчете на лактон). В этом количестве сиропа найдено 78,5 лг D-рибозы-1-Т (по анализу), („= — 15,5 . Выход D-рибозы-1-Т

l5,5% от теоретического в пересчете на лактон.

По "ле анализа водный раствор D-рибозы-1-Т снова высушивают до сиропа, как указано выше. Получают 0,270 г сиропа, содержащего 68,иг рибозы (10,5 мг рибозы израсходовано на анализ).

К сиропу (0,270 г) добавляют водный раствор, содержащий неактивную D-рибозу . (0,932 г). Чистый прозрачный водный раствор, содергкащий синтетический сироп (0,270 г) и неактивную рибозу (0,932 г) снова упаривают

Зо до сухого сиропа (1,3 г).

172741

Предмет изобретения

Составитель Л. М. Иоффе

Редактор Л. К. Ушакова Техред A. А. Камышиикова Корректор Л. В. Тгоняева

Заказ 1887/13 Тираж 675 Формат бум. 60+90>/в Объем О,!6 изд. л. Цена 5 коп.

ЦНИИПИ Гочударстсеппого комитета по делам изобретений и открытий СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4

Типография, пр. Сапунова, 2

Сухой сироп растворяют в кипящем (абсолютном) метаноле (1,0 мл). К полученной смеси добавляют 1 мл изопропанола и заправку D-рибсзы, Смесь оставляют на льду на

5 — 6 суток. Через сутки к смеси добавляют еще 1 мл изопропанола.

Получают 0,770 г (77 / в пересчете на взятую рибозу) кристаллического продукта.

Анализ кристаллов: содержание основного вещества 81,5 /,; (а)". = — 19,35 (в воде); удельная активность 4,72 мкюри/г.

Очистка кристаллов D-рибозы-1-T.

На очистку берут 0,610 мг D-рибозы-1-Т, 0,75 мл метанола и 1,5 мл изопропанола.

Получают 0,430 г кристаллов (70,5 /, в пересчете на взятую рибозу).

Анализ кристаллов: содержание основного вещества 88,5о/,; (з)2" = — 19,85, удельная активность 4,65 мкюри/г, Приведенные данные показывают, что очистка D-рибозы-1-Т перекристаллизацией не является эффективным методом, так как содержание основного вещества в кристаллах остается низким (88,5о/,) и увеличивается после дополнительной очистки лишь на 7 /,.

Пример 2. К 0,0807 г (83,4 мкюри)

NaBH4T дооавляют раствор 0,501 г D-рибон о-у-л а кто н а в 30 мл тетр а гидр о ф ур а н а.

Получают 0,260 г чистого сиропа, содержащего 80,0 мг D-рибозы-1-Т, (х)" = — 19,8 .

Выход D ðèáîçû-1-Т 15,85 /о от теоретического в.пересчете на лактон.

После анализа получают 0,190 г сиропа, содержащего 58,5 мг рибозы. Носитель (неактивная рибоза) 0,877 г. Всего рибозы 0,936 г.

Из нее выделяют 2,75 г комплексной соли«аанилин-N-D-рибопиранозида-1-Т с сернокислым натрием». Разложением комплексной соли получают 1,07 г а-анилин-N-D-рибофуранозида-1-T. Гидролизом последнего выделяют

0,570 г D-рибозы-1-T (в виде сиропа), Кристаллизацией сиропа в условиях описанных выше получают 0,330 г D-рибозы-1-Т в виде кристаллического продукта.

Анализ кристаллов: содержание основного вещества 98,5/; (а)",; = — 23,6 ; удельная активность 2,95 мкюри. Перекристаллизацией D-рибозы-1-Т качество продукта не изменяется, Таким образом, выделение D-рибозы-1-T через комплеконую соль «а-анилин-N-D-рибопиранозида-1-Т с серHOKHc/lbIM натрием» позволяет получать продукт, не требующий дополнительной очистки, пригодный для синтеза фиксированно меченных нуклеозидов и нуклеотидов.

Способ получения D-рибозы, фиксированно меченной тритием, восстановлением D-рибоно-ч-лактона с помощью комплексных гидридов металлов в среде органического растворителя с последующим выделением целевого продукта, отличаюи1ийся тем, что, с целью повьгшения чистоты продукта, в качестве комплексного гидрида металла используют борогидрид натрия, меченный тритием, в полученный раствор добавляют анилин и сернокис. лый натрий и образующуюся при этом комплексную соль «а-анилин-N-D-рибопиранозида1-Т с сернокислым натрием» подвергают гидр ол изу.