Способ анализа левомицетина в пищевых продуктах

 

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для определения левомицетина в пищевых продуктах. Цель изобретения - повышение достоверности анализа и упрощение процесса . Готовят два образца и стандарт, аликвоты одного образца и стандарта разделяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в системе растворителей ацетонитрил - вода - дециламин 40:60:(0,08-0,12) и хроматограммы облучают в УФ-свете при А 278 нм Для подтверждения наличия левомицетина в продукте второй образец обрабатывают 10%-ной щелочью при 60-80°С в течение 15-20 мин, затем проводят указанные выше процедуры. По отсутствию на спектре пика при А 278 нм судят о наличии в образце левомицетина. Количество левомицетина определяют, сравнивая площади пиков первого образца и стандарта . 2 1абл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„SU ÄÄ 1702302А1 (я)5 G 01 N 30/90, А 23 3/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ 1"::::. ., н".

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (54) СПОСОБ АНАЛИЗА ЛЕВОМИЦЕТИНА

В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ (57) Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для определения левомицетина в пищевых продуктах. Цель изобретения — повышение достоверности анализа и упрощение про-. цесса. Готовят двэ образца и стандарт, алик(21) 4770509/13 (22) 15.12.89 (46) 30,12,91, Бюл. N 48 (71) Институт питания AMH СССР (72) Д.Б,Меламед, В.К.Кирничная и Б.Г.Ляпков (53) 613,261.29:577,182.46:543,544 (088.8) (56) Johannes В., Korfer К.-Н., Schad J., Ulbrich 1, Archlv fur Lebensrnittelhygiene.

19831N1. .В. .34. .S, 1 — 7.

Изобретение относится к пищевой промышленности и может быть использовано для определения левомицетина в пищевых, продуктах, Цель изобретения — повышение достоверности анализа и упрощение процесса, Способ осуществляется-следующим образом.

Из пробы пищевого продукта выделяют образец левомицетина одним из известных способов. Одновременно готовят стандартный раствор левомицетина. Стандартный раствор и аликвоту образца последовательно вводят в высокоэффективный жидкостной хроматограф, используя систему растворителей ацетонитрил — вода — дециламин 40:60:0,08-0,12 (преимущественно воты одного образца и стандарта разделяют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в системе растворителей ацетонитрил — вода — дециламин 40:60:(0,08-0,12) и хроматограммы облучают в УФ-свете при А = 278 нм. Для подтверждения наличия левомицетина в продукте второй образец обрабатывают

107;-ной щелочью при 60-80 С в течение

15 — 20 мин, затем проводят указанные выше процедуры. По отсутствию нэ спектре пика при А = 278 нм судят о наличии в образце ле,вомицетина. Количество левомицетинэ опредегяют, сравнивая площади пиков первого образца и стандарта. 2 табл.

0,1) и УФ-детектор с А = 278 нм. Наблюдают на хроматограмме образца пик с временем удерживания, равным времени удерживания пика стандарта левомицетина (м5,9 мин), и измеряют его площадь.

Аликвоту второго образца обрабатывают

10ф,-ным раствором щелочи втечение 15—

20 мин при температуре 60 — 80 С и вновь вводят в хроматограф в тех же условиях.

Отсутствие пика левомицетина на полученной хромэтограмме подтверждает правильность его идентификации в об разце (наличие пика левомицетинэ свидетельствует о ложноположительной идентификации), Количественное определение левомицетина проводят сравнением площадей пи1702302

10 ков левомицетина — стандарта и левомицетина в образце, Содержание левомицетина в образце вычисляют по формуле:

Son . Ч мкг где Son — площадь пика левомицетина на хроматограмме опыта, усл,ед„.

$ст — площадь пика левомицетина на, хроматограмме стандарта, усл,ед.

Cn — концентрация левомицвтина в стандартном растворе, мкг/мкл, V — объем образца, мкл, М вЂ” масса пробы продукта, кг,  — àáë, 1 приведены значения времени удерживания левомицетина (30 нг} в системе растворителей ацетонитрил — вода 40:60, содержащей различные количества дециламина. Как видно из экспериментально полученных результатов, введение 0,08 — 0,12, (преимущественно 0,1) об,ч. дециламина

: эффективно сдвигает пик левомицетина., Введение меньшего количества амина не ! обеспечивает отделения его от примесных веществ, а большие количества снижают чувствительность определения за счет увеличения фона (увеличение оптической плотности самого элюента), что проявляется в, снижении площади пика левомицетина.

В 1эбл. 2 приведены результаты гидро лиза левомицетина 10%-ным раствором ще лочи (КОН) при различных температурах и экспозиции.

Как видно из табл. 2, оптимэльнымиусловиями обработки левомицетина являются 60-80 С в ечение 15-20 мин.

Пример 1, Определение левомицети. на в молоке, 50 мл молока встряхивают с 25 r безводного сульфата натрия и экстрэгируют

3 х 30 мл этилацетата. Полученную смесь центрируют 15 мин при 4000 об/мин и декантируют. Э т и л а ц е т а т н ы и с л о и концентрируют до 60 мл на ротационном испарителе (". 50 С), промывают последовательно 5 мл насыщенного раствора NaCI + 0,2 мл 10% МагСОз, 5 мл насыщенного раствора NaCI + 0,2 мл 10%

СНзСООН и 5 мл насыщенного раствора

NaCi. Органический слой отбирают и упаривают на ротационном испарителе (50 С) до минимального обьема, отдувают азотом до исчезновения запаха органических растворителей, добавляют 3 мл смеси ацетонитрил — вода 1:4 и экстрагируют 3 х 5 мл петролейного эфира, Петролейный эфир отбрасывают и извлекают левомицетин этилэцетатом 3 х 5 мл. Зтилацетатный

55 слой упаривают досуха, растворяют в 100 мкл метанола. Готовят стандарт левомицетина в метаноле 10 нг/мкл.

Вводят 3 мкл стандартного раствора в жидкостной хроматограф Бекман 334 (США) с колонкой ультрасфер ОД$, 5 мкм (250 х 4,6 мм), УФ-детектором (Кратос SP757) при 278 нм, используя систему растворителей ацетонитрил — вода — дециламин

40:60:0,1, Пик на хроматограмме с временем удерживания 5,87 мин — левомицетин.

В тех же условиях вводят 3 мкл метанольного экстракта образца молока, Пик на хроматограмме с временем удерживания 5,90 мин совпадает с временем удерживания стандарта левомицетина.

Для подтверждения наличия левомицетина к 50 мкл метанольного экстракта приливают 50 мкл 10%-ного раствора КОН и нагревают 20 мин при 70 С, 6 мкл раствора вводят s тех же условиях в жидкостной хроматограф. На полученной хроматограмме пик с временем удерживания 5,9 мин отсутствует. Это подтверждает наличие левомицетинэ в образце.

Площадь пика левомицетина на хроматограмме стандарта (30 нг) равна 42350 (усл. ед.), образца — 139043 (усл. ед.). Расчет по формуле

139043 0,01 100

42350 0,05 дает содержание левомицетина в образце

65,7 мкг/л.

Пример 2, Определение левомицетина в мясе.

10 г мяса гомогенизируют с 15 мл фосфэтного буфера (0,025 М: 0,025 М КНрРО4

++ 0,025 M йагНРО4, рН 6,88) и экстрагируют 3 х 30 мл этилацетэта. Полученную взвесь центрифугируют 15 мин при 4000 об./мин и декантируют этилацетатный слой, промыва-, ют последовательно 5 мл насыщенного раствора NaCI + 0,2 мл 10% МагСОз. 5 мл насыщенного раствора NaCI + 0,2 мл 10%

СНзСООН и 5 мл насыщенного раствора

NaCI. Органический слой отбирают и упаривают на ротационном испарителе (50 С}до минимального объема, отдувают азотом до исчезновения запаха органических растворителей. добэвлякн 3 мл смеси ацетонитрил — вода 1:4 и экстрэгируют 3 х 5 мл петролейного эфира. Петролейный эфир отбрасывают и извлекают левомицетин этилацетатом 3 х 5 мл, Этилацетатный слой упаривают досуха, растворяют в 100 мкл метанола, Готовят стандарт левомицетина в метаноле в 10 нг/мкл.

Вводят 3 мел стандартного раствора в жидкостной хроматогрэф Бекман 334 (США) с колонкой ультрасфер ОД$, 5 мкм

1702302

Таблица 1

Зависимость времени удерживания левомицетина от количества дециламина (250 х 4,6 мм), УФ-детектором (Кратос SP757) при 278 нм, используя систему растворителей ацетонитрил — вода — дециламин

40:60:0,1. Пик на хроматограмме с временем удерживания 5,9 мин — левомицетин. В 5 тех же условиях вводят 3 мкл метанольного экстракта образца мяса. Пик на хроматограмме с временем удерживания 5,95 мин совпадает с временем удерживания стандарта левомицетина, 10

Для подтверждения наличия левомицетина к 50 мкл метанольного экстракта приливают 50 мкл 10,ь-ного раствора КОН и нагревают 20 мин при 70 С. 6 мкл раствора, 15 вводят в тех же условиях в жидкостной хроматограф. На полученной хроматограмме пик с временем удерживания 5,95 мин сохраняется. Это свидетельствует об отсутствии левомицетина в исследуемом 20 образце мяса.

Надежная идентификация и определение левомицетина в предлагаемом способе достигаются при содержании его 10 мкг/кг 25 продукта, Относительное. стандартное отклонение 0,10 — 0,15, что находится на уровне требований к современным методам анализа пищевых продуктов, Формула изобретения

Способ анализа левомицетина в пищевых продуктах, включающий приготовление образца и стандарта, разделение аликвот образца и стандарта методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в системе растворителей, включающей ацетонитрил и воду, облучение хроматограмм УФ-светом при = 278 нм, подтверждение наличия левомицетина в образце и его количественное определение сравнением со стандартом пиков

УФ-спектров, отличающийся тем, что, с целью повышения достоверности анализа и упрощения процесса, для высокоэффективной жидкостной хроматографии используют систему растворителей ацетонитрил— вода — дециламин 40:60;(0,08 — 0,12), а для подтверждения наличия левомицетина готовят второй образец, обрабатывают его раствором щелочи при 60 — 80 С в течение

15-20 мин, затем подвергают хроматографии и УФ-облучению в указанных условиях и по отсутствию пика при Х= 278 нм судят о наличии левомицетина в образце.

1702302

Таблица 2

Влияние температуры и продолжительности щелочной обработки на гидролиз 1 мкг левомицетина

+ - наличие левомицетина, - - отсутствие левомицетина.

Составитель Г. Голева

Техред M.Ìîðãåíòàë

Редактор Л,Павлова

Корректор Н.Ревская

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 4540 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5