Способ работы с контейнерами при консервировании биоматериала

 

Изобретение относится к способам низкотемпературного консервирования биоматериалов , размещаемых в контейнерах, а именно к способам, работы с этими контогмерами, располагаемыми в жидком пзоче. может нзйш применение с медицине микробиологии и научно-исследовательской лабораторной практике. Целью изобретения является повышение сохранности контпйнероз при отогреве путем предотвращения затекания в них жидкого азота. Конгейсер заполняют жидким биоматериалом через штуцеры, перекрывают последние пробка ми, переворачивают v выдерживают шг/порами вниз не менее двух минут. При этом из штуцеров выходит воздух и они эамо. ся жидким бисматеризлом, который при погружении Б азот замерзает и .;1 твердонмьный затвор внутри . В результате достигается герметизации контейнера , и жидкий азот не проникает в незаполненную биоматериалом часть контейнера. Ь-.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (.ч)» Р 25 О 3/10

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМV СВИДЕТЕЛЬСТВ

Ы

С. (21) 4665756/»3 (22) 19,01.89 (46) 15.01,92, Бюл. N.. 2

<71) Специальное конструкторско-технологическое бюро ь опытны л пооизводг,;эом

Института проблем криобиологии и кр«пмедицины АН УССР (72) С,И, Ткаченко, А.А, Мартыненко и B.Î, Иванисенко

<53) 621.565 (088.8) (56) Гаврилов О.К., Кулешов !О.Я, Массовая заготовка крови и ее компонентов. M,:

Медицина, 1982, с. 68-72. (54) СПОСОБ РАБОТЫ С КОНТЕЙНЕРАМИ

ПРИ КОНСЕРВИРОВАНИИ БИОМАТЕРИАЛА (57) Изобретение относится к способам ниэкотемпературного консервирования биоматериалов, размещаемых в контейнерах, а

Изобретение относится к способам низкотемпературного консервирования биоматериалов, размещаемых в контейнерах, а именно к способам работы с этими контейнерами, расположенными в жидком азоте, и может найти применение в медицине, микробиологии и научно-исследовательской ла бораторной практике.

Целью изобретения является повышение сохранности контейнеров при отогреве путем предотвращения затекания в них жидкого азота.

Способ осуществляют следующим образом.

Контейнер фиксированной формы и объема заполняют до 0,85 ч. объема подготовленным для криоконсервации биомате« .. Ж,, l705676 А1 именно к способам работы с этигли K0H.;.г нерами, располэгаемыми в жидкои .зо1 .. может нэй и применение в л»ед .ци 3с л3;ч,робиологии и нау но-исследовательской! абораторной практике. Целью изобр тен«ч является повышение сохранности кон-,:".иHepGB при отогреве путем предотврагцен«я эатекания в них жидкого азота. Контейi ер заполняют жидким биоматериалом через штуцеры, перекрывая::т последние пробка ми, переворачива от v выдерживают ш-! рами вниз HP, ленее двух минут. Пр »это . з штуцеров выходит воздух и они зa .teлн:ю3ся жидким бисмэтериалом, которь и п3.i погружении в азот замерзает и обоa»уеl твердо" «»ьчый затвор В! t/тр11 ц3Т " I

его стекания. Не меняя положения. кон-ейнер помещают в жидкий азот и подвергают охлаждению в соответствии с реж1» лол», необходимым для замораживания клего«нс.1

1705676

ФОрмула иЗОбpereния

Способ работы с контейнерами при ксн. сервировании биоматериала, предусматривающий заполнение контейнеров жидким биоматериалом через штуцеры, перекрытие

50 последних пробками, помещение контейнеров в жидкий азот, хранение и отогрев, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения сохранности контейнеров при

55 обеспечивается сохранность контейнера в отогреве путем предотвращения затекания области тефлоновой пробки, что обусловлено неполным заполнением контейнера вяэв них жидкого азота, после заполнения биоматериалом и перекрытия пробками конкой массы эритроцитного концентрата, тейнеры устанавливают и выдерживают суспензии, Такое их положение обеспечивает формирование в штуцерах ледяного затвора из биоматериала. После замораживания биоматериала контейнеры помещают на хранение в жидкий азот. Затвердевший биологический материал изолирует контейнер от последующего эатекания азота при хранении в жидком азоте, При необходимости деконсервации из жидкого азота контейнер переносят в нагревающее ус1ройство, например водяную баню, с заданной гемпервтурой, размещая вверх или вниз штуцерами до достижения оттаивания биологического материала, штуцеры открывают и биомагериал используют по назначению.

Пример. Эритроциты получали из цонорской крови, заготовленной на среде Тлюгицир" путем центрифугирования 400 мл донорской крови при 2000 об/мин 10 мин, удаления слоев плазмы белых клеток крови респирацией, Осадок эритроцитной массы смешали с криоконсервантом в равных объема, центрифугировали 1800 об/мин 10 мин. Недостаточный слой (0,8 ч.) удалили, остаток перемешали и перенесли

230 мл иэ флакона в алюминиевый контейнер(270 ° л) для замораживания крови Штуцеры завинтили тефлоновыми пробками.

К знтей» ер РереОерн»ли вниз штуце»,ми v. поставили в штатив на 2 мин, после чсго перенесли в жидкой азог и заморозили содержимое контейнера, располагая контейнер в жидком азоте вниз штуцерами, и оставили на хран. ние в течение 120 дней.

Контейнер извлекали из жидкого азота и поместили в воду на 60 с при 42 С. Тефлоновые пробки свинтили со штуцеров и произвели отмывание размороженных эритроцитов растворами с применением центрифугирования известным способом.

Отмытые эритроциты ресуспендировали во взвешивающем растворе в соотношении объемов 1:1. Контейнер отмыли от остатков эр роцитной массы, стерилизовали 3 ч при

140 С с использованием повторно в соответствии с предложенным способом криоконсервации. В отмывочных средах, эритроцитной массе и ресуспендирующем растворе определили содержание гемоглобина и установили, что в процессе криоконсервации разрушилось 11 7ь эритроцитов, а содержание свободного гемоглобина составило 70 мг в ресуспендирующей среде, Время выдерживания контейнера в перевернутом положении менее двух мину-. недостаточно, поскольку в этом случае не

45 затеканием в него жидкого азота. Это обусловлено тем, что в условиях погружения металлического, главным образом алюминиевого, контейнера с биоматериалом, частично заполняющим контейнер, происходит быс»оое охлаждение металлических частей и ри медленном охлаждении пробок, выполненных из фторопласта, При этом осуществляется КоНденсация воздуха в незаполненном биообъектом объеме и образование вакуума в этой части. Если контейнер расположен штуцерзми и крышкой вверх или если он выдеожзн в и ревернутом положении недостаточное время, происходит втягивание жидкого азота в незаполненную часть контейнера через охолости, образующиеся между пробкой и штуцером, особенно при изношенной резьбе фторопластовой пробки.

При отогреве кон rev, åðoü г. биол атеоиалом жидкий азот при испарении, превращаясь в газ, увеличивает обьем в 700 раз, Быстрое у; .. -«ение объе»а газа в неэаполнен»гои биоматериалом части контейнера вь з» вает аазруьчение или дебормацию контейнера.

При выг,е;;жке контейнеров »",еред по ещением в к дки а "от I!JT .;;;рз»ч вниз более 2 vè»: и". чтуцерпв выходит воэду., тту..»еры заполняются жидким б,l=wereРиаЛОМ, KGTO,! t ll Н ри П r: P жЕ НИ ll 3 3;3ОТ замерзает и:-.брззует твердотельный га твор внутри ш» I цера кот,; . ый имеет плот; ое а. re3ив: ге cl»еп-ени о сте ками ц:туцера в ледствие лип ости жидкой фазы биомат оиала;> существенного коэффициента оасширения биоматериала вследствие заморажив ния.

В р» зуль ат;:.,чостигае|ся гег...е иззцня контейнера и жидкий азс т rie и,> ни ае-. в незаполненную Сиоь",зтериалом часть контейнера.

Данный способ работы с Kn.,-,e I«e ;e ми при консервировании б ч.а»ериала обеспечив er высокую сохрани;сть контейнеров и содержащего я в - -»х биомзтериала, 1 105б/6

Составитель И.Шабалина

Редактор М.Васильева Техред М.Моргентал Корректор Т.Малец

Заказ 187 / Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 штуцерами вниз не менее двух минут, и а жидкий азот помещают в таком же положении для формирования в штуцерах ледянс:; э затвора из биоматериэла.