Способ определения иммуномодулирующей активности нейтрофилов

 

Изобретение относится к медицине , а именно к клинической иммунологии , и предназначено для изучения секреторных функций нейтрофилов в норме и при различной патологии. С целью упрощения, снижения трудоемкости и ускорения способа при. культивировании нейтрофилов к питательной среде добавляют индикатор рН среды, а полученный затем супернатант нейтрофилов (активированных частицами монодисперсного полистирольного латекса и неактивированных) исследуют фотометрически , определяют оптическую плотность его в краснот области спектра (при 540 нм) с последующим вычислением индекса изменения экстинкции еупернатанта по формуле величина экстинкции еупернатанта ИГиС- - Тпп величина экстинкциисреды 199 По величине ИИЭС судят о секреторной функции клеток. В качестве индикатора рН среды используют феноловый кр аснып. СО

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИМИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

as>SU an. ц G 01 N 33/53, 33/483 б

g!

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМ,К СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Ю °

Ь °

° °

МЮ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHFbtTHRM

ПРИ ГННТ СССР (21) 4650304/14 (22) 13.02.89 (46) 29.02.92. Бюл. 1.- 8 (71) Челябинский государственньл|.медицинский институт (72) И.П.Долгунин, A.Â.Çóðî÷êà, И.А,Волчегорский, С.И.Иарачев и А.В 1укичев (53) 615.375(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

11 1287006, кл . G 0 1 N 33/48, 1987. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛГ1П1Я ИРП1У11ОИОДУЛИРУЮ! 11".А АКТИВНОСТИ НЕ11ТРОФНЛОВ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и предназначено для изучения секреторных функций нейтрофилов в норме и при различной патологии.

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и предназначено для изучения секреторных функций нейтрофилов в норме и при различной патологии.

Целью изобретения является упрощение, сокращение трудоемкости и продол" жительности способа исследования секреторных функций нейтрофилов.

Пример. Выделяют иэ периферической крови чистую популяцию нейтрофилов путем центрифугирования на двой- ном градиенте плотности фиколла-верографина (плотность нижнего раствора

1,093, верхнего — 1,077) в течение

40 мин при 1500 об/мин и 4 С. 11а границе между растворами образовалось

С целью упрощения, снижения трудоемкости и ускорения способа при, культивировании нейтрофилов к питательной среде добавляют индикатор рН среды, а полученный затем супернатант нейтрофилов (активированных частицами монодисперсного полистирольного латекса и неактивированных) исследуют фотометрически, определяют оптическую плотность его в красной области спектра (при 540 нм) с последующим вычис- . лением индекса изменения экстинкции супернатанта по формуле величина экетинкции супернатанта величина зкстинкции среды 199

По величине И113С судят о секреторной функции клеток. В качестве индикатора рЛ среды используют феноловый красный. кольцо гранулоцитов, а между плазмой и верхним раствором фиколла-верографина — слой мононуклеаров. После выделения клеточной суспензии гранулоцитов они отмывались средой 199 путем двукратного центрифугирования в течение

iO мин при 1500 об/мин; взвесь гранулоцитов из нижнего кольца разводят средой 199 с индикатором — феноловым красным до концентрации 5 10 клеток

6 в 1 мл и разливают поровну в две пробирки: в первую вносят взвесь частиц монодисперсного полистирольного латекса диаметром 1,7 мкм из расчета

108 частиц на каждые 5 ° 10 нейтрофиб лов, во вторую пробирку — такой же обьем -среды 199, 171б447

Формула изобретения

Составитель В.Мануйлов

Техред A,Êðàí÷óê

Редактор И.Питкина

КорректорА.Обручар

Заказ 610 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101

Установлено, что секреторные продукты могут менять рН среды, а индикатор позволяет обнаружить изменения рН среды. Общепринятым индикатором для культур тканей, в том числе для среды 199, является феноловый крас.ный; гранулоциты культивируют в течение 1 ч при 37 С в среде 199 с индио катором рН среды. После культивирования содержимое пробирок центрифуги-! уют в течение 10 мин при 1500 об/мин и повторно в течение 10 мин при

8000 об/мин. Супернатант пропускают ерез фильтр с диаметром 0,24 мкм для .,кончательного удаления латекса. Су пернатант (2,0 мл) исследуют на оптическую плотность. При снижении индекса экстинкции относительно пороговых значений 1,41 — 1,43 определяют стимулирующую активность нейтрофилов, а при увеличении — супрессорную.

Данный способ является более простым по сравнению с прототипом за счет упрощения определения. секреторных иммуностимулирующих функций нейтрофилов, кроме того, сокращается время определения.

Установлен неизвестный ранее феномен изменения цветности среды культивир ов ания п од влиянием пр одукт ов се креции нейтрофилов.

Способ определения иммуномодулирующей активности нейтрофилов, вклю" чающий выделение чистой популяции нейтрофилов из крови, культивирование клеток в питательной среде в присутствии активатора и без него, Впделение супернатанта нейтрофилов отличающийся тем, что, с целью упрощения способа при одновременном сокрацении времени определения, к среде культивирования нейтрофилов добавляют индикатор рН сре- . ды, а определение активности нейтрофилов осуществляют в супернатанте Ао-тометрически и при снижении индекса экстинкции ниже пороговой величины

25 1,4 1-1,43 определяют стимулирующую активность нейтрофилов, а при увеличении — супрессорную.