Способ отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекции

 

Изобретение относится к медицине, а сменно к эпидемиологии, и предназначено для отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций, индивидуализированного подхода при иммунизации. Целью изобретения является повышение точности отбора лиц для вакцинации . Указанная .цель достигается путем определения в сыворотке крови титров антител к специфическому антигену в реакции пассивной гемагглютинации. Новизна способа заключается в том, что определяют у лиц индивидуальные титры антител в сыворотке крови к специфическому и неспецифическому антигенам, а также среднестатические титры антител к данным антигенам с последующим вычислением индивидуального индекса в виде соотношения , где в числителе - произведение титра антител к специфическому антигену и среднестатического титра антител к неспецифическому антигену, а в знаменателе - произведение титра антител к неспецифическому антигену и среднестатистического титра антител к специфическому антигену, и при значении индекса менее 3,0 отбирают лиц для вакцинации против дифтерийной, а при величине 1,2 и менее-против столбнячной инфекций. Предлагаемый способ по величине индекса в сравнении с прототипом повышает точность определения индивидуального уровня специфического изменения титра антител к анатоксинам до вакцинации с 85-86% до 92-97%. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)з G 01 и 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

llO ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4617291/14 . (22) 07.12.88 (46) 15.03.92. Бюл. М 10 (71) Пермский государственный медицинский институт (72) В. П. Рочев и И. В. Фельдблюм (53) 615.373(088.8), (56) Совершенствование методов исследования иммунитета и иммунодиагностики.

Пермь, 1982, т. 156, с. 26 — 28. (54) СПОСОБ ОТБОРА ЛИЦ ДЛЯ ВАКЦИНАЦИИ ПРОТИВ ДИФТЕРИЙНОЙ И СТОЛБНЯЧНОЙ ИНФЕКЦИИ (57) Изобретение относится к медицине, а

1менно к эпидемиологии, и предназначено для отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций, индивидуализированного подхода при иммунизации. Целью изобретения является повышение точности отбора лиц для вакци. нации. Указанная цель достигается путем определения в сыворотке крови титров антител к специфическому антигену в реакции пассивной гемагглютинации. Новизна споИзобретение относится к медицине. а именно к эпидемиологии, и предназначено для отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций — к индивидуализированному подходу при иммунизации.

Цель изобретения — повышение точности отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций.

Способ осуществляется следующим образом.

„„5U„„1720006 А1 соба заключается в том, что определяют у лиц индивидуальные титры антител в сыворотке крови к специфическому и неспецифичес кому анти генам, а также среднестатические титры антител к данным антигенам с последующим вычислением индивидуального индекса в виде соотношения, где в числителе — произведение титра антител к специфическому антигену и среднестатического титра антител к неспецифи- . ческому антигену, а в знаменателе— произведение титра антител к неспецифическому антигену и среднестатистического титра антител к специфическому антигену, и при значении индекса менее 3,0 отбирают лиц для вакцинации против дифтерийной, а при величине 1,2 и менее — против столбняч- Я ной инфекций. Предлагаемый способ по величине индекса в сравнении с прототипом повышает точность определения индивиду- С ального уровня специфического изменения титра антител к анатоксинам до вакцинации с 85 — 86% до 92 — 97%. 1 табл.

Не менее, чем у 25 лиц, предполагаемых Ос, для вакцинации, берут из пальца кровь в количестве 0,7-1,0 мл для микроварианта постановки РП ГА или 2-5 мл из вены для ее макроварианта. По инструкции получают сыворотку и определяют в ней титры антител к специфическому и неспецифическому антигенам (Наставление по использованию эритроцитарных диагностикумов из шигелл

Флекснера, Ньюкестл и Зонне, приложенного к этим диагностикумам производства

1720006

РП ГА, эритроциты равномерно покрывают всю сферу лунки; переходная форма, отмечается . частичная гемагглютинация. широкое кольцо с заметной гемагглютинацией по краю; отрицательная реакция РПГА.

Реакцию сопровождают обязательными контрольными исследованиями, проводят контроль диагностикума на отсутствие спонтанной гемагглютинации и на отсутствие агглютининов к эритроцитам барана

Титр антител к антигену Ньюкестл определяют в РПГА макровариантом ее постановки, Сыворотку в количестве 0,5 мл дозатором переносят в лунки 1 ряда планшета.

Добавляют в лунки по 0,5 мл забуферного физиологического раствора (рН = 7,2). Сы воротку раститровывают дозатором путем последовательного двухкратного разведения

Л Н ИИ ВС. — Наставление по применению дифтерийного антигенного эритроцитарного диагностикума ЦНИИЭ М3 СССР и др.).

Для получения сыворотки взятую кровь для ее свертывания выдерживают при t = 5

3-7 С в течение 18 — 24 ч. Пробы центрифугируют при 3000 об/мин 15 — 20 мин. Сыворотку переносят в другую пробирку и при необходимости ее разводят в 2 — 10 раз физиологическим раствором, выдерживают 10 при t 56 С в течение 30 мин, Сыворотку охлаждаютдо комнатной температуры и для освобождения от гетерогемагглютининов к ней добавляют 50% взвесь отмытых формалинизированных бараньих эритроцитов из 15 расчета 0,1 мл этой взвеси на 1,0 мл разведенной сыворотки. Смесь встряхивают и выдерживают при t = 3 — 7 С в течение 15-20 ч, центрифугируют при 3000 об/мин. Сыворотку переносят в другую пробирку. 20

Приводим микровариант llocTBHDBKvl

РПГА, используемый в заявке.

В лунки первого ряда полистироловых пластинок для микроварианта постановки

РПГА переносят дозатором по 0,025 мл сы- 25 вороток. Добавляют в лунки первого ряда и последующих рядов по 0,025 мл фосфатного буфера с рН = 7,2. Микродозатором последовательно раститровывают каждую сыворотку так, что в 1 лунке ее разведение будет 30 двухкратное, во 2 — четырехкратное и т.д.

Добавляют в каждую лунку по 0,025 мл 0,3% взвеси эритроцитов дифтерийного или столбнячного диагностикума. Планшеты осторожно встряхивают и выдерживают при 35 комнатной температуре в течение 1,5-2,0 ч.

Учет результатов реакции проводят по следующей схеме:

+- положительная реакция в объеме 0,5 мл. В каждую лунку прИливают по 0,2 мл 1%-ной взвеси эритроцитов диагностикума Ньюкестл. Планшеты осторожно встряхивают и выдерживают при t = 6 — 10 С в течение 16-18 ч и оценивают результаты, Титром антител сыворотки считают максимальное ее разведение, которое оценивается не менее, чем на три креста, Абсолютные величины титров антител (величина, обратная титру антител) к специфическому и контрольному антигенам складывают. Полученные величины делят на количество обследуемых лиц и получают средние величины титров антител.

В дальнейшем вычисляют индивидуальные величины индексов соотношения титров антител по формуле, где в числителе произведения титра антител к специфическому антигену и среднестатистического титра антител к неспецифическому антигену, в знаменателе — произведение титра антител к неспецифическому антигену и среднестатистического титра антител к специфическому антигену.

Затем эту группу обследуемых лиц вакцинируютанатоксином и через месяц исследуют титры антител к специфическому и контрольному антигенам.

Изучают связь между исходными уровнями титра антител к бактериальным антигенам, индекса соотношения титров антител и специфическим изменением титра антител после вакцинации.

По результатам исследований выделяют две группы обследуемых: у первой группы с низким индексом определяют специфическое повышение титра антител, у второй группы с высоким индексом изменение титра антител не выявляют или отмечают специфическое снижение его величины.

Результаты исследований возможности определения индивидуального уровня специфического изменения титров антител с использованием для оценки титра антител антигенных эритроцитарных диагностикумов различных серий отражены в ниже приведенных примерах.

Пример 1. Определение специфического изменения титра антител к дифтерийному анатоксину.

Проведены две серии исследований.

В первой серии брали кровь в количестве 0,7-1,0 мл из пальца у проживающих в городе Перми 100 обследуемых лиц в возрасте от 17 до 56 лет. Получали сыворотку и определяли в РПГА титр антител к дифтерийному анатоксину с использованием дифтерийного эритроцитарного диагностикума

С. 3. активностью 1:3200, выпуска 1987 г.

0НИИЭ М3 СССР и титр антител к антигену

1720006

15

35

РПГА с использованием дифтерийного 45 эритроцитарного диагностикума С. 100, активностью 1:3200, выпуска 1987 r. ЦНИИЭ

М3 СССР и контрольному антигену шигелл

Ньюкестл эритроцитарным диагностикумом С. 37 hL 695, годн, 1988 г, ЛНИИВС. 50

55 шигелл Н ьюкестл с применением эритроцитарного диагности кума из этого антигена, С.

72. М 387. годн, 1988 г. ЛНИИВС.

Показано, что средняя исходная абсолютная величина титра антител к дифтерийному анатоксину у 100 обследуемых лиц составила 96 в РПГА. Однако отмечались значительные индивидуальные вариации от

1 до 1280, Средняя исходная величина титра антител к антигену шигелл Ньюкестл у этой группы обследуемых лиц равняется 145, индивидуальные колебания составляли — от

20 до 1280, Средняя величина индекса соотношения титров антител к дифтерийному анатоксину и антигену шигелл Ньюкестл равнялась 3.00. Индивидальные вариации этого показателя колебались от 0.005 до

96,6, По величине этого показателя обследуемых лиц делили на две группы. К первой группе отнесли пиц с индексом менее 3,00, ко второй группе — 3,00 и более.

Обследуемых лиц вакцинировали вакциной АДС-M в дозе 0,5 мл С, 6-7, К 1 830, годн. 1988 г.

Как видно из таблицы, через 4 недели после введения вакцины титр антител к дифтерийному анатоксину повысился, по средним данным, в 7,72 раза. У лиц первой группы, как и ожидалось, у большинства лиц отмечается повышение титра антител к анатоксину — из 83 у 76 (92%). У лиц второй группы, наоборот, из17у 16(94%) выявлено снижение титра антител к анатоксину или его величина не меняется. В целом величина индекса в сравнении с известным способом повышает точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной инфекции с 85% до 92%. Во второй серии исследований брали кровь из вены у 29 обследуемых лиц мужского пола в возрасте от 20 до 50 лет. По инструкции определяли исходный титр антител к дифтерийному анатоксину в

Показано, что средняя величина титра антител в РПГА у обследуемых лиц к дифтерийному анатоксину составила 10, индивидуальные величины равнялись от 1 до 80.

Средняя исходная величина титра антител к антигену шигелл Ньюкестл у этих обследуемых составила 50, индивидуальные вариации — от 10 до 320, Величина индекса колебалась от 0,05 до 20;О. К первой группе, 20

25 как и в первой серии, отнесли лиц с индексом менее 3,00, ко второй — 3,00 и более.

Обследуемых лиц вакцинировали вакциной АДС-М в дозе 0,5 мл серии 6, К 2781, М

166, годн. 1989 г.

Из таблицы видно, что титр антител к дифтерийному анатоксину, по средним данным, повысился в 21,20 раза. У лиц первой группы, как и предсказывалось, у подавляющего большинства лиц отмечается специфическое повышение титра антител к анатоксину — из 27 и у 25 (93%), и только у 1 реакция не выявляется, а у 1 отмечается. специфическое снижение титра антител к этому анатоксину. Следует отметить, что специфическая депрессия титра антител отмечается у обследуемого лица с очень низким индексом (0,06), что, по-видимому, связано со специфической иммунологической толерантностью исходной активности факторов иммунитета к дифтерийному анатоксину.

И, наоборот, у обследуемых лиц второй группы с индексом 3,00 и выше, как и прогнозировалось, отмечается снижение титров антител или их величина не меняется, Таким образом, по исходной величине индекса в сравнении с известным способом в этой серии точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной инфекции повышается с 86% до 93%, а с учетом обследуемого со специфической иммунологической толерантностью, % отбора повышается до 97.

Пример 2. Определение специфического изменения титра антител к столбнячному анатоксину.

Для исследования исходный титр антител брали кровь в количестве 4 — 5 мл из вены у 29 мужчин в возрасте от 20 до 40 лет. Ilo инструкции определяли исходный титр антител к столбнячному анатоксину в РПГА и использованием эритроцитарного антигенного диагностикума серии 80 †2 активностью 1:2560, выпуска 1987 г. ЦНИИЭ МЗ

СССР и контрольному антигену шигелл

Ньюкестл эритроцитарным диагностикумом серии 37, N 695, годн. 1988 г. ЛНИИВС, Показано, что у обследуемых лиц средняя величина титра антител к столбнячному анатоксину составила 87, индивидуальные вариации — от 1 до 1280. Средняя величина титра антител к антигену шигелл Ньюкестл равнялась 50, индивидуальные копебания— от 20 до 160. Индивидуальная величина индекса колебалась от 0,003 до 18,4. По величине этого показателя обследуемых лиц делили на две группы. К первой группе отнесли лиц с индексом 1,2 и менее, ко второй — выше 1,2. 1720006

15

30

40

Через 4 недели после вакцинации АДСМ в дозе 0,5 мл серии К 2781, М 166, годн.

1989 г. отмечалось, по средним данным, специфическое повышение титра антител к столбнячному анатоксину в 12,5 раза, Изменение титра антител к анатоксину носило строго специфический характер. Титр антител к антигену шигелл Ньюкестл не менялся или отмечалось несущественное колебание его величины. У лиц первой группы с низким индексом, как и прогнозировалось, у подавляющего большинства отмечается повышение титра антител к. столбнячному анатоксину — из 25 лиц у 24 (96;ь), и только в1 наблюдается снижение титра антител. И, наоборот, у лиц второй группы с большим индексом у всех трех обследуемых лиц изменения титра антител к столбнячному анатоксину не выявлено, Таким образом; в этой серии исследований точность отбора лиц для вакцинации против столбнячной инфекции по величине индекса в сравнении с прототипом повышается с 93;(, до 97 .

Предложенный способ может быть использован и для отбора для вакцинации против других инфекций, а также изучения закономерности специфического изменения титра антител при йммунизации экспериментальных животных бактериальными антигенами.

Пример 3. Определение специфического повышения титра антител к шигеллам

Зон не.

Исследования проведены с кровью 6 кроликов породы шиншилла весом около 3 кг. Животных вакцинировали антигеном шигелл Зонне подкожно в дозе 600 млн. микробных тел в 0,2 мл. До и после вакцинации определяли титры антител к специфическому антигену шигела Зонне и контрольному антигену шигелл Ньюкестл в РПГА макровариантом ее постановки.

Показано, что, несмотря не существенные индивидуальные колебания исходных титров антител к антигенам шигелл Зонне и

Ныюкестл, отмечается прямая корреляционная связь между этими величинами. Коэффициент ранговой корреляции(г) составляет

+0,73 + 0,21, P <0,05. В связи с этим индивидуальная величина индексов соотношения титров антител колеблется незначительно — от 0,32 до 2,56.

Через 1 неделю после вакцинации от-. мечается специфическое повышение титров антител к антигену шигелл Зонне, по средним данным, в 51 раз. Однако определяются значительные индивидуальные колебания кратности повышения его величины — от 4 до 256 раз.

Преимущества предлагаемого способа наиболее четко прослеживаются при сравнительной оценке связи между исходной величиной титра антител к антигену шигелл Зонне, индексом соотношения титров антител и уровнем специфического повышения титров антител к вводимому антигену. Установлена склонность к обратной корреляционной связи между исходным титром антител к антигену шигелл Зонне и специфическим изменением его величины после вакцинации, Однако эта связь носит статистически недостоверный характер (r=-0,60 0,29, Р> 0,05).

Наиболее ярко проявляется обратная корреляционная связь между исходной величиной индекса и уровнем специфического повышения титра антител к антигену шигелл Зонне (r = -0,96 +. 0,04, P <0,001). У кролика с низким индексом (0,32) отмечается значительное повышение титров антител — в 256 раз. И, наоборот, у животных с относительно высоким индексом (1,28 — 2,56) наблюдается четырехкратное повышение титра антител.

Таким образом, полученные результаты исследований убедительно подтверждают возможность и по индивидуальной исходной величине индекса проводить отбор обследуемых для вакцинации против различных инфекций, Установлено, что для точного определения специфического повышения титра антител до введения анатоксинов в организм по величине индекса к специфическому и контрольному антигенам необходимо определение титров антител не менее чем у 25 обследуемых лиц. При снижении количества обследуемых точность способа снижается.

Исследования титра антител в РПГА следует проводить с использованием энтигенных диагностикумов одной серии.

Для определения индивидуальной величины индекса во всех сериях исследований изучали титр антител к антигену шигелл Ньюкестл. Этот выбор основан на литературных данных, в которыхустановлена прямая корреляционная связь между исходными титрами антител к антигенэм этой группы микробов у здоровых людей, Данные литературы полностью подтвердились в наших исследованиях, что позволяет сделать обоснованное заключение, что именно исходный титр антител к антигенам дизентерийной группы микробов лучше всего отражает индивидуальный уровень неспецифической гуморальной защиты организма от микробов, участвующей в регуляции специфического изменения титра антител к анатоксинам.

1720006

Точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций повышается при исследовании исходного титра антител у однородной группы людей: одной местности, одинакового воз- 5 раста и т.д.

Преимущества предлагаемого способа в сравнении с известным прежде всего заключается в повышении точности, Предлагаемый способ по индивидуальной 10 величине индекса в сравнении с известным повышает точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной инфекции с 8586 . до 92 — 97, а против .столбнячной инфекции с 93 до 97 в различных сериях 15 исследований.

Следует отметить, что у небольшого количества лиц по величине индекса трудно проводить отбор лиц, подлежащих для вакцинации. Однако эти трудности связанв, 20 как правило, с лицами, индекс которых близок к пограничному — к средней его величине, что требует дополнительного прицельного исследования активности факторов иммунитета, 25

Отличительные особенности предлагаемого способа с известным способом иммунодиагностики инфекций отражены в таблице.

Как видно из таблицы, предлагаемый 30 способ рекомендуется использо ать преимущественно в области эпидемиологии для отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций, В то же время известный способ ис- 35 пользуется для иммунодиагностики инфекций.

Предлагаемый способ позволяет проводить отбор лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций до 40 иммунизации анатоксинами, При известном способе определение индекса проводится в период инфекционного процесса.

Важным преимуществом предлагаемо- 45

ro способа является возможность его использования для отбора лиц для вакцинации не только против дифтерийной и столбнячной, но и против других инфекций. 50

Применение известного способа иммунодиагностики инфекций ограничено. Этот способ невозможно использовать при ряде инфекционных заболеваний, в том числе дифтерии и столбняка. Ограничения связа- 55 ны прежде всего с тем, что иммунодиагностика инфекций осуществляется по величине индекса соотношения титров антител больного, превышающий соответству- . ющую.величину здоровых доноров не. менее, чем в 4 раза. Этот диагностический критерий выведен по результатам исследований, свидетельствующих о высокой прямой корреляционной связи между исходными титрами антител у здоровых лиц к антигенам дизентерийной группы микробов, сальмонелл, кишечной палочки и стафи-. лакокков. В связи с этим индекс здоровых доноров не.превышает величину, равную 4.

Однако в наших исследованиях не установлена и рямая корреляционная связь между титрами антител к дифтерийному, столбнячному анатоксинам и антигенам дизентерийной группы микробов. Как было от.мечено, у здоровых лиц до их вакцинации определяются значительные индивидуальные колебания величины индекса к дифтерийному анатоксину и антигену шигелл

Ньюкестл от 0,005 до 96„6; к столбнячному анатоксину и антигену шигелл Ньюкестл m

0,003 до 18,4. Индивидуальные вариации величины индекса до вакцинации, по-видимому, связаны с массовой активной профилактикой дифтерии и столбняка. В связи с этим по величине индекса иммунодиагностика этих инфекций невозможна. И, наоборот, в предлагаемом способе индекс позволяет проводить отбор лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций.

Таким образом, определяемые в предлагаемом способе конкретные исходные величины индексов, позволяющие проводить. отбор лиц для вакцинации анатоксинами не только по общему состоянию организма, оцениваемого по клинической картине, но и по уровню специфической (антитела к вводимому анатоксину) и неспецифической (антитела к контрольному антигену) гуморальной защиты от бактерий конкретного организма, что позволяет индивидуализированно подходить при вакцинации.

Учитывая, что титры антител к бактериальным антигенам в РПГА определяются с использованием коммерческих, выпускаемых отечественной промышленностью антигенных эритроцитарных диагностикумов предлагаемый способ может быть использован для отбора лиц вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций практически в любой иммунологической лаборатории.

Формула изобретения

Способ отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекции, включающий определение в сыворотке крови титров антител к специфическому антигенч в реакции пассивной гемагглютинации, 1720006

П изнэк

П агаемый

Известный

Область применения

В эпидемиологии для отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций

До вакцинации

В клинике инфекционных заболеваний для иммунодиагностики инфекций

Сраки исследования

Возможности использования

В период инфекционного процесса

Ограничено при ряде инфек.ций, s том числе при и те ии и столбняке;

При вакцинации практически любым бактериальным антигеном

Составитель П.Бонарцев

Техред М.Моргентал Корректор О.Кравцова

Редактор И.Сегляник

Заказ 769 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, у лиц выявляют индивидуальные титры антител к специфическому и неспецифическому .антигенам, определяют среднестатистические титры антител к данным антигенам с последующим вычислением индивидуального индекса в виде соотношения, где в числителе — произведение титра антител к специфическому антигену и среднестатистического титра антител к неспецифическому антигену, а в знаменателе — произведение титра антител к неспецифическому антигену и среднестатистического

5 титра антител к специфическому антигену, и при значении индекса менее 3 0 отбирают лиц для вакцинации против дифтерийной инфекции, а при величине индекса 1 2 и менее отбирают лиц для вакцинации I1po10 тив столбнячной инфекции,