Способ определения антиоксидантной активности сыворотки крови

 

COIQ3 СОВЕТСКИХ

СОЦИЛЛИСТИЧЕ СКИХ

РЕСПУБЛИК (sI>s G 01 N 33/52

ГОСУДЛРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4825261/14 (22) 14.05.90 (46) 15.09.92. Бюл. № 34 (71) Киевский научно-исследовательский институт кардиологии им. акад. Н.Д.СтражеСКО (72) Г.С.Воропков и И.Н.Евстратова (56) Авторское свидетельство СССР

¹ 1513405, кл. G 01. N 33/52, 1989. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИОКСИДАНТНОЙ АКТИВНОСТИ СЫВОРОТКИ

KP.OB И (57) Использование: в биологии и медицине.

Цель изобретения — упрощение способа за

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к биофизи еским методом исследования сывороткл крови для определения ее антиокислительнои активности.

Цель изобретения — упрощение способа за счет сокращения числа трудоемких операций.

Способ осуществляется следующим образом.

1 мл свежеприготовленной сыворотки крови, взятой утром натощак, помещают в кювету и регистрируют спонтанное свечение на хемилюминометре (например, на

ХЛМ 1Ц-01). Затем через и-лу в кювету добавляют 0,5 мл 3%-ного раствора перекиси водорода и вновь записывают хемилюминограмму в течение того же отрезка времени, Падение интенсивностл сверхслабого сввчения сыворотки крови, индуцированного перекисью водорода, обусловлено снижением концентрации перекисных радикалов в среде. Поскольку именно это является основным параметроь,, характери„„ Ж,„, 1762239А1 счет сокращения числа трудоемких операций. Сущность: в пробу, содержащую сыворотку крови, добавляют перекись водорода до конечной концентрации 1% (при этом сыворотку разводят в 1,5 раза) и регистрируют максимальную интенсивность хемилюминесценции и время от достижения максимума до начала стабилизации хемилюминесценции. Антиоксидантную активность сыворотки определяют по скорости снижения максимальной интенсивности хе-, милюминесценции до стабильного уровня, 1 табл. зующим функциональную способность антиоксидантной системы, скорость падения сверхслабого свечения рассматривают как прямой и объективный критерий состояния этой системы у данного обследованного.

Оценку активности антиоксидантной системы определяют по формуле в имп/с

Т

И1 И2 где А — активность антиоксидантной системы, имп/с;

И1 — пик свечения после добавления перекиси водорода, имп;

И2 — интенсивность свечения сыворотки через время, Т, имп;

Т вЂ” время изменения свечения от пика до начала стабильного уровня.

Пример 1, Пациент К, мужчина, 48 лет.

Диагноз: ишемическая болезнь сердца, стенокардия напряжения и покоя, постинфарктный кардиосклероз, атеросклероз венечных артерий.

1762239

Основные показатели липидного обмена и системы перекисного окисления липидов: содержание атерогенных липопротеидов — 5,59 г/л, холестерина—

5,03 ед/мл, триглицеридов — 1,98 ммаль/л, ацилгидроперекисей — 2,03 ед/мл, активность каталазы — 2,9 мг H$02/10 мин.

Изучение спонтанной хемилк>минесценции выявило, что она составляет 10 имп/с. Пик индуцированной хемилюминесценции был равен 1300 имп/с, а через 5 мин уровень сверхслабого свечения стабилизировался до 250 импс, Таким образом, скорость снижения индуцированной хемилюминесценции у данного больного оказалась равной 3,5 имп/с.

Анализ изменений липиднога метаболизма и параметров системы перекисного окисления липидов у бального К показал, что у него по сравнению с нормой (см. таблицу) несколько сниженными оказались содержание ацилглдраперекисей и активность каталазы. Чта касается скорости снижения индуцированной хемилюминесцeHIIYiL i, То она оказалась сниженной более чем в 4 раза по сравнению с нормальными величинами.

Таким образом, у больного К. уровень антиперекиснай защиты существенно снижен, хотя судить об этом по показателям липиднога обмена и системы перекиснаго окисления ллпидов Hp, представляется возмо>кным.

П р и и е р 2. Пацлент А., мужчина, 54 лет, Диагноз: ишемическая болезнь сердца, стенокардия напря>кения и пОкОя, постинфарктный кардиосклероз, атеросклероз ве. Нечных артерий.

Основные ",оказатели липидного обмена и системы перекиснага окисления ллпидов: содержание атерогенных липопратеидов -- 6,52 г/л, халестерина—

7,93 ммоль/л, триглицеридов — 1,33 ммоль/л, ацилгидраперекисей -3,13 ед/мл, IKT IBHOCTb Катал азьl — 4,7 Н 202/ 1 0 MICH.

Интенсивность спонтанной хемилюминесценции составила 7,8 имп/с. Пик индуцированнай хемилюминесценции был равен 4450 имп/с, Через 5 мин уровень сверхслабого свечения снизллcÿ до 250 имп /с. Скорость сн ижен ия ине уцирова н ной хемилюминесценцил оказалась равной

14 имп/с.. При анализе изменений липиднаго обмена и системы перекисного окисления липидов абрагцает на себя внлмание лишь некоторое повышение уровня холестерина в крови больного А. по сравнению с нормой.

При этом скорость снижения индуцированной хемилюминесценции не отличается от нормальных величин. Таким образом, у больного А, на фоне несколько измененной интенсивности липидного метаболизма активность антиперекисной системы существенна не изменена, Состояние антиперекисной защиты у больного К. и больного А. весьма существенно различается, о чем свидетельствует неодинаковый характер снижения индуцированной хемилюминесценции в сыворотке их крови. Следует полагать, что несмотря на одинаковое клиническое течение болезни, подходы к лечению этих больных должны быть разными, причем больному К, показано применение антиоксидантных препаратов, Пример 3. Известно, что у больных ишемической болезнью сердца отмечается выраженная неполноценность антиоксидантной системы крови из-за активации процесса перекисного окисления липидов и накопления его продуктов (диеновых коньюгатов и малонового диальдегида); снижения активности антиперекисных ферментов (каталазы, глутатионредуктазы); высокого содержания в крови липидных KQMlloHBHToB крови.

B таблице показаны средние величины про- и антиоксидантной активности сыворотки крови у больных по сравнению с нормой.

Kav„следует из таблицы, наиболее выраженные изменения со стороны антиоксидантной системы наблюдались у больных с крупноочаговым инфарктам миокарда.

Изобретение позволяет существенно упростить определение антиаксидантной активности за счет сокращения числа операций, в том числе внесения добавок в пробу.

Формула изобретения

Способ определения антиоксидантной активности сыворотки крови, включающий исследование индуцированной хемилюминесценции сыворотки, а т л и ч а ю шийся тем. что, с целью упрощения способа, к сыворотке крови добавляют перекись водороpà до конечной концентрации 17> при разведении сыворотки в 1,5 раза, измеряют максимальную интенсивность хемилюминесценции и время от достижения максимальной интенсивности до начала стабилизации хемилюминесценции, а антиоксидантную активность сыворотки определяют по скорости снижения максимальной интенсивности хемилюминесценции да ста бильнаго уровня.

1762239

Антиоксидантная активность сыворотки крови

Состояние анти активн корость падения хемилюминесценции ных

Нор

14,3+ 1,4

13,9+1.9

20 ат

Норп ноо кар

Сниж

7,8 +0,8

13,6+1,3

9,6+ 1,4 кой

=10

Нор еск

n=1

Сниж

Производственно-изд; тельский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Составитель Н.Гуляева

Редактор Техред М.Моргентал Корректор Л.Филь

Заказ 3257 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5