Способ получения сорбента для жидкостной колоночной хроматографии

 

союз соВетских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РГСПУБЛИК

ts»s G 01 N 30/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4898547/25 (22) 03.01.91 (46) 23,10.92. Бюл. ¹ 39 (71) Институт биоорганической химии АН БССР (72) А,П.Дрожденюк, В.П.Голубев, И.Н.Мороз и С,А.Усанов (56) Tiselivs Н. а.о. Protein chromatography

on calcium phosphate columns. Biochem., Biophys. 65, N 1, р. 132 — 155, 1956.

Авторское свидетельство СССР

N 1197725, кл. 6 01 N 30/48, В 01 О 15/08, 1985, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СОРБЕНТА ДЛЯ

ЖИДКОСТНОЙ КОЛОНОЧ НОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

Изобретение относится к сорбентам для жидкостной хроматографии, конкретно, к получению нового сорбента типа оксиапатита, который может быть использован для жидкостной колоночной хроматографии биополимеров.

Известен способ получения сорбента оксиапатита для разделения белков, который заключается в обработке раствора хлористого кальция двузамещенным фосфатом натрия с последующим кипячением полученных кристаллов брушита в растворе едкого натра. Для получения 200 мл суспензии сорбента необходимо 30 — 35 ч.

Известен способ получения сорбента для жидкостной колоночной хроматографии, заключающийся в том, что раствор виннокислого натрия обрабатывают раствором хлористого кальция, осадок подвергают обработке раствором фосфата калия при 70—

85ОС, затем — при кипячении. Полученный сорбент промывают фосфатным буфером.

Данный способ позволяет получать шаро(57) Использование: изобретение относится к сорбентам для жидкостной хроматографии, в частности к получению нового сорбента для жидкостной хроматографии, Сущность: сорбент получают смешиванием растворов натрия винокислого, хлористого кальция и уксуснокислой меди. После кратковременной обработки полученнь.х сферических гранул сорбента концентрированными растворами содержащими фторид- и фосфат-ионы, при комнатной твмпературе и уравновешивании фосфат-ионами при нейтральных значениях ° рН сорбент используют в колоночной хроматографии. 2 ил. видные частицы сорбента определенного размера.

Недостатком прототипа является длительность процесса получения сорбента, недостаточно высокая сорбционная емкость для белка.

Целью изобретения является сокращение длительности процесса получения сорбента и улучшение его хроматографических характеристик.

Поставленная цель достигается тем, что в способе получения сорбента при смешении раствора виннокислого натрия приливают смесь растворов хлористого кальция и уксуснокислой меди. Осадок суспендируют в растворе фтористого кальция. Полученные кристаллы сорбента обрабатывают раствором фосфата калия и промывают фосфатным буфером.

Применяемые в заявляемом способе, в отличие от прототипа, добавление ионов меди, обуславливаащее получение кристаллов шаровидной формы, и обработка раствором

1770896 274 фтористого калия ранее при получении сорбентов типа оксиапатита не использовались.

Су;цность изобретения поясняется фигурами графического изображения и примеРом конкретного выполнения.

На фиг. 1 приведен профиль элюции

БСА, связавшегося с сорбентом; на фиг, 2— фотография кристаллов сорбента, полученного способом-прототипом; на фиг. 3 — фотография кристаллов сорбента, полученного по заявленному способу, Пример, К 45 мл 0,33 M раствора натрия Виннокислого приливают cM8cb, состоящую из 25 мл раствора "хлористого кальция (p-1,085) и 15 мл 0,1 M раствора

yKcycI IGKgcfIGA меди, Полученный Раствор

Г!ед елиВают из Одного сосуда в другоЙ в течение 70 — 100 Раз (2 — 3 мин), образовавшийся осадок декантируют и промывают 12 Раза Дистиллированной ВОДОЙ. Время оседания частиц 3-5 минут. Затем осадок суспендируют в 20 мл 2 Ч раствора фтористого калия. Выдерживают 1 — 2 мин, супернатант сливают, а осадок промывают дважды дистиллированной водой. Затем сорбент обрабатывают 25-30 мл 1,5 M раствора фосфата калия, РН 8,5 — 9,0, выдерживают 5 — 10 мин, осадок промывают водой и суспендируют в 0,001 М натрийфосфатном буфере, РН 6,8 — 7,5. Полученный таким образом сорбент используют в хроматографии.

Хроматографические характеристики: ем5 кость по БСА 59 мг/г, скорость протекания растворителя 90 мл/ч. Время получения сорбента 45 — 60 мин.

Таким образом, преимуществами заявляемого способа являются: сокращение

10 Времени получения сор68НТВ увеличение сорбционной емкости, отсутствие тепловой обработки, получение кристаллов практически сферической формы, Формула изобретения

15 Способ получения сорбента для жидкостной колоночной хроматографии, включающий осаждение виннокислым натрием нерастворимой соли. содержащей ионы кальция, из раствора, содержащего хлори20 стый KBffblJ,ий, Обработку Осадка Раствором фосфата калия и промывку фосфатным 6уфером, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени процесса и улучшения хроматографических характеристик сорбен25 та, при осаждении к раствору хлористого кальция Добавляют растВОР уксуснокислОЙ меди, а перед обработкой осадка фосфатом калия осадок суспендируют в растворе фтоОистого калия.

СЬЕВ 7

Составитель Л. Жаркова

Техред М.Моргентал Корректор Н, EyqoK

Редактор

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Заказ 3740 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5