Способ консервирования фармакоцитов с включенной l- аспарагиназой

 

Использование в области медицинской биохимии, в частности при консервировании новых лекарственных средств на основе эритроцитов. Сущность изобретения: получение фармакоцитов с включенной L-acna- рагиназой диализным методом, с полным соблюдением условий асептики Фармакоциты консервируют в соотношении 2:1 в растворе Эритронаф, содержащем глюкозу в концентрации 1,5 г/100 мл Полученные фармакоциты хранятся при температуре 4± 2°С Способ позволяет сохранить жизнеспособность и функциональную полноценность фармакоцитов в течение 7 сут 1 табл

СОВХОЗ СОВЕ ВСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ .РЕСПУБЛИК

<я)л А 61 К 47/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

P (21) 4856882/14 (22) 24.08.90 (46) 30.11.92, Бюл. N.. 44 (71) Всесоюзн ый гематологический научный центр (72) В.А.Аграненко. Ф.И.Атауллаханов, В.М,Витвицкий, А.Б.Кияткин, А.М.Жаботинский, Н.А,Маркова и Е.И.Синауридзе (54) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ФАРМАКОЦИТОВ С ВКЛЮЧЕННОЙ L-АСПАРАГИНАЗОЙ (57) Использование: в области медицинской биохимии, в частности при консервироваИзобретение относится к медицинской биохимии и может быть использовано при хранении новых лекарственных форм на основе эритроцитов.

Эритроциты-носители, заполненные лекарственным препаратом (фармакоциты), не равнозначны целым зритроцитам по устойчивости к различным воздействиям и хранению, Прочность этих клеток по сравнению с исходными эритроцитами снижена и зависит от способа их получения. Методы консервирования фармакоцитов должны отличаться от методов консервирования целых эритроцитов и различаться в зависимости от того, каким способом они были получены (т.е. насколько сохранилась целостность их мембраны и функциональная полноценность).

Изобретение прототипа не имеет, так как вопросы консервирования и хранения эритроцитов, содержащих внутри фармакологический препарат, в отечественной и зарубежной научно-патентной литературе не изучены.

„... Ж, „1777887 А1 нии новых лекарственных средств на основе эритроцитов. Сущность изобретения: получение фармакоцитов с включенной L-аспарагиназой диалиэным методом, с полным соблюдением условий асептики. Фармакоциты консервируют в соотношении 2:1 в растворе "Эритронаф", содержащем глюкозу в концентрации 1,5 г/100 мл. Полученные фармакоциты хранятся при температуре

4 + 2 С. Способ позволяет сохранить жизнеспособность и функциональную полноценность фармакоцитов в течение 7 сут. 1 табл.

Целью изобретения является разработка способа хранения (консервирования) эритроцитов с L-аспарагиназой внутри, полученных диалиэным методом, Поставленная цель достигается путем строгой стандартизации процесса диализного получения эритроцитов-носителей, нагруженных L-аспарагинаэой, и хранения полученных фармакоцитов при 4» 2 С в ресуспендирующем растворе "Эритронаф" (в соотношении эритроциты: раствор "Эритронаф" = 2:1), содержащем дополнительно глюкозу в концентрации 1,5 г/100 мл.

Пример. Получение и хранение фармакоцитов, заполненных препаратом L-аспарагиназы).

Для приготовления зритроцитов-носителей с фармакологическим препаратом внутри использовали зритроцитную массу. полученную путем удаления плазмы из дозы консервированной донорской крови, заготовленной на стандартном гемоконсерванте "Глюгицир" и хранившейся в контейнере

"Гемакон 500/300" при температуре 4-t2 С в течение 1-2 сут.

1777887

Изменение ряда параметров фармакоцитов в процессе хранения

В качестве фармакологического препарата, вводимого в эритроциты, использовали препарат L-аспарагиназы, применяемый в клинике при терапии ряда лейкозов (с активностью 10000 М.Е. во флаконе).

Все процедуры приготовления фармакоцитов проводили в строго стерильных условиях на аппарате "Искусственная почка" — диализаторе ДИП-02.

Эритроцитную массу отмывали трижды стерильным апирогенным раствором 0,9 ного хлорида натрия (охлажденного до температуры 4ч-2 С). Параллельно готовили раствор L-аспарагиназы, для чего 20 флаконов препарата растворяли в 20 мл дистиллированной воды. Приготовленный раствор

L-аспарагиназы переводили в контейнер с эритроцитами в стерильном ламинарном боксе через стерилизующий фильтр Суинекс (фирмы Миллипор, США). Затем тщательно перешивали содержимое контейнера.

Диализная установка заполнялась предварительно охлажденным до 4: .2 С лиэирующим раствором, который содержал:

АТФ -5 г/л; глюкозу — 5 г/л; М9804 -1,2 г/л, NazHPOnx12 Н20 — 16 г/л. Гипотонический диализ проводили при комнатной температуре в диализной установке путем 10-минутной встречной циркуляции смеси эритроцитов с L-аспарагиназой и данного лизирующего раствора. Через 10 мин после начала гипотонического диализа в смеси восстанавливали нормальную тоничность, для чего в емкость с лизирующим раствором вносили рассчитанное количество NaCI (45 г/5 л). Температуру смеси эа 10 — 15 мин поднимали до 37 С с .помощью водяного термостата. Процесс репарации проводили при данной температуре в течении 30 мин, после чего суспензию готовых эритроцитовносителей с препаратом L-аспарагиназы внутри вновь переводили из диализной установки в полимерный контейнер "Гемакон

500/300".

Для полного удаления вышедшего из

5 эритроцитов гемоглобина фармакоциты сначала откручивали, а потом трижды отмывали физиологическим раствором путем центрифугирования (20009 х 5 мин). Последний супернатант имел бледно-розовый

10 цвет.

Для дальнейшего консервирования и хранения к отмытым фармакоцитам прибавляли ресуспендирующий и консервирующий раствор "Эритронаф" (ВФС 42-1859-88)

15 в соотношении 2;1, к которому предварительно стерильно добавляли раствор глюкозы до концентрации 1,5 г/100 мл.

Содержимое контейнера тщательно перемешивали и хранили затем при темпера20 туре 4+2"С.

Из одной дозы крови получали шесть лечебных доз препарата L-аспарагиназы (с активностью по 10000 М.Е.). . Стерильность, жизнеспособность и

25 функциональная полноценность фармакоцитов, оцененные по данным бакпосева, а также по тестам на осмотическую резистентность эритроцитов и по сохранению до

48% уровня внутриклеточного АТФ (между30 народный трансфизиологический стандарт) сохранялись в течение 7 сут. 8 течение всего этого срока сохранялась также активность препарата L-аспарагиназы внутри фармакоцито в (см. табл и цу).

35 Формула изобретения

Способ консервирования фармакоцитов с включенной L-аспарагиназой, полученных диализным методом, заключающийся в том, что фармакоциты ре40 суспендируют в соотношении 2:1 в растворе

"Эритронаф", содержащем глюкозу в концентрации 1,5 г/100 мл. и хранят при 4 С.