Способ пассирования клеток животных и устройство для его осуществления

 

Использование: биотехнология и техническая микробиология. Сущность изобретенияжлетки культивируют до прикрепления к носителю. Затем носитель с монослоем клеток переносят в свежую питательную среду и культивируют до образования мультислоя. Верхние слои клеток снимают встряхиванием , монослой клеток вновь культивируют до образования мультислоя в свежей питательной среде. Устройство содержит емкость с размещенным в ней носителем клеток в виде волокон, закрепленных в крышке ёмкости . 2 с.п. ф-лы, 1 ил.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

О

О

О

О 4 (21) 4850659/13 (22) 24,07,90 (46) 07.03 93. Бюл, ¹ 9 (71) Институт биологической физики АН

СССР (72) В. С. Акатов, Н. Г. Берестовская и В. П.

Лавровская (56) Una S. Ryan et al., Tissue aud celi, 1980.

12, 619.

Пол Дж, Культура клеток и тканей. — М.:

Медгиз, 1963. с. 14. 216.

Изобретение относится к технике культивирования клеток вне организма и может найти применение в биологии, медицине и биотехнологии.

Изобретение предназначено преимущественно для облегчения техники пассирования без использования протеолитических ферментов и хелатирующих агентов при непрерывном ведении культуры клеток для исследовательских работ на культурах контактзависимых клеток, Кроме того, предлагаемый способ может быть использован в биотехнологии для получения биомассы клеток с целью последующего выделения из них био. огически активных веществ и вирусных и репаратов.

Целью изобретения является увеличение выхода и уменьшение травмируемости

„„5U„„1799907 Al (st)s С 12 N 5/00, С 12 М 3/00 (54) СПОСОБ ПАССИРОВАНИЯ КЛЕТОК

ЖИВОТНЫХ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ ЕГО

ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ (57) Использование: биотехнология и техническая микробиология, Сущность изобретения:клетки культивируют до прикрепления к носителю. Затем носитель с монослоем клеток переносят в свежую питательную среду и культивируют до образования мультислоя.

Верхние слои клеток снимают встряхиванием, монослой клеток вновь культивируют до образования мультислоя в свежей питательной среде. Устройство содержит емкость с размещенным в ней носителем клеток в виде волокон, закрепленных в крышке емкости. 2 с.п. ф-лы, 1 ил. клеток в процессе их отделения и снятие с носителя.

На чертеже изображено устройство для реализации предлагаемого способа.

Устройство содержит флакон 1 с пробкой 2, в которой с помощью стержней 3 закреплены эластичные трубки 4, соединенные с волокнами 5, свободно расположенными на дне флакона.

Изобретение реализуется следующим образом.

Суспензию клеток в питательной среде вводят во флакон 1, закрывают его пробкой

2, в которой закреплены носители волокна (капилляры) 5. Клетки оседают на дно флакона 1 и волокна 5. После прикрепления клеток к волокнам 5 (контроль осуществляют при помощи микроскопа) пробку 2 с волокнами 5 вынимают и переносят во флакон со

1799907

Составитель В,Лавровская

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор О. Кравцова

Редактор Л.Волкова

Заказ 1138 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 свежей питательной средой, соблюдая условия стерильности. Дальше клетки растут на волокнах до образования мультислоя.

Для отделения клеток флакон несколько раз встряхивают вручную. При этом слабо прикрепленные верхние слои клеток отдел./ ляются от волокон, обнажая монослой распластанных на волокнах клеток. Контроль за ростом и отделением клеток осуществляют визуально и с помощью микроскопа, Затем пробку 2 с волокнами 5, покрытыми монослоем оставшихся клеток переносят во флакон со свежей питательной средой для выращивания нового мультислоя и осуществления последующего цикла пассирования, Пример . Фибробласты китайского хомячка лини В-11-d-й-FAF-28 клон 431 выращивали в смеси сред Игла и 199 (1:1) с добавлением сыворотки крупного рогатого скота (107;) и гентамицина (150 мкг/мл).

Суспензию клеток объемом 7 мл с концентрацией 4 10 клеток/мл заливали во флакон

Карреля с волокнами, диаметром 1 мм и длиной 2 до 3 см. После прикрепления клеток к волокнам примерно через 10 ч культивирования при 37 С пробку с прикрепленными к ней волокнами перенесли в культуральный флакон со свежей питательной средой. Легким встряхиванием волокна располагали во флаконе так, чтобы они были отделены друг от друга. Далее проводилось культивирование при 37 С до образования мультислойнblх структур клеток на волокнах, через 2 — 3 дня встряхиванием снимали по (5 — 6) 10 клеток с одного б флакона в объеме среды 7 мл.

Предлагаемые способ и устройство пассирования клеток позволяют увеличить выход клеток снимаемых с подложки в 10 — 20 раз по сравнению со способом механического съема клеток с сохранением 97 †9, жизнеспособных клеток.

Формула изобретения

1, Способ пассирования клеток животных, включающий культивирование клеток на носителе с последующим их механическим снятием, отличающийся тем, что, с целью увеличения выхода и уменьшения травмируемости клеток, в качестве носителя используют волокна, клетки культивируют до образования мультислоя, затем верхние слои клеток снимают, а носитель с монослоем клеток культивируют в свежей питательной среде до образования мультислоя.

2, Устройство для пассирования клеток животных, включающее флакон с горловиной и пробкой, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью увеличения выхода жизнеспособных клеток за счет снижения их травмируемости в процессе деления и снятия, во флаконе размещены волокна»капилляры, служащие носителем для клеток, расположенные свободно на дне флакона и соединенные с пробкой посредством гибких эластичных трубок и стержней.