Способ неспецифической противовирусной защиты клеток vero

Авторы патента:

МИРЦХУЛАВА МЕРАБ БОРИСОВИЧ

ЦИБАДЗЕ ДАВИД АЛЕКСАНДРОВИЧ

ИВАНИДЗЕ ЭДИШЕР АМИРАНОВИЧ

БАРНАБИШВИЛИ НЕЛЛИ ОТАРОВНА

ЦИБАДЗЕ АЛЕКСАНДР ДАВИДОВИЧ

C12N7 - Вирусы, например бактериофаги; их композиции; приготовление или очистка их (лекарственные препараты, содержащие вирусы A61K 35/76; получение лекарственных составов, содержащих вирусные антигены или антитела, например вакцин из вирусов A61K 39/00)

C12N5 - Недифференцированные клетки человека, животных или растений, например клеточные линии; ткани; культивирование или сохранение их; питательные среды для них (размножение растений из тканевых культур A01H 4/00)

Использование: медицина, вирусология , биотехнология. Монослой культуры клеток Vero выращивают в течение 1-2 дней, затем обрабатывают переменным магнитным полем с частотой 600-70000 Гц, индукцией 0,0002-0,3 мТ, временем экспозиции 30-70 мин. После заражения клеток вирусом цитопатическое действие вируса не проявляется. 1 табл.

сок33 советских социАлистических

РЕСПУБЛИК (лис С 12 N 7/00, 5/00 гбсудАРcTBFннОе пАтенTHoE вЕдомство сссР

{Г спАтент сссР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К,ПАТЕНТУ

1 (2 1 ) 4929531/13 (22) 19.04,91 (46) 30.01.93. Бюл. N 4 (71) Научный центр эпидемиологии, гигиены и профзаболеваний Министерства здравоох анения и социально-о обеспечения респ блики Грузия (72 М.Б,Мирцхулава, Д.А,Цибадзе, Э.А,Ивани зе, И.О,Барнабишвили и А.Д,Цибадзе (73 М,Б,Мирцхулава !

1 !

Изобретение относится к медицине, в ча тности вирусологии., Всеобще известен и распространен сп соб продуцирования неспецифической пр тивовирусной зашиты вЂ” применение инте ферона. Интерферон приводит к продуци ованию защиты клеток от вирусной ин екции, хотя это не спасает клетки от за ажения, а лишь уменьшает силу действи вируса, B чем и выражается недостаток да ного способа.

Целью изобре.ения является эффективна неспецифическая противовирусная защита клеток Чего.

Это достигается там, что в предлагае . мом способе достигается эффективная не! специфическая защита клеток Чего путем воз цействия на клеточные культуры Чего переменным магнйтным полем.

Клеточные культуры Че о выращивались в виде 1-2-дневного монослоя в пенициллиновых. флаконах. Клеточные культуры обрабат вались переменным магнитным полем (50-,80000 Гц, индукция 0,0001-0,4 мТ), созда 1ным в солЕноиде при прохождении переменного синусоидального тока от генератора ГЗ-33. Заражение проводили

„„SU „„1792426 А3 (54) СПОСОБ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОТИВОВИРУСНОЙ ЗАЩИТЫ КЛЕТОК Vего (57) Использование: медицина, вирусология, биотехнология, Монослой культуры клеток Чего выращивают в течение 1 вЂ” 2 дней, затем обрабатывают переменным магнитным полем с частотой 600 вЂ” 70000 Гц, индукцией 0,0002 вЂ” 0,3 мТ, временем экспозиции

30 вЂ” 70 мин. После заражения клеток вирусом цитопатическое действие вируса не проявляется, 1 табл, после обработки гголем вирусами лихорадки

Западного Нила, грипп А (М1Н1 Гонконг), парагрипп (тип 2). Использовались следующие дозы вирусов; Западный Нил 50% цитопатическая доза (ЦПДьо) 6 tg-0,2 мл, Грипп

3 ГАЕ (гемагглютинирующая единица) -0,2 мл, парагрипп ЦПД5о 6 tg-0,2 мл, Перед заражением иэ флаконов удаляли питательную среду, монослой промывали раствором

Хенкса, после чего вносили вирус, ставили

1И серии опытов для трех вышеуказанных вирусов, которыми по отдельности заражали клеточные культуры, и контроль для необлученных куль:ур, После часовой инкубации при 37 С неабсорбированные вирусы уд аляли, моносл ой трижды промывали раствором Хенкса и вносили культуральную среду, Результаты учитывали через

3,12,24,72,96,120, l44 и 158 ч инкубации зараженных клеточных культур по цитопатическому действию (ЦПД) и реакции .гемагглютинации (РГА) микрометодом на полистироловых панелях, Титром антигенл считали его наивысшее разведение, при котором обнаруживалась интенсивная гемагглютинация 3+-4 . В клеточных, где не наблюдалась ЦПД магнитного поля, эффек1792426 тивной защитой считали продуциропанную при действии поля защиту по отсутствии

° РГА вирусосодержащей культуральной жидкости (ВКЖ) и ЦПД вирусов в течение 168 ч (7 дней), Более долгие сроки инкубации клеток приводят к нарушению целостности клеток в контроле, в необлученных магнитным полем образцах, Поэтому максимальное время для экспериментов 168 ч. В течение этого времени. отсутствие заражения вирусами облученйых магнитным полем клеточных культур,лопределенное по РГА ВКЖ и

ЦПД вирусов, считали продуцированием противовирусной защиты, эффективной противовирусной защитой против вирусного заражения клеток Чего. Результаты представлены в таблице 1. Из таблицы видно, что эффективная противовирусная защита продуцируется при частотах 600 вЂ” 70000 Гц, индукции 0,0002-0,3 мТ для всех трех используемых вирусов одинаково. Значит имеется неспецифическая противовирусная защита при действии указанных полей, В укаэанном диапазоне поля использовались поля следующей экспозиции;

5,10,15,20,25,30,40,50,60,70,80,90 мин. Вышеуказанная защита клеток продуцировалась только при 30-70-минутном облучении

5 клеточных культур. Таким образом, эффективная неспецифическая противовирусная защита клеток Чего продуцируется при действии на клеточные культуры Чего переменного магнитного поля следующих характеристик:

10 частота 600-70000 Гц, индукция 0,0002 вЂ” 0,3 мТ, время экспозиции 30-70 мин. Доп редел ьн ые величины; частота 500 Гц, индукция 0,0001 мТ, время 25 мин. Послепредельные величины: частота 80000 Гц, индукция 0,35 мТ, вре15 мя 80 мин, Формула изобретения

Способ неспецифической противовирусной защиты клеток Чего, заключающийся в

20 том, что монослой клеток выращивают в течение 1-2 дней и обрабатывают переменным магнитным полем с частотой 60070000 Гц, индукцией 0,0002-0,3 мТ, временем экспозиции 30-70 м лн

Зависимость полелемнл титра РГА (час) ВКЖ от частоты н индукции пвременмОго магинтмОго полл прилохсессносо к клеточным культурам

Им к нл. му

Часто0.35 0.4

0.3

025

015 02

О. 12

0,1

0.05 0.08

0.03

0,01

О.OO! О.OO5