Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus l, продуцирующий моноклональные антитела к гемагглютинину вируса гриппа птиц 7-го подтипа

 

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (5!)5 С 12 N 5/18

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4326510/13 (22) 09.11.83 (46) 30.05.93. Бюл, В 20 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной вирусологии и микробиологии (72) Н.И.Митин, Е.Г.Реутова, О.В.Белун, С.И.Сидоров и А.А.Черных (56) Kohler J., Milstein G., Eur.J. Immunol, 1976, ч. 6, р. 511, Ямникова С.С., Курочкин С.Н„Гнучев

Н,В. и др, "Вопросы вирусологии", 1983, ч. 1, р, 21 . (54) ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ MUS

MUSCULUS L, ПРОДУЦИРУЮЩИЙ МОНОИзобретение относится к вирусологии и представляет новый штамм гибридных клеток, продуцирующих моноклональные антитела к гемагглютинину вируса гриппа птиц

7-го подтипа (Н7Й1). Моноклональные антитела, продуцируемые гибридным штаммом клеток ГАД3$р84. могут быть использованы в диагностических, научных исследованиях.

Целью изобретения является получение штамма гибридных клеток, обладающих генетически стабильными свойствами, продуцирующих моноклональные антитела к гемагглютининч виочса гриппа птиц. шт. А (курица) СССР (С-68) H7N1.

Это достигается тем, что клетки перевиваемой мышиной миеломной линии Sp 2/0Ag 14-1 гибридизировали по методу

Келлера и Мильштейна с незначительными модификациями с лимфоцитами селезенки мышей, иммунизированных трехкратно очи,,!Ж,, 1818342 А1

КЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА К ГЕМАГГЛЮТИНИНУ ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ 7-ГО

ПОДТИ ПА (57) Использование: вирусология. Сущность изобретения: получен новый генетически стабильный штамм гибридных клеток IAD3

Sp-84, продуцирующий моноклональные антитела к гемагглютинину вируса гриппа птиц, используемый в диагностических и научных исследованиях, Штамм получен слиянием клеток перевиваемой мышиной .миеломы Sp 2/Π— Ag 14 — 1 с лимфоцитами селезенки мыши, иммунизированной высо- а коочищенным и концентрированным препаратом вируса гриппа птиц 7-го подтипа, Н7

N 1, Штамм депонирован в ВСКК (II) 5590. щенным и концентрированным вирусом гриппа птиц шт.А(курица) СССР (С-68)H7N1.

Анализ моноклональных антител, продуцируемых гибридными клетками в культуральную жидкость, проводили микрометодом реакции задержки гемагглютинации—

РЗГА. Клоны, дающие положительную реакцию, клонировали в "мягком" агаре. В результате было выделено несколько субклонов, иэ которых был выбран клон

ГАД3$р84, стабильно продуцирующий моноклональные антитела.

Предложенный штамм гибридных клеток ГАД3$р84 имеет следующую характеристику: культура состоит иэ клеток округлой формы, с ядрами, смещенными к одной стороне клетки. Цитоплазма имеет вид тонкого ободка;

1818342

Составитель НЛйитин

Техред М.Моргентал Корректор Л.Ливринц

Редактор

Заказ 1925 Тираж Подписное

ЙНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям ори ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул, Гагарина, 101 стационарная суспензия, снимается встряхиванием, частота пассирования 3-4 сут. Посевная доза 150-200 тыс.клеток в 1 мл, Кратность рассева 1:2-1:3; модальный класс - 96 хромосом. Кариотип соответствует мышиному; среда культивирования — среда Дульбекко, 15 )(, эмбриональной сыворотки теленка, глютамин, пируват натрия, гентамицин; клетки хранятся в пластиковых ампулах в жй4ком азоте после перевивания на мышах в виде асцитной опухоли и после клонироаания в "мягком агаре" по 10-20 млн. в 1 мл; криоэащитная среда — ростовая среда с добавлением 30-40 эмбриональной сыворотки теленка и 10;ь диметилсульфоксида; контаминации бактериями, грибами; дрожжами и микоплазмами не обнаружено, Гибридные клетки перевйваемого штамма ГПДЗЗр84 сохраняют стабйльнув продукцию моноклональных антител в культуральную среду на протяжений 30 пассажей (срок наблюдения) и накопление биологически активных антител в высоких титрах в индуцируемых асцитных опухолях — 1:10240 в РЗГА. Продуцируемые моноклональные антитела относятся к иммуноглобулинам класса fgG, она охарактеризованы методами твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА), РЗГА, непрямом методе иммунофлуоресценции с использованием меченого флуорохромом

10 кроличьего антимышиного глобулина.

Новый продуцент моноклональных антител — штамм гибридных клеток ГАДЗ$р84 может быть использован как источник IgG; высокоспецифических и активных для изго15 товления диагностических препаратов и изучения антигенной структуры возбудителя.

Формула изобретения Штамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus 1 8СКК (Н)

559 g,ïðîäóöèðóþùèé моноклонзльные антитела к гемагглютинину вируса гриппа птиц 7-го подтипа.