Способ определения хронической интоксикации нитратами

 

Использование: медицина, а именно экспериментальная и экологическая токсикология . Цель: повышение точности способа . Сущность предложения: лабораторным животным вводят нитраты, затем берут пробу крови, в которой определяют уровень восстановленного глютатиона и при снижении уровня этого показателя в сравнении с контролем определяют хроническую интоксикацию нитратами.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s G 01 N 33/52

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4863213/14 (22) 31.08.91 (46) 15,07.93. Бюл, ¹ 26 (72) Л.А.Тиунов, В.А.Баринов, В.А.Иванова, Ю.Я.Кисляков, Л.А,Морозов, В.В.Чумаков и

Т.М.Флоринская (56) Sci, Wor s Higeher Med.inst.Pleven., 1986, v,8, ¹ 1, р.59 — 63. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ИНТОКСИКАЦИИ НИТРАТАМИ

Изобретение относится к экспериментальной и экологической токсикологии и предназначено для ранней диагностики интоксикации нитратами.

Цель изобретения — повышение точности способа определения хронической интоксикации нитратами.

Пример конкретного выполнения, Модел и рован ие хрон ической интокси кации нитратами производили с помощью нитрата калия путем ежедневного внутрижелудочного введения белым крысам на двух уровнях воздействия: 1/10 и 1/100 от ЛДзо, т,е.400 и 40 мг/кг. Контрольным животным вводили физиологический раствор. Обследование подопытных животных производили на 10-15, 30 и 45 сутки. Использовали набор из 28 показателей (гематологических, биохимических, физиологических и поведенческих). На фоне этих данных сравнивали диагностическую значимость известного способа определения хронической интоксикации нитратами (по повышению метгемоглобина в крови) и вновь предлагаемого (по снижению содержания восстановленного глутатиона в крови).

„„. р ) ÄÄ 1827630 А1 (57) Использование: медицина, а именно экспериментальная и экологическая токсикология. Цель: повышение точности способа. Сущность предложения: лабораторным животным вводят нитраты, затем берут пробу крови, в которой определяют уровень восстановленного глютатиона и при снижении уровня этого показателя в сравнении с контролем определяют хроническую интоксикацию нитратами.

Для определения содержания восстановленного глутатиона на анализ берут 0,2 мл цельной крови. Гемолизируют ее на льду в 3, 4 мл дист.воды с добавкой 1 10 ЭДТА (для предотвращения спонтанного окисления восстановленного глутатиона). Затем добавляют 0,4 мл 10% раствора метафосфорной кислоты для осаждения белков. Пробы центрифугируют. Из надосадочной жидкости отбирают по 1,0 мл в контрольную и две (для параллельного измерения) заранее приготовленные реакционные смеси. В контроле содержится 2,0 мл 0,2 мл ацетатного буфера с рН 4,6 (разведенного дист,водой в соотношении 1:3), в опыте— смесь 0,2 м ацетатного буфера (приготовленного также, как в контроле) и раствора п-хлормеркурибензоата, взятых в соотношении 7:1. Последний готовят растворением 9 мг вещества в 1,5 мл 0,1% раствора

КОН и доведением объема до 50 мл. Через

20 мин замеряют при 255 нм оптическую плотность опытных проб против контрольной. Из полученных значений вычитают поправку на оптическую плотность реактивов, Искомое количество восстановленного глутатиона рассчитывают с помощью калибро1827630 при 400 мг/кг на 10, сутки — на 22,3 контроль — 31,8 "=1,73 мг опыт — 24,7 + 1,73 мг% при 400 мг/кг на 30 сутки — на 31,9 контроль — 33,9 ч- 1,85 мг опыт — 23,1ч+ 1,50 мг % при 40 мг/кг на 30 сутки — на 17,7% контроль — 30,5 + 1,67 мг опыт — 25,1 + 1,00 м г о

35

45

Составитель В.Иванова

Техред М.Моргентал Корректор M.Àíäðóøåíêî

Редактор

Заказ 2357 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Ра шская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул. Гагарина, 101 вочной кривой и выражают в мг, Длительность анализа 30 мин, Сравнительный анализ результатов одновременного исследования содержания метгемоглобина и восстановленного глутатиона в.крови одних и тех же подопытных животных покавал преимущества глутатионового Мста, который более точно отражал развитие Ии рапной интоксикации. (. л ° j

Сн ркрние содержания восстановленного глутатйона регистрировалось уже на

10-е сутки при введении нитрата в дозе 400 мг/кг и составляло 22,3 . Снижение содержания восстановленного глутатиона (в от контрольного уровня) проявляло отчетливую зависимость от дозы нитрата и длительности его поступления в организм;

В то же время содержание метгемоглобина при поступлении нитрата в дозе 400 мг/кг изменялось только на 30 сутки (контроль 0,51 ч 0,070 ; опыт 0,82 + 0,048 от содержания гемоглобина), оставаясь в пределах физиологической нормы. Изменение в формуле крови, в массовых индексах внутренних органов, интенсификация ПОЛ, нарушения поведенческих реакций

"0 отмечались в данном эксперименте в более поздние сроки (на 45 сутки), что согласуется с представлением о том, что первичные признаки нарушения гомеостаза регистрируются на молекулярном уровне и являются предвестниками развития патологических изменений, наблюдаемых на организменном уровне.

Формула изобретения

Способ определения хронической ин20 токсикации нитратами, включающий введение лабораторным животным нитратов с последующим исследованием крови, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют в динамике

25 уровень восстановленного глютатиона, и при снижении уровня этого показателя в сравнении с контролем определяют хроническую интоксикацию нитратами,