Способ обнаружения гиперурикемии

 

Использование: медицина, клиническая биохимия. Сущность изобретения: к слезной жидкости добавляют реагент, состоящий из 3,5-дихлор-2-гидроксилбензолсульфоновой кислоты, уриназы, пероксидазы и4-аминоантипирина, инкубируют смесь в течение 5 мин при температуре 37°С и определяют уровень мочевой кислоты путем спектрофотометрии при 520 им и при значении этого показателя выше 120 ммоль/л судят о наличии гиперурикемии. Положительный эффект: способ атравматичен, использование способа позволяет в течение 15 мин определить наличие гиперурикемии.

СОЮЭ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 G 01 N 33/52

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ

«» (21) 4897428/14 (22) 28.12.90 (46) 15.03.93. Бюл. N 10 (71) Пермский государственный медицинский институт и Московский медицинский стоматологический институт им. Н,А.Семашко (72) Н.А.Терехина, IO,А.Петрович и Т,А,Дворянских (73) Пермский государственный медицинский институт (56) Analyst, 1972, v.97, рр.142-145. (54) СПОСОБ ОБНАРУЖЕНИЯ ГИПЕРУРИКЕМИИ

Изобретение относится к медицине, а именно к клинической биохимии и может быть использовано для обнаружения гиперурикемии при подагре и хронических нефритах.

Целью изобретения является ускорение . и снижение травматичности способа.

Указанная цель достигается тем, что диагностику гиперурикемии осуществляют путем определения мочевой кислоты в слезе больного и при значении мочевой кислоты в слезе свыше 120 мкмоль/л судят о наличии гиперурикемии.

Предлагаемый способ по времени занимает не более 15 мин: 2 мин на взятие слезы, 10 мин на проведение реакции (разливание реактивов 5 мин, термостатирование 5 мин), .3 мин на регистрацию показаний прибора, Способ осуществляют следующим образом.

„„ Ж„„18О2870 АЗ (57) Использование: медицина, клиническая биохимия. Сущность изобретения: к слезной жидкости добавляют реагент, состоящий из 3,5-дихлор-2-гидроксилбенэолсульфоновой кислоты, уриназы, пероксидаэы и 4-аминоантипирина, инкубируютсмесь втечение5мин притемпературе

37 С и определяют уровень мочевой кислоты путем спектрофотометрии при 520 нм и при значении этого показателя выше 120 ммоль/л судят о наличии гиперурикемии.

Положительный эффект: способ атравматичен, использование способа позволяет в течение 15 мин определить наличие гиперурикемии.

У больного глазной пипеткой берут каплю слезы (0,03 мл) после поднесения к носу ватки, смоченной 10 нашатырным спиртом. Для определения мочевой кислоты использовали специфичный, ферментативный метод. Он основан на расщеплении мочевой кислоты уриказой до аллантоина, углекислого газа, перекиси водорода с последующей индикаторной реакцией. Под действием пероксидазы из перекиси с амина-4-антипирином и 3,5дихлор-2-гидроксибензолсульфоновой кислотой образуются хромоген, соляная кислота и вода.

Опытная проба, К 0,02 мл слезы добавить 1 мл рабочего раствора. Смешать, инкубировать 5 мин при 37 С в термостате.

Измерить зкстинкцию в кювете на спектрофотометре при длине волны 520 нм против холостой пробы. Окраска стабильна 30 мин.

Рабочий раствор готовят следующим обра1802870 зом: к 25 мл 150 ммоль/л фосфатного буфе. ра, рН 7 с 3,5-дихлор-2-гидроксибензолсульфоновой кислотой (2 ммоль/л) добавляют уриказу (. 100 ед/л), пероксидазу (В 200 ед/л), 4-аминоантипирин (0,25 ммоль/л).

Холостую пробу обрабатывают также, как опытную, но вместо слезы берут 0,02 мл физиологического раствора.

Калибровочную пробу обрабатывают как опытную, но вместо слезы берут 0,02 мл стандартного (476 мкмоль!л) раствора мочевой кислоты. Измеряют при тех же условиях против холостой пробы.

Еоп

Расчет вели по формуле: А = E . n, где

К

А — количество мочевой кислоты, мкмоль/л;

Еоп — зкстинкция опытной пробы; Е» — экстинкция калибровочной пробы; n - 476 мкмоль/л.

Установлено,-что в слезе здорового человека содержится 62,9+ 5,5 мкмоль/л мочевой кислоты. Колебания у отдельных лиц были от 28 до 90 мкмоль/л.

В сыворотке крови здоровых людей содержание мочевой кислоты 351,5 + 10,9 мкмоль/и, Колебания у отдельных лиц от

245 до 418 мкмоль/л. Средний коэффициент слеза/кровь = 0,18.

У больных с гиперурикемией(при подагре, заболеваниях почек) в слезе содержится

191,6 + 22,3 мкмоль/л мочевой кислоты.

Максимум содержания мочевой кислоты у обследуемых больных составил 305 м мкмоль/л, минимум 121 мкмоль/л.

В сыворотке крови больных с гиперурикемией содержание мочевой кислоты 663,0

+47,8 мкмоль/л, Максимум в сыворотке 884, минимум 514 мкмоль/л мочевой кислоты, Средний коэффициент слеза/кровь у больных 0,29. При статистической обработке разница между содержанием мочевой кислоты в слезе здоровых людей и больных с гиперурикемией высоко достоверна (Р < 0,001).

При повышении мочевой кислоты в сле3е выше 120 мкмоль/л диагностирировали гиперури кеми ю..

Данные подтверждены клиническими и лабораторными испытаниями на 16 здоровых людях, 5 больных подагрой и 16 больных хроническим нефритом на базе нефрологического и кардиологического отделений МСЧ N 9 г. Перми с 23 июня 1989 года по 24 июля 1990 года.

Пример 1. Здоровый человек У. 42 .года.

Анализ слезы от 19 декабря 1989 г.

Мочевая кислота 69 мкмоль/л.

33 мл/ч.

Из биохимического анализа крови: белок 79,4 г/л; мочевина 25,7 ммоль/л; креатинин 0,47 ммоль/л; мочевая кислота 514 мкмоль/л.

Анализ мочи: моча мутная, реакция кислая. Белок 3,3 r/ë; эпителиальные клетки

5-7; лейкоциты 8-10; эритроциты 20-30.

Анализ слезы от 26 сентября 1989 года.

Мочевая кислота 181 мкмоль/л, Анализ крови от 19 декабря 1989 г, Мочевая кислота 324 мкмоль/л.

У обследуемого содержание мочевой кислоты в слезе и крови в норме.

Пример2. Больной Т.,46лет.

Г1оступил в нефрологическое отделение с жалобами на боли в пояснице, головную боль, боли в области первого плюснефалангового сустава, Диагноз при поступлении:

10 мочекаменная болезнь, симптоматическая гипертензия. Состояние больного удовлетворительное, кожа бледная. Границы сердца в пределах нормы, тоны сердца ритмичные. Артериальное давление

170/100. Дыхание везикулярное. Живот мягкий, безболезненный, Почки не пальпируются. Симптом Пастернацкого положителен с обеих сторон.

Из биохимического анализа крови: мо20 чевина 9,5 мкмоль/л, мочевая кислота 784 мкмоль/л.

Анализ слезы; мочевая кислота 236 мкмоль/л, что свидетельствует о наличии гиперурикемии, 25 Анализ мочи: цвет соломенножелтый, . мутная, реакция кислая. Удельный вес 1012; белок 0,33 г/л; лейкоциты 20-25; цилиндры гиалиновые 2-3; зернистые 2-4; эпителиальные клетки 7 — 8. Ураты +++.

30 Таким образом, у больного повышено в крови содержание мочевой кислоты, мочевины, в слезе повышено содержание мочевой кислоты.

Окончательный диагноз: Мочекаменная

35 болезнь, симптоматическая гипертенэия.

Подагрический артрит первого плюснефалангового сустава.

Пример 3. Больная П„27 лет, Поступила в нефрологическое отделе40 ние с жалобами на головную боль, слабость, быструю утомляемость. Состояние удовлетворительное, кожные покровы бледные, сухие. Лицо пастозное. Тоны сердца ритмичные, артериальное давление 150/90.

45 Дыхание везикулярное, живот мягкий, безболезненный.

Обилий анализ крови: эритроциты

3,1 101/л; гемоглобин 102 г/л; цветной показатель 1; лейкоциты 6,0 ° 10 /л; CGz

1802870

Составитель H. Терехина

Техред М.Моргентал Корректор M. Максимишинец

Редактор С. Кулакова

Заказ 862 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Таким образом, у больной анемия, увеличено содержание мочевины, креатинина, мочевой кислоты в крови, увеличено содержание мочевой кислоты в слезе.

Окончательный диагноз: хронический гломерулонефрит, гипертонический вариант, обострение, Хроническая почечная недостаточность 2-3 степени.

Содержание мочевой кислоты в слезе повышено у больных только при наличии гиперурикемии. При повышении мочевой кислоты в слезе свыше 120 мкмоль/л диагностируем гиперурикемию.

Предлагаемый способ диагностики гиперурикемии значительно быстрее и проще известного способа, легко переносится больными, атравматичен. Особую ценность представляет при использовании в динамике заболевания. Способ прост, надежен и доступен для использования в рядовых клиника-биохимических лабораториях.

Формула изобретения

Способ обнаружения гиперурикемии, 5 включающий определение в биологической жидкости уровня мочевой кислоты путем добавления к пробе реагента, состоящего иэ

3,5-дихлор-2-гидроксибензолсульфоновой кислоты, уриказы, пероксидаэы и 4-амино10 антипирина, инкубации смеси в течение 5 мин при 37 С с последующей спектрофотометрией при 520 нм, отличающийся тем, что, с целью ускорения и снижения травматичности способа, уровень мочевой

15 кислоты определяют в слезной жидкости и при значении этого показателя выше 120 ммоль/л судят о наличии гиперурикемии.