Штамм бактерий gluconobacter oxydans - продуцент сорбозы
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К ПАТЕНТУ
Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам (21) 5015076/13 (22) 28.11.91 (46) 15.10.93 Бюл. Na 37-38 (71) Научно — производственное объединение
"Витамины" (72) Красильникова Т.Н; Акишина Р.И.; Смирнова
Н.С.; Королев ПН.; Поморцева Н.В.; Ведерников ЕИ.;
Петрова Л Ф.; Тивиков В.И. (73) Научно-производственное объединение
Витамины" (19) ИЮ (1Ц 2001100 „1 (51) 5 C12N1 20 (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ OXYDAN5) — ПРОДУЦЕНТ СОРБОЗЫ (57) Область использования — медицина и пищевая промышленность. Штамм Yluconobacter oxydans депонирован во ВНИИантибиотиков под номером 2054, получен из штамм ВНИИА 1672 методом спонтанной мутации. Штамм имеет температурный оптимум 28 — 30 С, оптимум рН 5,5 — 6,0, имеет высокую окислитепьную активность. 1 табл èè1100 Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма — продуцента сорбозы, промежуточного продукта в синтезе аскорбиновой кислоты (витамина С), которая используется в медицине и пищевой промышленности. Известны производственные штаммы Gluconobacter oxydans 6 (коллекция ВНИИА йв 1672), К (коллекция ВНИИА KL 1671), Б (еюлекция ВНИИА hh 1901). Однако недостатком этих штаммов является высокая чувствительность к заражению фагом (известны два фага GS-1 и GS-2, выделенные при фаговой вспышке на производстве и при фаговой вспышке зто приводит к остановке производства и большим зкономическим потерям в размере 15 т сорбозы в сутки. Кроме того, эти штаммы обладают относительно невысокой окислительной активностью (образованием 1 г сорбозы 1 г сухой биомассы (СБ) в 1 л за 1 ч). Создание отечественного фонда культур — продуцентов сорбоэы, обладающих ценными для производства признаками, а именно устойчивостью к производственным фа л, w п:ся необходимым условием ; о роизводствэ и представт обо;. ..Ä«yx; народно-хозяйственную apгу пп,; ях промышленных микроор.:., зм и ССР Фэгоустойчивых штаммов (1 г..., . с:е охудэпэ нет., е.lb",: изобретения является новый штэ: м С:;conebacter oxydans-65 — продуцент сообозы, от л и ч а ю щи йс я более высокой окислительной активностью (образоээнием сорбозы 1 г сукой биомассы (СБ) в i и з 1 ч), устойчивый к производственным бактериофагам GS-1 и GS-2 и расширяющий колпак! ию производственных штдммов., редлагэемый штамм получен из производс; венного фагочувствитепьного штамма 1672 методом спонтанной мутации и много;;ра1ного отбора на агариэовэнных средах с ссрбитом в качестве источника углерода и дрожжевой водой в качестве источника азота и витаминов. Каждый раз проводился отбор мутантов по продуктивности по сорбозе и по фагорезистентности. :3 таблице показана чувствительность к ороизводстг" оным фэгэiл штэммов G. оху )э; в и х ок ;спительная экгивность. :апти, эпьные условия хранения штамма. 1 .. талм хоанится на агаризовэнной среде в пробир ах при 4 С в течение 1 мес, затем его пересеивают нэ свежие питательны. среды Штамм также можно хранить в 55 лиофилиэированном состоянии в течение 23 лет без потери активности. Gluconobacter oxydans штамм 65-ВНИВИ вЂ” продуцент сорбозы хранится в коллекции культур микроорганизмов Всесоюзного научно-исследовательского института антибиотиков под номером 2054. Культурально-морфологическая характеристика. На среде с сорбитом и дрожжевой водой колонии мелкие. диаметром 0,5-1,0 мм, однородные, круглые, выпуклые, гладкие, серовато-бежеватые, края ровные. Рост штриха на 2-е сутки умеренный, поверхность шероховатая, матовая. блеск тусклый. На среде с сорбитом ферментолизатом колонии более крупные, 1 — 2 в диметре, круглые, выпуклые, блестящие, беловато-бежеватые, край ровный. Структура зернистая. На среде с глюкозой колонии очень мелкие 0,5 мм в диаметре и менее, круглые блестящие, выпуклые, однородные, бежевато-сероватые. На сусло-агаре колонии мелкие, серовато-беловатые. круглые, блестящие, структура зернистая, Клетки короткие палочки, 0,5 — 0,8 х 1,02.0 мкм, встречаются поодиночке, парами ипи коро кими цепочками. В старых культурах могут быть инвопюционные формы. Эндоспоры не образуются. Грамотрицательные. Строгие аэробус, Физиолого-биохимические свойства. В качестве источников углерода используют глюкозу, этаноп, глицерин, сорбит,маннит. Не использует уксусную кислоту. лактат, лактозу, крахмал. В качестве источников азота и витаминов использует дрожжевую воду, дрожжевой экстракт, дрожжевой автолиэат. кукурузный экстракт. Иэ минеральных источников азота может использовать на синтетических средах: сернокислый аммоний, азотнокислый аммоний. Нуждается в витаминах группы В. Штамм может развиваться при 20-42"С и в пределах рН 3.2-7.5, Температурный оптимум 28 — ЗОО. Оптимум рН 5,5-6,0, Фагоустойчивость, Штамм устойчив к производственным бактериофагам; GS-1 и GS-2. В присутствии большого количества (10 чэст/мп) любого иэ этих фагов или их 9 смеси штамм нормально развивается и сохраняет окиспительную активность — 9,0 r сорбозы/г СБ п.ч, снижает титр фага эа 19 ч в 10 рэз, э ори повторном пассировании на ферментационной среде фаг практически исчезает Пример использования штамма для получения сорбозы. 2001100 П р и м е ч а н и е. (+) — Негативные колонии образуются. (-) — Негативные колонии не образуются, Составитель Т.Красильникова Редактор В.Трубченко Техред М.Моргентал Корректор Н,Кешеля Заказ 3111 Тираж Подписное НПО "Поиск" Роспатента 113035. Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород. ул.Гагарина, 101 Культ:, ру штамма G. o ydans 65 выращивают при 28 С е течение суток на агаризованной среде следующего состава: сорбит 10,(,, дрожжевая вода 1 (по сухим веществам), агар 2 Р. рН 5,5, Полученную культуру переносят смывом в колбы емкостью 750 мл с 50 мл ферментационной среды следующего состава: сорбит 10, ферментолизат бесклеточный 0,5, вода водопроводная, рН 6,0. После культивирования в течение 19 ч при 30 посевной материал (инокулят) в количестве 10 переносят в колбы объемом 750 мл с 50 мл ферментационной среды следующего состава: сорбит 22 . ферментолиэат бесклеточный 0.2 . рН 6,0. Ферментацию проводят в течение 43 ч на качалке при 220 об/мин. Определение сорбозы проводили поляриметрическим методом. Относительная ошибка определения на уровне значимости 0.95 составляла 2,5 ф,. Степень конверсии (процент трансформации сорбита в сорбоФормула изобретения 111тлмм ьАктеРи11 61.1:сп4т111лст1:.к Оку()л еБ ПРОДУ! И. 1ГГ СОГ1)О:11 1 эу) составила 987ь при окислительной акти..ности культуры 9,0 г сорбозы/г СБ.л.ч. Таким образом, полученный штам G. oxydans 65. обладающий большей окисли5 тельной активностью и фагоустойчивостью к фагам GS-1 и GS-2. расширяет коллекцию производственных штаммов, может обеспечить устойчивое беспрерывное промышленное производство сорбоэы, Штамм прошел 10 опытную проверку на опытном производстве синтетических витаминов, (56) Биосинтез убихинона-10 и окислительная активность культуры G,Oxydans. Татаринова Н.Ю, и др. — Микро15 биология, т. 56, вып. 3, с. 436-440, 1987 Отчет о научно-исследовательской работе "Оказание научно-технической помощи в стабилизации действующего производства сорбозы и внедрение УНФ20 100, УНФ-2000", М 01880047023, 1988. Характеристика фагов. G,Oxydans. Григорьева T.М. и др. Биотехнология, М1, с. 3-5, 1991. Штамм бактерий Gluconobacter oxydans ВНИИА - 2054 - продуцент сорбозы.
