Способ определения объема крови в биологической ткани

 

Использование: медицина, нормальная и патологическая физиология сердечно-сосудистой системы. Цель изобретения: повышение точности способа. Сущность изобретения: одновременно с объемом эритроцитов определяют объем плазмы в ткани путем предварительного внутривенного введения в организм альбумина, меченного йодом - 125 с активностью 30 - 60 кБК/100 г массы тела, с последующей регистрацией уровня активности препарата в ткани и плазме крови.

Изобретение относится к медицине, а именно к нормальной и патологической физиологии сердечно-сосудистой системы, и может быть использовано для характеристики кровенаполнения ткани различных органов.

Известен способ определения объема крови в биологической ткани, основанный на измерении суммарной радиоактивности органов животных, забитых после внутривенного введения меченных компонентов крови (альбумина - ¹³¹J и эритроцитов - ⁵¹Cr донора). При этом предлагается соблюдать равенство отношения активности меченных эритроцитов к суммарной активности индикаторной смеси показателю гематокрита крови из крупных сосудов.

Известный способ имеет существенные недостатки. Так, радиометрическое разделение меченных компонентов крови невозможно ввиду их близкого спектра гамма-излучения. Для правильного же составления индикаторной смеси необходимо учитывать состояние органного гематокрита, показатели которого определить очень сложно. При ориентации на системный гематокрит, который существенно отличается от органного, искажается в той или иной степени величина пропорции отдельных компонентов радиоактивного индикатора. Кроме того, при внутривенном введении гетерологичных эритроцитов возможны известные гемотрансфузионные осложнения, сопровождающиеся различными внутриорганными сосудистыми реакциями. В конечном итоге, заметно снижается точность измерения объема крови в биологической ткани.

Цель изобретения - повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что при последовательном выполнении радионуклидного и биохимического этапов в способе удается сравнительно точно определить объем плазмы и эритроцитов, а также их суммарный показатель в биологической ткани. При этом отпадает необходимость оценки органного гематокрита и введения в сосудистое русло гетерогенных эритроцитов.

Способ осуществляют следующим образом.

Наркотизированному животному через катетер в наружную яремную вену вводят бычий сывороточный альбумин, меченный ¹²⁵J, в концентрации 2 мг/мл. Объем вводимого альбумина составляет 0,5-1,0 мл/100 г массы животного, что соответствует активности - 30-60 кБк/100 г массы тела.

Через 3 мин животное забивают, труп промораживают при -20^оС в течение 3 ч. Затем выделяют кусочек органа, взвешивают и помещают в сухую пробирку.

Одновременно извлекают кровь, стабилизируют 5% -ным раствором цитрата натрия и центрифугируют при 1000 об/мин в течение 15 мин. Плазму крови отсасывают в сухую пробирку.

Радиоактивность образца ткани и 0,1 мл плазмы крови измеряют на сцинтилляционном гамма-анализаторе.

В последующем тот же кусочек органа гомогенизируют в дистиллированной воде в соотношении 1: 10. Гомогенат ткани центрифугируют при 6000 об/мин в течение 15 мин.

К 0,1 мл эритроцитов выделенной крови добавляют 4,0 мл дистиллированной воды. Гемолизат эритроцитов центрифугируют при 6000 об/мин в течение 15 мин.

В три пробирки вносят по 1,0 мл дистиллированной воды, 1,0 мл окрашивающего состава (70,0-80,0 мл 20% -ного водного раствора амидопирина, 70,0-80,0 мл 5% -ного водного раствора анилина сернокислого и 96о этиловый спирт до 500,0 мл) и 0,8 мл 3% -ной перекиси водорода. В первую пробирку добавляют 0,2 мл супернатанта ткани, во вторую - 0,2 мл супернатанта эритроцитов крови, а в третью - 0,2 мл дистиллированной воды (контроль на реактивы). Содержимое пробирок перемешивают и центрифугируют при 6000 об/мин в течение 5 мин.

Через 15 мин после прибавления красителя измеряют оптическую плотность проб при длине волны 540 нм. Длина оптического пути кювет - 10 мм.

Объем плазмы (V₁) в ткани (в мкл/г) рассчитывают по формуле: V₁= , где А₁ - активность пробы ткани (имп/мин), A₂ - активность пробы плазмы крови (имп/мин), Р - масса взятой ткани (мг), 100 - объем плазмы крови в пробе (мкл), 1000 - коэффициент пересчета из мг в г.

Объем эритроцитов (V₂) в ткани (мкл/г) рассчитывают по формуле: V₂= , где Е₁ - экстинкция пробы ткани, Е₂ - экстинкция пробы эритроцитов крови, Е - экстинкция пробы контроля на реактивы, 5 - объем эритроцитов крови в пробе (мкл),
2 - масса ткани в пробе (мг),
1000 - коэффициент пересчета из мг в г.

Объем крови (V₀) в ткани (мкл/г) определяют как
V₀ = V₁ + V₂
П р и м е р 1. Белой мыши массой 25 г через катетер в наружную яремную вену вводили бычий сывороточный альбумин-¹²⁵ J (2 мг/мл) в объеме 0,12 мл, что соответствует активности пробы - 30 кБк/100 г массы тела.

Через 3 мин животное забивали передозировкой эфирного наркоза. После промораживания трупа в морозильной камере холодильника при -20^оС в течение 3 ч, для анализа брали кусочки следующих органов: печени (массой 93 мг), селезенки (массой 55 мг) и больших полушарий мозга (массой 67 мг).

Обработку ткани и крови осуществляли по предлагаемому способу. Состав красителя: 70,0 мл 20% -ного водного раствора амидопирина, 70,0 мл 5% -ного водного раствора анилина сернокислого и 96^о этиловый спирт до 500,0 мл.

Результаты радиометрии проб, выполненной на сцинтилляционном гамма-анализаторе "Гамма-12": - печень - 1993 имп/мин, - селезенка - 582 имп/мин, - большие полушария мозга - 133 имп/мин, - плазма крови -12655 имп/мин.

Полученные данные вносили в формулу для расчета и вычисляли объем плазмы, который составлял: - в печени - 169,3 мкл/г, - в селезенке - 83,6 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 15,7 мкл/г.

Результаты измерения экстинкции проб на спектрофотометре СФ - 16: - печень - 0,301, - селезенка - 0,219, - большие полушария мозга - 0,084, - эритроциты крови - 2,180, - контроль - 0,035.

Согласно приведенной формулы, объем эритроцитов составил: - в печени - 310, мкл/г, - в селезенке - 214,5 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 57,1 мкл/г.

В итоге, объем крови оказался равным: - в печени - 479,3 мкл/г, - в селезенке - 298,1 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 72,8 мкл/г.

П р и м е р 2. Белой мыши массой 35 г через катетер в наружную яремную вену вводили бычий сывороточный альбумин-¹²⁵J (2 мг/мл) в объеме 0,35 мл, что соответствует активности пробы - 60 кБк/100 г массы тела.

Через 3 мин животное забивали передозировкой эфирного наркоза. После промораживания трупа в морозильной камере холодильника при -20^оС в течение 3 ч для анализа взяты кусочки печени (массой 70 мг), селезенки (массой 63 мг) и больших полушарий мозга (массой 58 мг).

Обработку биологической ткани и крови проводили по предлагаемому способу. Состав красителя: 80,0 мл 20% -ного водного раствора амидопирина, 80,0 мл 5% -ного водного раствора анилина сернокислого и 96о этиловый спирт до 500,0 мл. Все последующие операции аналогичны примеру 1.

Результаты радиометрии проб: - печень - 1647 имп/мин, - селезенка - 555 имп/мин, - большие полушария мозга - 132 имп/мин, - плазма крови - 11725 имп/мин.

Объем плазмы составил: - в печени - 200,7 мкл/г, - в селезенке - 75,1 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 19,4 мкл/г.

Результаты измерения экстинкции проб: - печень - 0,263, - селезенка - 0,228, - большие полушария мозга - 0,082. - эритроциты крови - 2,065, - контроль - 0,028.

Объем эритроцитов составил: - в печени - 288,4 мкл/г, - в селезенке - 245,5 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 66,3 мкл/г.

В итоге, объем крови оказался равным: - в печени - 489,1 мкл/г, - в селезенке - 320,6 мкл/г, - в больших полушариях мозга - 85,7 мкл/г.

Таким образом, предлагаемый способ хорошо воспроизводится, не сложен в исполнении и, в отличие от известного, позволяет получить более объективную информацию о состоянии органного кровенаполнения в условиях нормы и патологии, при действии различных вазоактивных препаратов.

Формула изобретения

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОБЪЕМА КРОВИ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ТКАНИ, включающий измерение объема плазмы крови и эритроцитов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, регистрируют радиоактивность ткани и плазмы крови после внутривенного введения альбумина, меченного йодом-125 с активностью 30 - 60 кБк/100 г массы тела, а объем плазмы V₁ в ткани рассчитывают по формуле
V₁= ,
где A₁ - активность пробы ткани;
A₂ - активность пробы плазмы крови;
P - масса взятой ткани;
K - постоянный коэффициент,
затем регистрируют оптическую плотность супернатантов гемолизата эритроцитов крови и гомогената ткани, окрашенных составом, содержащим амидопирин, анилин сернокислый и этиловый спирт при следующем соотношении компонентов, мас. % :
20% -ный водный раствор амидопирина 14 - 16
5% -ный водный раствор анилина сернокислого 14 - 16
96-градусный этиловый спирт Остальное
а объем эритроцитов V₂ в ткани рассчитывают по формуле
V₂± × K,
где E₁ - экстинкция пробы ткани;
E₂ - экстинкция пробы эритроцитов крови;
K - постоянный коэффициент.