Способ определения тироксина в слюне

 

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано в клинической лаборатории. Целью изобретения является упрощение способа и расширение его универсальности за счет использования любой тест-системы доя определения тироксина . Слюну подвергают сублимационной сушке при (-25) - (Зр)С до остаточной влажности 0,5%. Сухой остаток растворяют в воде и проводят радириммунрлогический анализ с использованием стандартного набора для определения тироксина в крови.

((9) (! !) СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (s!)s G 01 N .33/534

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ .ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4762841/14 (22) 22.11,89 (46) 07.04.92. Бюл. N 13 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) 8.А,Чуйко, И.Э,Речкиман, Л.Я.Черный, С.Л,Черная. В.Н.Горбенко и И.М.Бондарева (53) 615.475 (088.8) (56) Славнов В.H. Радиоиммунологический анализ в клинической зндокринологии. Киев: Здоровье, 1988, с. 11.

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано в клинике и научно-исследовательских лабораториях.

Целью изобретения является упрощение способа и расширение его универсальности за счет использования любой тест-системы для определения пироксина.:

Для этого в способе определения тироксина в слюне, включающем обработку пробы и ее радиоиммунологический анализ, слюну обрабатывают путем сублимационной сушки до остаточной влажности

0,4-0,6 .

Способ осуществляют следующим образом.

Слюну объемом не менее 4 мл помещают во флаконы и подвергают сублимационной сушке при (-25) —.(30 С) до остаточной влажности 0,4--0,67. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл воды. Определение Т4 проводят при помощи стандартного набора реактивов для определения тироксина в крови. Рассчитывают по формуле

2 . (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИРОКСИНА

В СЛЮНЕ (57) Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано в кли- нической лаборатории, Целью изобретения является упрощение способа и расширение

его универсальности за счет использования любой тест-системы .pim определения тироксина..Слюну подвергают сублимационной сушке при -25) —.(30)0С до остаточной влажности 0,5 . Сухой остаток растворяют в воде и проводят радиоиммунологический анализ с использованием.стандартйого набора для определения тироксина в крови. (Т ) Ч2 (Т4)1

Ч! где P4)l — содержание тироксина, найденное из калибровочного графика;

Ч2 — объем, в котором растворен сухой остаток после сублимации; .

V> — объем исследуемой слюны.

Применяемая лиофильная сушка позволяет сократить время подготовки к определению до 8-10 ч по сравнению с 10. неделями в прототипе. Кроме того, определение тироксина в сконцентрированной слюне становится доступным с использованием стандартных наборов.

Сушка проводится до остаточной влажности 0,4 — 0.6 7. . Аппаратура для сублимационой сушки не позволяет провести упаривание до требуемого объема пробы с точностью. необходимой для радиоиммунологического анализа. Поэтому образец высушивается до сухого остатка.

1725128

8 биологических жидкостях тироксин не устойчив, образцы могут храниться не более 2 недель при -20 C.

Проведенные исследования показывают, что в данном способе продолжительность хранения проб может быть существенно увеличена и сравнима с таковой для коммерческих препэратов тироксина (L-тироксин 3 r срок хранения), не требуя для сохранности низких температур. Эти факторы позволяют производить накопление материала при массовых обследованиях в полевых и экспедиционных условиях, где нет специализированных изотопных лабораторий.

П р и и е р. 6 мл слюны, собранной иэ устья выводного протока околоушной железы с помощью специального устройства по. мещали в стеклянные флаконы обьемом 45

«100 мл, которые устанавливали в камеры сублимационной сушки К$ — 6 для плазмы крови. Сублимационную сушку проводили в вакууме в интервале температур. (-25)— (30) С до остаточной влажности 0,5 мас. .

Сухой остаток растворяли в 0,5 мл воды.

Определение тироксина проводили с применением набора РИО-Т вЂ” ПГ института биоорганической химии АН БССР следующим образом.

Из растворенного в воде сухого остатка отбирали по 0,25 мл и вносили в аналитические пробирки, входящие в комплект набора РИО-Т4 - ПГ. Приливали по 0,.5 мл раствора антисыворотки, туда же добавляли

0,1 мл раствора 1251-тироксина и оставляли на 1 ч при комнатной температуре. После этого в пробирки приливали 0,1 мл раствора полиэтиленгликоля и тщательно перемешивали. Пробирки помещали в центрифугу с горизонтальным ротором и центрифугировали в течение 15 мин при ускорении 150002000. Надосадочную жидкость сливали .в пробирку и помещали в гамма-счетчик для измерения количества импульсов в каждой пробирке в течение 1 мин. По калибровочному графикуопределяли концентрациютироксина.

Определение тироскина в слюне проводили у здоровых людей и больных гипертиреоэом. Параллельно определяли известным способом.

Результаты приведены в табл. 1.

10

35 для исследования не поддается длительному хранению, а должна использоваться сразу после забора;

45

Из табл. 1 видно, что в обоих способах значения содержания тироксина в слюне согласуются, являясь величинами одного порядка.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет определить тироксин в слюне с такойжеточностью, какиизвестный, напри этом он намного проще, что требует меньше затрат труда и времени. Так, в прототипе на приготовление антигена и иммунизацию кроликов требуется 8-10 недель, Процесс же сублимации в данном способе длится

8-10 ч.

В табл. 2 представлена зависимость открытия тироксина из слюны от остаточной влажности.

Из табл. 2 видно, что процент открытия гормона максимальный при остаточной влажности 0,3-0,6, но при 0,3 влажности ухудшается растворимость осадка, поэтому в качестве оптимального выбран диапазон 0,4-0,6 влажности.

При остаточной влажности выше 0,6 наблюдается уменьшение открытия гормона из слюны, что снижает. точность определения.

Положительный эффект изобретения достигается за счет использования сублимационной сушки для сокращения времени анализа и удлинения срока хранения материала, в известном способе это не достижимо. В прототипе создается новая тест-система, требующая на ее изготовление длительного времени, слюна

Форрмула изобретения

Способ определения тироксина в слю- не путем добавления специфической антисыворотки к исследуемой пробе с последующей регистрацией реакции антиген-антитело по включению радиоактивной метки, о тл и ч а ю щи и с я тем, что, с целью упрощения способа и расширения его унйверсальности за счет использования любой тест-системы для определения тироксина, исследуемый материал подвергают сублимационной сушке до остаточной влажности

0,4-0,6, 1725.1 28

Таблица 1

Таблица 2

Составитель Il. Áîíàðöåâ

Редактор М.Стрельникова Техред М.Моргентал Корректор ; О; КундриК

Заказ 1172 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-36, Раушская наб., 4/S

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101