Препарат для местного лечения поверхностных изменений кожи и слизистой оболочки и поверхностных инфекций кожи и слизистой оболочки и способ его получения

 

Изобретение относится к медицине и касается препарата для местного лечения поверхностных изменений на коже и слизистой оболочке, а также для лечения инфекций кожи и слизистой оболочки на основе реакции взаимодействия между раствором 1 - 5,5 М азотной кислоты с 45 - 170 ммолями первичного C₁ - C₅-алканола на 1 л азотной кислоты, а также способ получения препарата. Препарат состоит из 1 - 5,5 М азотной кислоты, максимально на 170 ммолей алкановой кислоты C₁ - C₅ на 1 л раствора и продуктов восстановления нитратов в концентрации, которая соответствует 0,1 - 6 мг нитрита на 1 мл раствора. Препарат отличается хорошей эффективностью и минимальным риском возникновения побочных явлений. 2 с. и 13 з.п.ф-лы, 9 табл., 5 ил.

Изобретение относится к препарату для лечения поверхностных изменений кожи и слизистой оболочки, в частности больших и малых поверхностных изменений на коже и слизистой оболочке доброкачественного характера, а также поверхностных инфекций кожи и слизистой оболочки, и способу получения этого препарата.

Уже в течение столетий для "выжигания" различных дефектов на коже, бородавок и тому подобного применялись вытравливающие препараты, в частности сильные кислоты. При этом более или менее специфическое место в арсенале лекарственных средств дерматологов занимали, прежде всего, салициловая кислота, концентрированные формы азотной кислоты и определенные галогенные уксусные кислоты, в то время как соляная кислота применялась редко. Обработка вытравливающими препаратами является в основном безболезненной и оставляет, как известно, более или менее некрасивые рубцы.

Для устранения бородавок предлагались, далее, молочная кислота, щавелевая кислота и уксусная кислота. Однако кератолитическое воздействие этих кислот невелико, поэтому они почти всегда используются в комбинации с салициловой кислотой (Выкладка ФРГ 1266448).

С другой стороны, и в 19 столетии для устранения бородавок и других дефектов кожи предлагались различные соли металлов, в том числе соли меди, как, например, ацетат или сульфат, соли свинца в комбинации с сульфатом цинка, меди вместе с уксусом и далее соли сурьмы, мышьяка, хрома, ртути, серебра, цинка и кадмия. Из всех этих солей значение приобрел хлорид цинка в комбинации с трихлоруксусной кислотой - метод Моза - для лечения рака кожи.

В Европейском патенте EP-A-26532 для локального лечения поверхностных изменений кожи и слизистой оболочки рекомендуется применение 6 - 10 М водного раствора азотной кислоты, содержащего нитрит металла или азотную кислоту в количестве, которое соответствует 0,01 - 5 мг, преимущественно 0,1 - 0,5 мг нитрита на миллилитр раствора. Как сообщается в Европейском патенте EP-A-26532, такие препараты - в соответствии с окраской кожи - дают такую же быструю химическую реакцию, как концентрированная азотная кислота, но без сильного вытравляющего действия, оказываемого этой или другой сильной кислотой, которое охватывает все, без разбора, ткани. Под воздействием этих препаратов интегументальные протеины денатурируются в нужном положении, а анатомическая структура фиксируется интравитально без повреждений (мумифицирование).

Для состава и действия ранее известных препаратов особое преимущество состояло в том, что препараты изготавливались путем добавки способных к окислению органических карбоновых кислот в азотную кислоту или же в любом случае путем добавки к препаратам таких способных к окислению органических карбоновых кислот. Способные к окислению карбоновые кислоты, такие, как щавелевая кислота, молочная кислота, гликолевая кислота, глиоксиловая кислота и им подобные, образуют вместе с азотной кислотой каскад продуктов превращения, в частности продукты восстановления нитратов, такие, как нитрозные газы и азотную кислоту, и дальше продукты конденсации, такие как производные О-нитрила и О-нитрозила. Препараты, полученные по этой оксидативной методике, обнаруживают, в частности, улучшенную активность в течение длительного промежутка времени. Однако неизвестно, какие продукты превращения несут первичную ответственность за клинически необходимые свойства, причем активность теряется, если содержание продуктов превращения, измеряемых в качестве нитритов, слишком сильно падает.

Превращение способных к окислению органических карбоновых кислот с азотной кислотой 6 - 10 М осуществляется с образованием нитрозных газов, двуокиси углерода и т.д. В соответствии с Европейским патентом EP-A-26532 поэтому важно, что препараты, изготавливаемые по этой методике, не закрываются герметично, а хранятся в свободно закрываемом сосуде. Для этой цели Европейский патент EP-A-26532 рекомендует использование смеси из различных быстро оксидируемых карбоновых кислот, например использование смеси спиртовой виноградной кислоты, молочной кислоты и щавелевой кислоты для того, чтобы компенсировать уменьшение содержания нитрита, которое может наступить вследствие длительного хранения или открывания сосуда. Практика в любом случае показывает, что при комнатной температуре реакция оксидируемых карбоновых кислот, необходимая для образования нитрита, происходит слишком медленно.

Соответствующие препараты продаются заявителем под названием Солкодерм и Солкогин и хорошо зарекомендовали себя на практике, поскольку они имеют достаточную концентрацию нитрата.

Однако известные до сих пор препараты имеют недостаток, состоящий в том, что скорость реакции способных к окислению карбоновых кислот сильно зависит от температуры. Вследствие этого концентрация нитрита может иметь значительные колебания в зависимости от температуры и времени хранения. Достаточная воспроизводимость в части состава и действия препаратов гарантирована только в том случае, если точно соблюдаются рекомендуемая температура хранения и указанный срок годности. В противном случае концентрация нитрита может при определенных обстоятельствах уменьшиться до такого состояния, когда препараты становятся недейственными. Наблюдения показали, что такие ставшие недействующими препараты представляют собой повышенную опасность своими побочными явлениями и могут привести, например, к изъявлениям на здоровой коже.

Было обнаружено, что одинаково хорошая и репродуцируемая действенность, без недостатков, которыми обладают известные препараты, может быть достигнута с помощью нового препарата, который позволяет ошеломляющим образом достичь дальнейшего уменьшения концентрации азотной кислоты. Новый препарат создает к тому же возможность очень простого изготовления из 1 - 5,5 М водной азотной кислоты и первичного C₁ - C₅-алканола в количестве 45 - 170 ммоль на 1 л азотной кислоты, а также упрощения состава. Последнее обстоятельство имеет своим преимуществом, что препараты, которые состоят из многих действующих субстанций, в целом, признаются в современной фармакологии.

Препарат в соответствии с изобретением для локального лечения изменений, возникших на поверхности кожи и слизистой оболочки, состоит из 1 - 5,5 М водного раствора азотной кислоты, продуктов восстановления нитратов в концентрации, которая соответствует 0,1 - 6 мг нитрита на 1 мл раствора, и алкановой кислоты C₁ - C₅ в концентрации максимально 170 ммоль на 1 л раствора. Препараты согласно изобретению содержат в оснвном по меньшей мере около 5 ммоль алкановой кислоты C₁ - C₅, например 45 - 170 ммоль алкановой кислоты C₁ - C₅ на 1 л раствора. Как правило, предпочтение отдается препаратам, которые содержат по меньшей мере около 9 и максимально около 90 ммоль алкановой кислоты C₁ - C₅ на 1 л раствора.

В рамках настоящего изобретения данные по концентрации нитрита относятся соответственно к значениям, которые были получены по методике, описанной Н. Г. Бунтоном, Н. Т.Кросби и С. Дж. Паттерсоном в (Analyst) Аналисте 94, 585, 1969, путем взаимодействия сульфаниловой кислоты и нафтил-1-амина, а также путем фотометрического определения. При этом методе другие продукты восстановления нитратов, присутствующие в растворе, такие, как нитрозные газы, переводятся в нитрит и также подлежат учету.

Таким образом, указанные концентрации нитрита означают концентрацию нитрита, эквивалентную общей концентрации продуктов восстановления нитрата.

Новый препарат в соответствии с изобретением может изготавливаться очень просто: 1 - 5,5 М водный раствор азотной кислоты вводят в реакцию с первичным алканолом в количестве от 45 до 170 ммоль на 1 л азотной кислоты. Был обнаружен ошеломляющий эффект, состоящий в том, что первичные алканолы C₁ - C₅ в водном растворе азотной кислоты уже при комнатной температуре быстро и полностью вступают в реакцию и переводятся при этом в алкановые кислоты C₁ - C₅ и двуокись углерода, при одновременном образовании действенного каскада продуктов восстановления нитратов. Реакция обмена может происходить преимущественно при температуре 20 - 60^oC.

Преимущественно используется алканол C₂ - C₅, например этанол и 1-пропанол. Особенно предпочтительным является этанол, который уже при обычном перемешивании с азотной кислотой при комнатной температуре может полностью вступать в реакцию с азотной кислотой и быть переведен при этом в уксусную кислоту, действующую кератолитически (а также частично в двуокись углерода). Алкановая кислота, присутствующая в препарате по изобретению, является при этом преимущественно алкановой кислотой C₂ - C₅, в частности уксусной кислотой.

На чертежах графически представлены результаты, полученные в ряде опытов с препаратами по изобретению и с препаратами сравнения: на фиг. 1 дается графическое изображение концентрации нитритов известного ранее препарата Солкодерм в зависимости от температуры и времени хранения. Для определения этой зависимости препарат, имеющийся в продаже, который содержал в исходной смеси 625,2 мг 65%-ной азотной кислоты, 41,5 мг 98%-ной уксусной кислоты, 57,4 мг дигидрата щавелевой кислоты, 4,5 мг молочной кислоты и 48 г нитрат-тригидрата меди (II) на 1 мл раствора, хранился в герметично закупоренных стеклянных ампулах при различных температурах в течение нескольких месяцев, через регулярные промежутки времени заменялась концентрация нитрита. Как показывают результаты, представленные на фиг. 1, концентрация нитрита имеет значительные колебания в зависимости от температуры, что приводит к осложнениям в его использовании. В частности, при низкой температуре хранения 5^oC наблюдается снижение содержания нитрита и, таким образом, наносится ущерб его эффективности. С другой стороны, наблюдается значительное увеличение концентрации нитрита при температуре 30 - 45^oC, что может отразиться на сроке службы вследствие ускоренной реакции обмена карбоновых кислот.

В противоположность известному ранее препарату препараты, согласно изобретению, имеют определенный и воспроизводимый состав вследствие быстрой и полной реакции обмена, вследствие чего могут быть исключены неопределенности в части эффективности.

Хранение препаратов в открытом состоянии приводит, однако, как в случае препаратов по изобретению, так и в случае известных препаратов к значительному уменьшению содержания продуктов восстановления нитрата, вследствие отдачи нитрозных газов. Поэтому препараты по изобретению хранятся преимущественно в герметично закупоренных сосудах, например в стеклянных ампулах, или же изготавливаются незадолго до их использования.

Препараты, согласно изобретению, которые существуют в плотно укупоренном сосуде или же преимущественно в закрытых ампулах, имеют постоянный и в основном зависимый от температуры состав и эффективность, они могут храниться практически неограниченно долго. Хранение в условиях герметичной упаковки существенно облегчается к тому же за счет того, что в отличие от известных препаратов при хранении в течение длительного времени не происходит образование двуокиси углерода и нитрозных газов. Поэтому в случае препаратов по изобретению практически исключается опасность возникновения при хранении слишком высоких давлений, которые в экстремальных случаях могут привести к разрыву ампул или же к взрывоподобному выходу раствора при их открывании.

Изготовление герметично закрытых препаратов может происходить в основном за счет того, что в соответствии с вышеописанным препарат сначала изготавливают, а затем герметично упаковывают в соответствующем сосуде. Преимущество состоит в том, что сначала смешивают 1 - 5,5 М азотной кислоты и первичный алканол C₁ - C₅ при температуре ниже температуры вступления в реакцию, преимущественно по меньшей мере при температуре ниже температуры вступления в реакцию на 10^oC (например, при температуре около 0^oC), смесь герметично упаковывают в соответствующий сосуд, а затем нагревают до температуры реакции или до более высокой температуры. Если используется этанол, то происходит смешивание компонентов преимущественно при максимальной температуре 10^oC, например при 0 - 5^oC, а последующая реакция происходит при температуре преимущественно 20 - 40^oC.

Концентрация продуктов восстановления нитрата образованным с помощью реакции первичного алканола C₁ - C₅ с азотной кислотой в исследуемой области существенно зависит от концентрации азотной кислоты, как это проиллюстрировано на примерах 1 и 2. Она зависит в значительной степени от использованной концентрации алканола, причем была найдена не совсем линейная зависимость между концентрацией алканола и замененной концентрацией нитрита. Как представлено на фиг. 2 и в примерах 1 и 2 для этанола, в случае, когда концентрация этанола составляет менее 45 ммоль/л, образуются лишь незначительные количества продуктов восстановления нитрата, а замененные концентрации нитрита в основном значительно ниже концентрации 0,1 мг/мл, которая отражает начало терапевтического воздействия. Однако при дальнейшем увеличении концентрации этанола происходит резкое увеличение замеренной концентрации нитрита. Причина этого эффекта неизвестна. Однако он открывает возможность получения эффективных препаратов через взаимодействие алканола C₁ - C₅ с азотной кислотой, если алканол будет использоваться в концентрации минимально 45 ммоль/л, кроме того, он дает также возможность для перенасыщения раствора нитрозными газами в случае, если концентрация алканола будет повышаться и дальше.

Препараты согласно изобретению в тесте с волосами, описанном в примере 3, оказывают тот же эффект, как и препарат, приготовленный аналогичным образом с помощью 6,4 М азотной кислоты, равно как и препарат, существующий в продаже, - Солкодерм. Во всех случаях происходит быстрое окрашивание в желтый цвет и подавление разложения волос, в то время как недостаточное количество добавляемого алканола или чистая азотная кислота привели бы к разложению волос. Поэтому настоящее изобретение, в противоположность описанному в Европейском патенте EP-A-26 532, дает возможность ошеломляющим образом произвести уменьшение концентрации азотной кислоты меньше 6 моль/л при сохранении эффективности.

Для более точного определения могущих возникнуть различий в эффективности препаратов был разработан Пепсин-тест, описанный в примере 4, в качестве модели первой реакции мумифицирования. Фиг. 3 показывает оптическую плотность (OD), замеренную для проб 1 - 6 методом Пепсин-теста, в зависимости от времени. "Подъем b" кривых был использован в качестве меры для модели эффективности (быстроты изменения цвета). Фиг. 4 изображает зависимость "подъема b" в Пепсин-тесте от использованной концентрации этанола в случае использования 5,4 и 6,4 М азотной кислоты. На фиг. 5 показана зависимость "подъема b" в Пепсин-тесте от концентрации азотной кислоты при использовании постоянной концентрации этанола, равной 60 ммоль/л (0,35 об.%).

Препараты, изготовленные при использовании концентрации алканола, равной как минимум 45 ммоль/л, обнаруживают в Пепсин-тесте достаточную активность. Ошеломляющие результаты состоят в том, что скорость изменения цвета в Пепсин-тесте увеличивается как с увеличением концентрации азотной кислоты, так и с увеличением концентрации алканола. Из этого следует, что замедление изменения цвета, обусловленное уменьшением концентрации азотной кислоты, при желании может быть компенсировано за счет повышения концентрации алканола - которое ведет к соответствующему повышению концентрации продуктов воспроизводства нитратов (сравни фиг. 2).

Способ изготовления в соответствии с изобретением приводит к полному химическому превращению алканолов, причем образуются соответствующие алкановые кислоты и (в частности при использовании метанола и этанола) частично также окись углерода.

Алканолы используются целесообразным образом с максимальной концентрацией около 170 ммоль/л, преимущественно с максимальной концентрацией 130 ммоль/л. В результате этого можно избежать очень высокого давления, если препараты изготавливаются с использованием герметичной упаковки. В части результатов в Пепсин-тесте используется, как правило, преимущественно концентрация алканола 60 - 90 ммоль/л.

В соответствии с этим препараты, согласно изобретению, содержит алкановую кислоту C₁ - C₅ с концентрацией максимально 170 ммоль/л, преимущественно 9 - 90 ммоль/л, а концентрация продуктов восстановления нитратов, измеренная как нитрит, составляет целесообразным образом около 0,1 - 6, преимущественно около 1 - 5, в частности преимущественно 2 - 4 мг нитрита.

Чтобы способствовать образованию продуктов восстановления нитратов в форме нитрозных газов, в случае изготовления или хранения в герметично закрытых сосудах размер сосудов выбирается преимущественно таким образом, что соотношение между объемом жидкости и общим объемом сосуда составляет преимущественно 1:10 - 1:5. Например, препараты согласно изобретению в количествах приблизительно 0,1 - 0,2 мл, которых, как правило, хватает для одного курса лечения, изготавливаются и хранятся в стеклянных ампулах емкостью 1 мл. В результате этого практически полностью отпадает необходимость в удалении избыточного раствора, а также опасность использования растворов, ставших уже неэффективными.

Как показывает тест на коже в примере 5, препараты согласно изобретению даже в верхней области концентрации азотной кислоты, независимо от легкого покраснения и образования небольших пузырьков, которые исчезают спустя несколько часов, не дают побочных явлений. Даже если вследствие неквалифицированного применения было бы до минимума снижено содержание продуктов восстановления нитратов, то благодаря низкой концентрации азотной кислоты, побочные явления остаются сравнительно незначительными. Аналогичным образом изготовленный препарат с концентрацией азотной кислоты 6,4 ммоль/л дает чуть более высокие побочные явления, но оказывается лучше, чем препарат Солкодерм, имеющийся в продаже. Оба препарата, с которыми проводится сравнение, имеют опасность возникновения более сильных побочных явлений, например, открытых ран или изъязвлений, в случае их неквалифицированного использования. В соответствии с изобретением применяется поэтому азотная кислота с концентрацией максимально 5,5 ммоль/л.

Препараты в соответствии с изобретением обеспечивают таким образом, при одинаково хорошей эффективности, аналогичной известным препаратам, значительно более надежное применение, так как появляются незначительные побочные явления, имеет место определенный состав и определенная эффективность, а риск появления побочных явлений даже при неквалифицированном использовании остается минимальным.

Препараты согласно изобретению могут найти применение в косметике и медицине и годятся для всех областей применения, указанных в EP-A-26 532, а также для всех показаний при лечении. Они, в частности, показаны для местного лечения поверхностных доброкачественных изменений на коже, таких как Verrucae (например, Verrucae vulgares и Verrucae plantares), себорейных и актинных кератозов и Condylomata, а также поверхностных доброкачественных изменений слизистой оболочки, например, доброкачественных поражений в области шейки, как, например, портиоэктопиен (например, эктропиум, эпитроплактия и псевдоэрозия), зон, подверженных изменениям, Ovula Nabothi полипов в области канала шейки, Condоlуmata и послеоперационных гранулем.

Так как препараты по изобретению обладают незначительным риском возникновения побочных явлений, то в противоположность препаратам, описанным в EP-A-26 532, они пригодны не только для лечения изменений на коже и слизистой оболочке, имеющих небольшую площадь, но и для лечения поражений, имеющих большую поверхность, а также для лечения инфекций кожи и слизистой оболочки, в частности, для лечения грибковых заболеваний кожи и слизистой оболочки, таких, как, например, грибковых заболеваний в области стоп и ногтей.

Все препараты согласно изобретению пригодны в основном для названных показаний. Однако для лечения поражений, охвативших большую поверхность, а также для лечения грибковых заболеваний кожи и слизистой оболочки используются преимущественно препараты, которые имеют концентрацию азотной кислоты 1 - 4 моль/л. Но для обработки гиперпластичных, т.е. четко ограниченных изменений кожи и слизистой оболочки, наоборот, предпочтение отдается препаратам с концентрацией азотной кислоты от 4 до 5,5 моль/л.

Препараты согласно изобретению могут применяться так же, как и препараты, описанные в EP-A-26 532, в виде местного нанесения или в виде других форм локальной обработки, на участки ткани, на которых появились патологические изменения. В качестве аппликатора могут служить преимущественно тонкая деревянная палочка или тонкая, пористая палочка из пластмассы, а для обработки больших поверхностей - кисточка.

Изобретение поясняется на приведенных ниже примерах. Температура помещения 22^oC. Концентрации нитрита определялись соответственно по методу, описанному в Аналисте 94, 585 (1969), путем реакции обмена с сульфаниловой кислотой и нафтил-1-амином и относятся соответственно к общей концентрации продуктов восстановления нитратов, измеряемых как нитриты.

Пример 1. 1 об. ч. 70%-процентной азотной кислоты (15,7 моль/л) и 1,907 об. ч. воды были подвержены предварительному охлаждению в отдельных сосудах на ледяной бане до температуры 5^oC. После этого холодная вода медленно при перемешивании и охлаждении смешивалась с холодной азотной кислотой, и раствор (5, 4 М азотной кислоты) перемешивался в ледяной бане в течение еще 15 мин. Затем раствор смешивался с этанолом в количестве 60 ммоль на 1 л раствора и перемешивался. С помощью установки разлива по ампулам, ампулы, соответствующие условиям ДИН, и имеющие емкость 1 мл, с откалывающимся кольцом заполнялись 0,2 мл раствора, после чего ампулы запаивались. Во время всего периода добавления этанола и разлива раствора по ампулам раствор содержался в ледяной бане при температуре 0 - 2^oC. На пробах, которые выдерживались в течение 24 ч при 0 - 2^oC. На пробах, которые выдерживались в течение 24 ч при 0 - 2^oC, не было обнаружено никакой реакции, так что изготовление больших партий по этой методике гарантировано.

Запаянные ампулы были нагреты до комнатной температуры, при этом началось спонтанное и полное превращение этанола с образованием уксусной кислоты и нитрозных газов. Спустя 24 часа остаточное содержание этанола, определенное с помощью жидкостной хроматографии, проводимой при высоком давлении, находилось четко ниже 100 ppm. Полученный препарат, разлитый по ампулам, состоял из жидкой азотной кислоты, продуктов восстановления нитратов и уксусной кислоты и имел кислотный эквивалент 5,50 моль/л и концентрацию продуктов восстановления нитратов, замеренную по нитратам, равную 1,41 мг на 1 мл раствора.

Аналогичным образом, но при использовании различных концентраций этанола и азотной кислоты, были получены препараты, приведенные в табл. 1, а также замерены концентрации нитритов, указанные в табл. 1.

Пример 2. Способом, аналогичным примеру 1, из 1 об. ч. 70%-процентной азотной кислоты и 1,453 об. ч. воды был получен 6,4 М раствор азотной кислоты, который затем смешивался с этанолом в количестве 60 ммоль на 1 л раствора, разливался по ампулам и нагревался до комнатной температуры. Полученный препарат имел кислотный эквивалент, равный 6,64 моль/л, и концентрацию продуктов восстановления нитратов, замеренную как нитрит, равную 1,75 мг нитрита на 1 мл раствора.

Концентрация продуктов восстановления нитратов показала себя в пределах точности измерения независящей от концентрации азотной кислоты (сравни пример 1 и табл. 1), как ожидалось по причине высокого избытка азотной кислоты и полного окисления этанола.

Способом, аналогичным предшествующему, но с использованием различных концентраций этанола в диапазоне от 0 до 130 ммоль/л, были получены другие препараты и соответственно определена другая концентрация продуктов восстановления нитрата, замеренная как нитрит. Замеренные концентрации нитрита графически представлены на фиг. 2 в зависимости от использованной концентрации этанола. Для сравнения приведены также теоретически возможные концентрации нитрита, которые рассчитываются с условием, что в процессе реакции обмена с помощью этанола из нитрата в растворе образуются исключительно продукты восстановления нитрата, замеряемые как нитриты.

На фиг. 2 показано, что замеренные концентрации нитритов не увеличиваются линейно вместе с увеличением концентрации этанола. При концентрации этанола ниже 45 ммоль/л были обнаружены лишь небольшие количества продуктов восстановления нитрата; замеренные значения концентрации нитрита лежали четко ниже значения 0,1 мг нитрита на 1 мл, которое отражает начало терапевтического воздействия. Однако, начиная с концентрации этанола, равной 45 ммоль/л, происходит резкое увеличение концентрации нитрита с увеличением концентрации этанола, что свидетельствует о перенасыщении раствора нитрозными газами.

Пример 3. (Тест с волосами). Способом, аналогичным примеру 1, с использованием концентраций азотной кислоты и этанола, приведенных в табл. 2, было получено несколько препаратов и опробовано их действие на человеческих волосах. Для этой цели белокурые человеческие волосы были вымыты раствором из 1 об.% ацетона в воде, а затем водой и высушены. Обезжиренные таким образом волосы были разрезаны. Затем 10 мг волос были добавлены к 1 мл препарата и была произведена визуальная оценка по наступившему изменению цвета волос и по возможному разложению. Изменение цвета сигнализирует о химической реакции с препаратом, в результате которой ткань теряет жизнеспособность, но сохраняет свою анатомическую структуру вплоть до могущего возникнуть разложения. Действие имеющегося в продаже препарата Солкодерм было также проверено с целью сравнения.

Пробы без добавления этанола дали желтую окраску только со значительным замедлением и привели в заключение к разложению волос: окрашивание в желтый цвет было дополнительно замедлено с помощью уменьшения концентрации азотной кислоты. Использование 26 ммоль этанола на 1 л в 6,4 М или 5,4 М азотной кислоты вызвало быстрое пожелтение, но привело в конце концов к разложению волос. Пробы, изготовленные с использованием концентрации этанола ≠60 или 86 ммоль/л, дали для всех исследованных концентраций азотной кислоты быстрое пожелтение без разложения волос. Различий в быстроте пожелтения с этими пробами не наблюдалось, в части данного аспекта тест с волосами оказался мало эффективным.

Таким образом, продукты восстановления нитратов, образовавшиеся в результате реакции обмена этанола с азотной кислотой, вызывают значительное ускорение реакции с тканью и, следовательно, заметно улучшают эффективность. Выше определенного порогового значения продуктов восстановления нитратов, к тому же, подавляется разложение ткани, т.е. присутствие продуктов разложения нитратов в достаточном количестве гарантирует фиксирование анатомической структуры (мумифицирование) и уменьшает опасность возникновения побочных явлений.

Пример 4. (Пепсин-тест). Способом, аналогичным примеру 1, с использованием концентраций азотной кислоты и этанола, приведенных в табл. 3 и на фиг. 4 и 5, было получено множество препаратов, действие которых затем было проверено раствором "пепсин". Пепсин-тест был разработан как модель первой реакции мумифицирования (реакции с первичными и вторичными аминогруппами, которая выражается в изменении цвета раствора) и позволяет произвести более точное квантифицирование этого воздействия, чем окрашивание в желтый цвет в тесте с волосами.

Для проведения пепсин-теста 100 1 пробы точно в течение 1 минуты после открытия ампулы были добавлены к раствору из 1 мг пепсина в 1 мл воды. Начавшаяся реакция была отслежена с помощью спектрофотометрии на изменении цвета смеси в зависимости от времени. Замерялась соответственно оптическая плотность при длине волны 438 нанометров на протяжении периода времени в 300 с с момента добавления пробы к раствору пепсина. Первый замер был произведен соответственно 20 с спустя после добавления. Значения замеренных оптических плотностей для каждой пробы были оценены в виде кривой уравнением y = a + bx + cx², (1) причем y обозначает оптическую плотность, x - время в секундах, параметры же a, b и c рассчитываются. Быстрота изменения окраски определяется в основном параметром b - в рамках настоящего изобретения обозначен как подъем b, который по этой причине был привлечен как решающий фактор действующей модели.

Пробы 1 - 10 дали значения кривой "подъема b", указанные в табл. 3. Для сравнения в пепсин-тесте был также исследован препарат Солкодерм, имеющийся в продаже.

На фиг. 3 графически представлены значения оптической плотности (OD), замеренные для проб 1 - 6, в зависимости от времени.

Результат пробы 1 подтверждает, что препараты, изготовленные без добавки этанола, не обладают эффектом. Пробы 2 - 6 показывают хорошее действие, которое усиливается как с увеличением концентрации азотной кислоты, так и с увеличением концентрации этанола.

На фиг. 4 дано графическое изображение значений кривой "подъема b" препаратов, которые были изготовлены с использованием переменных концентраций этанола и постоянной концентрации азотной кислоты, равной 5,4 или соответственно 6,4 моль/л. Как видно из фигуры 4, значения кривой "подъема b" были приблизительно пропорциональны значениям концентрации этанола. Препараты с 5,4 М азотной кислоты дали менее крутой ход кривой; этот эффект может быть, однако, компенсирован соответствующим повышением концентрации этанола.

Фиг. 5 показывает в графическом изображении значения кривой "подъема b" препаратов, которые были изготовлены при использовании постоянной концентрации этанола, равной 60 ммоль/л, и переменной концентрации азотной кислоты в диапазоне от 4,4 до 6,4 М. Как можно видеть на фиг. 5, значения кривой "подъема b" в этом диапазоне концентраций приблизительно линейны значениям повышающейся концентрации азотной кислоты.

Пример 5. (Тест на человеческой коже). С целью оценки побочных явлений, возникающих на нормальной человеческой коже, на тыльную сторону предплечья были нанесены два препарата, которые были приготовлены в соответствии с примером 1 из азотной кислоты (6,4 или 5,4 моль/л) и этанола (60 или 86 ммоль/л), а также для сравнения соответствующие и более сильно разбавленные растворы азотной кислоты без добавления этанола и препарат Солкодерм, имеющийся в продаже, и оставлены там на 5 минут для оказания действия. Пробы с концентрациями азотной кислоты от 5,4 моль/л и менее наносились в количестве 40 мл, остальные в количестве 20 мл. Их действие наблюдалось в течение 36 ч и дало картину, приведенную в табл. 4.

5,4 М азотной кислоты, несмотря на то, что было нанесено удвоенное количество, дали меньшие побочные явления, чем 6,4 М азотной кислоты, в частности не привели к образованию открытой раны. С дальнейшим уменьшением концентрации азотной кислоты наблюдалось дальнейшее уменьшение побочных явлений. В частности при 2,4 и 1,4 М азотной кислоты больше не происходило образование пузырьков. Солкодерм дал аналогичную реакцию, как и 5,4 М азотной кислоты.

Оба препарата, изготовленные с добавлением этанола, привели по сравнению с соответствующими чистыми растворами азотной кислоты к явно меньшим побочным явлениям, которые к тому же быстро проходили, т.е. продукты восстановления нитратов, образовавшиеся в этих препаратах вследствие реакции обмена с этанолом, подавляли побочные воздействия азотной кислоты на нормальную ткань. Оба препарата показали себя значительно лучше, чем Солкодерм.

Препарат, полученный из 5,4 М азотной кислоты и этанола в концентрации, равной 86 ммоль/л, показал аналогичным образом меньшие побочные воздействия по сравнению с чистой 2,4 М азотной кислотой. Это позволяет осуществлять его надежное применение, т. к. сами по себе побочные воздействия в этом случае остаются минимальными, когда содержание продуктов восстановления нитратов частично или полностью сокращается вследствие неквалифицированного использования. Контрольный опыт с пробой (20 мл), которая была нанесена на кожу только спустя 24 ч после открытия ампулы и воздействие которой наблюдалось на протяжении 36 ч, дало сильное покраснение с коричневыми пятнами, а также образование пузырьков, которые остаются закрытыми. Так как риск возникновения побочных воздействий при уменьшении концентрации азотной кислоты продолжает уменьшаться, то такие препараты пригодны для лечения заболеваний кожи и слизистой оболочки, занимающих большую поверхность.

Пример 6. Препарат, приготовленный способом, аналогичным примеру 1, при использовании концентрации азотной кислоты, равной 5,4 моль/л, и концентрации этанола 86 ммоль/л (замеренное содержание нитрита 3,20 мг/мл) был исследован с помощью пепсин-теста на предмет воздействия в течение промежутка времени, равного 30 мин, с момента открытия ампулы, пепсин-тест был проведен так же, как описано в примере 4. Результаты приведены в табл. 5.

Нанесение препарата в течение периода времени от нескольких минут до одного часа, преимущественно в течение получаса, после открытия ампулы гарантирует терапевтическое действие и отсутствие побочных воздействий.

Пример 7. При использовании концентрации этанола и азотной кислоты, указанных в табл. 6, были изготовлены многие препараты, как это описано в примере 1, которые затем после запаивания ампул хранились при температуре 22^oC. После различной продолжительности хранения с помощью газохроматографического анализа определялось содержание уксусной кислоты в препаратах. Контрольные замеры с помощью энзиматического метода (ацетат-тесткит Берингера) дали совпадающие результаты в пределах точности замеров.

Результаты подтверждают, что концентрация уксусной кислоты даже при длительности хранения остается постоянной и что повышение использованной концентрации этанола ведет к более высокой концентрации уксусной кислоты. Но замеренная концентрация уксусной кислоты ниже, чем использованная концентрация этанола. С помощью теста, использующего барий и хлорид, можно было доказать, что двуокись углерода является дальнейшим продуктом разложения этанола. В отреагировавших растворах невозможно доказать ни присутствие этанола, ни присутствие других продуктов разложения, это означает, что этанол полностью превратился в уксусную кислоту и двуокись углерода.

Пример 8. Способом, аналогичным примеру 1, 5,4 М азотной кислоты были смешаны с этанолом в количестве 86 ммоль на 1 л раствора, а раствор был разлит по множеству ампул. Раствор, разлитый в ампулы, хранился в течение периода от 14 дней до 1 месяца при различной температуре, а затем был исследован на содержание уксусной кислоты и продуктов восстановления нитратов. Результаты приведены в табл. 7. Они подтверждают, что температура хранения в исследуемой области не оказывает характерного влияния на состав препарата.

Пример 9. (Лечение общих и подошвенных бородавок). Для проведения клинического исследования лечения общих и подошвенных бородавок были приготовлены по методике, описанной в примере 1, препараты A, B и С (см. табл. 8).

Препаратами A - C было проведено лечение в общей сложности 26 бородавок (22 пациента), а у пациентов, имевших два похожих вида бородавок, одна бородавка подвергалась лечению Солкодермом - для сравнения. Нанесение препарата осуществлялось с помощью тонкой пористой палочки из пластмассы, при этом препарат распределялся на пораженном участке каплеобразно с помощью палочки из пластмассы и осторожно легкими штрихами втирался в этот участок. Эта терапия была соответствующим образом продолжена, пока пораженный участок не приобрел равномерную желтую окраску. Препараты A - C привели соответственно в течение приблизительно 3 - 5 мин к изменению окраски пораженного участка, препарат Солкодерм же - в течение 10 мин. Ощущение тепла и пощипывание наступило в случае препаратов A - C также раньше ( в течение приблизительно 5 - 10 мин), чем в случае применения препарата Солкодерм (в течение 15 - 30 мин). Таким образом, продолжительность терапии препаратами A - C была явно короче, а болевые ощущения в части интенсивности и длительности были к тому же меньше, чем при терапии препаратом Солкодерм. С интервалом в 4 - 8 дней терапия была повторена один или несколько раз, поскольку пораженный участок не был вылечен полностью. Результаты приведены в табл. 9.

Из случаев, приведенных в табл. 9, в которых пораженные участки не были полностью вылечены после двух курсов лечения, одна из обыкновенных бородавок, обработанная препаратом B, была полностью вылечена после третьей терапии, одна из подошвенных бородавок, обработанная препаратом B, - после третьей терапии, а другая после четвертой терапии, а одна из подошвенных бородавок, обработанная препаратом C, была вылечена полностью после третьей терапии. Остальные случаи во время подготовки промежуточного отсчета были еще в стадии обработки.

Препаратом, который был взят для сравнения, были обработаны четыре обыкновенные бородавки и две подошвенные, из которых две обыкновенные бородавки и одна подошвенная были вылечены после одного курса терапии, а две обыкновенные бородавки и она подошвенная - после второго курса терапии.

Пример 10. (Лечение грибкового заболевания стопы). Пациент с поражением обеих стоп грибковым заболеванием был подвергнут лечению препаратом согласно изобретению, изготовленным по методике, описанной в примере 1, из 5,4 М азотной кислоты и 86 ммоль этанола на 1 л раствора.

Стопа была сильно повреждена грибковым заболеванием между четвертым и пятым пальцами с отслаиванием кожи и сильным покраснением. При раздвигании пальцев истонченные остатки кожи рвались, что вызывало кровотечение. После безуспешного лечения препаратом Оксиконазол (Oceral, Roche), на поврежденный участок кожи было нанесено около 100 мл препарата по изобретению, причем пациент ощущал в течение нескольких секунд короткое покалывающее жжение на поврежденных участках кожного покрова, а определенные, ограниченные зоны вокруг поврежденного участка кожи окрасились в коричневый цвет. Большая часть поврежденного кожного покрова и окружающая его здоровая кожа не изменила цвета, а лишь слегка пожелтела. Спустя 8 ч после проведенной терапии обработанная кожа имела все еще сильное покраснение, а пациент все еще испытывал ощущение легкой давящей боли, но продолжительных болевых ощущений больше не было. Затем поврежденный участок намазывался на ночь мазью для лечения ран (Solcoseryl Salbe, Solco Basel AG). Спустя три дня изъявления на коже, типичные для грибкового заболевания ног, исчезли; поверхность кожи была твердой и эластичной. После семи дней поражений участок кожи был окончательно вылечен, рецидива не было.

Другая стопа повреждена грибковым заболеванием в легкой форме. Поврежденные участки были обработаны препаратом по изобретению, болевых ощущений не появилось. Спустя семь дней пораженные участки были полностью вылечены, и рецидива также не появилось.

Пример 11. (Лечение грибкового заболевания ногтей). Пациент с грибковым заболеванием ногтей (полное поражение ногтей безымянного, среднего и указательного пальцев правой руки) был подвергнут лечению препаратом по изобретению, изготовленным по методике, описанной в примере 1, из 3,4 М азотной кислоты и 129 ммоль этанола на 1 л раствора. Перед проведением лечения пораженные ногти были обработаны препаратом "Аморофлин" (Loceryl - Lack, Roche), при этом не наблюдалось ни уменьшения поражения грибком, ни роста ногтей.

На пораженные ногти был нанесен препарат по изобретению, причем в течение одной минуты появилась четкая желто-коричневая окраска. Пациент не ощущал боли, за исключением легкого жжения в течение 3 мин на месте, на котором кожа в местах перехода к ногтю имела небольшие повреждения. Спустя три дня наиболее поврежденные участки ногтей отвалились. Лечение препаратом по изобретению повторялось приблизительно каждые семь дней. Спустя 14 дней было заметно значительное улучшение состояния ногтей (меньшая степень их повреждения). Спустя два месяца было видно, что ногти вновь отросли; однако задняя часть ногтевого полотна, прилегающая в самому ногтю, была все еще повреждена грибковым заболеванием. Таким образом, препарат по изобретению годится для лечения поверхностных заболеваний ногтей, в случаях инфекции основания ногтя лечение следует проводить вместе с приемом противогрибкового средства.

Формула изобретения

\ \ \ 1 1. Препарат для местного лечения поверхностных изменений кожи и слизистой оболочки и поверхностных инфекций кожи и слизистой оболочки на основе водного раствора азотной кислоты, содержащий продукты восстановления нитрата и карбоновую кислоту, отличающийся тем, что препарат состоит из 1 - 5,5 М водного раствора азотной кислоты и продуктов реакции обмена первичного C₁ - C₅-алканола с азотной кислотой и содержит продукты восстановления нитрата в концентрации, соответствующей 0,1 - 6 мг нитрата на 1 мл раствора, а также C₁ - C₅-алкановую кислоту в концентрации не выше 170 ммолей на 1 л раствора, и препарат находится в герметически закрытом сосуде и имеет постоянный, воспроизводимый и в основном не зависящий от температуры состав. \\\2 2. Препарат по п.1 для лечения гиперпластических изменений кожи и слизистой оболочки, отличающийся тем, что концентрация азотной кислоты в нем составляет 4 - 5,5 М. \\\2 3. Препарат по п.1 для лечения грибковых заболеваний кожи и слизистой оболочки, отличающийся тем, что концентрация азотной кислоты в нем составляет 1 - 4 М. \\\2 4. Препарат по одному из пп.1 - 3, отличающийся тем, что концентрация продуктов восстановления нитрата соответствует 1 - 5 мг нитрита на 1 мл раствора. \\\2 5. Препарат по п.4, отличающийся тем, что концентрация продуктов восстановления нитрата соответствует 2 - 4 мг нитрита на 1 мл раствора. \\\2 6. Препарат по одному из пп.1 - 5, отличающийся тем, что концентрация C₁ - C₅-алкановой кислоты составляет не менее 5 ммолей на 1 л. \\\2 7. Препарат по п.6, отличающийся тем, что концентрация C₁ - C₅-алкановой кислоты составляет 9 - 90 ммолей на 1 л. \\\2 8. Препарат по одному из пп. 1 - 7, отличающийся тем, что в качестве C₁ - C₅-алкановой кислоты он содержит уксусную кислоту. \\\2 9. Препарат по одному из пп.1 - 8, отличающийся тем, что он находится в герметически закрытой ампуле. \ \ \2 10. Препарат по одному из пп.1 - 9, отличающийся тем, что соотношение объема жидкости к объему газа сосуда составляет не более 1 : 2, предпочтительно от 1 : 10 до 1 : 5. \\\2 11. Способ получения препарата для местного лечения поверхностных изменений кожи и слизистой оболочки и поверхностных инфекций кожи и слизистой оболочки путем реакции взаимодействия окисляемого органического соединения в водном растворе азотной кислоты, отличающийся тем, что смешивают 1 - 5,5 М водный раствор азотной кислоты при температуре ниже температуры реакции с первичным C₁ - C₅-алканолом в количестве 45 - 170 ммолей на 1 л азотной кислоты, смесь герметически закрывают в сосуде и затем нагревают до температуры реакции или более высокой температуры. \\\2 12. Способ по п.11, отличающийся тем, что применяют 60 - 90 ммолей первичного C₁ - C₅-алканола на 1 л азотной кислоты. \\\2 13. Способ по п.11 или 12, отличающийся тем, что смесь герметически закрывают в ампулах. \\\2 14. Способ по одному из пп.11 - 13, отличающийся тем, что в качестве первичного C₁ - C₅-алканола применяют этанол. \\\2 15. Способ по п.14, отличающийся тем, что азотную кислоту смешивают с этанолом при температуре не выше 10ºC и смесь нагревают в герметически закрытом сосуде до 20 - 40ºC, предпочтительно до комнатной температуры.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14

MM4A - Досрочное прекращение действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 23.06.2008

Извещение опубликовано: 20.07.2010        БИ: 20/2010

---