Способ моделирования эндолимфатического гидропса

 

Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии. Способ заключается в том, что предварительно экспериментальному животному в течение трех недель ежедневно в суточный рацион питания вводят свиное сало из расчета 9 частей и 1 часть злаков. Способ повышает воспроизводимость патологии. 7 ил.

Изобретение относится к области медицины, а именно оториноларингологии, и может быть использовано для изучения патогенеза и разработки методов лечения эндолимфотического гидропса (невоспалительного отека внутреннего уха, который является патоморфологическим субстратом болезни Меньера.

Большинство исследователей считает, что причиной эндолимфатического гидропса при болезни Меньера являются нейро-сосудистые нарушения в кровоснабжении ушного лабиринта. Эти нарушения определяют приступообразное течение заболевания с быстрой сменой фаз нормального функционирования патологическим (Олисов В. С. Лабиринтопатии. Л., Медицина. 1973. С. 113). Приступ болезни Меньера характеризуется головокружением, тошнотой, рвотой, потерей равновесия, ухудшением слуха и шумом в ухе, что обусловлено развитием эндолимфотического гидропса. В межприступном периоде слух обычно улучшается и вестибулярные расстройства компенсируются, но с каждым новым приступом тугоухость прогрессирует вплоть до глухоты, сопровождаясь стойкими дегенеративно-дистрофическими изменениями ушного лабиринта.

Проведенными исследованиями по патентной и научно-медицинской литературе выявлены следующие способы моделирования эндолимфатического гидропса.

Так, R. S. Kimura, H.F.Schuknecht после трепанации черепа у экспериментальных животных производили блокаду эндолимфатического мешка, что нарушало отток эндолимфы и вызывало эндолимфатический гидропс (Kimura R.S., Schuknecht H. F. Мembranous Hydrops in the Inner Ear of the Guinea Pig after obliteration of the Endolimphatic Sac //Pract. Oto-Rhyno-Laryng. 1965. V. 27, N 6, p. 343 - 354).

Недостатком способа является то, что при его реализации гидропические изменения во внутреннем ухе постоянно прогрессируют, что неадекватно течению болезни Меньера, которое имеет приступообразный характер и межприступный период заболевания предлагает уменьшение гидропических проявлений.

Существенным недостатком этого способа является его сложность - для постановки эксперимента требуется значительное количество времени, специальное оборудование, участие подготовленных ассистентов, соблюдение условий асептики для исключения воспаления внутреннего уха.

Известен способ моделирования стабильного эндолимфатического гидропса, предложенный А.Н.Помухиной (а/с N 1051102, Б.И. N 40, 1983), который осуществляется путем механического повреждения диска между 4 - 5 шейными позвонками крыс.

Недостатком этого способа является стабильность гидропических изменений, что не позволяет наблюдать приступообразность, типичную для болезни Меньера.

В качестве прототипа взят способ моделирования переходящего эндолимфатического гидропса, защищенный а.с N 1585826, авторы А.Н. Помухина, В.В. Киселев (Б.И. N 30, 1990), предусматривающий охлаждение хлорэтилом боковой поверхности шеи крыс.

Недостатком прототипа является полная обратимость модели, т. е. к окончанию эксперимента у крыс исчезают все признаки эндолимфатического гидропса, и восстановление морфологии и функции внутреннего уха происходит самостоятельно без лечения. Полная обратимость модели, которую формируют авторы прототипа, противоречит течению болезни Меньера. У человека приступы не проходят бесследно и вызывают стойкие необратимые изменения в ушном лабиринте, что подтверждается паталогоанатомическими исследованиями. На аутопсии лиц, умерших в межприступном периоде болезни Меньера от сопутствующих заболеваний при отсутствии симптомов острой вестибулярной дисфункции, обнаружены изменения внутреннего уха в виде: - эндолимфатического гидропса, т. е. увеличения количества эндолимфатической жидкости внутреннего уха; - дистрофических и дегенеративных изменений клеток спирального органа; - дистрофических и дегенеративных изменений сосудистой полости; - дистрофических и дегенеративных изменений в спиральном ганглии (Олисов В.С. Лабиринтопатии. Л., "Медицина". 1973, с. 57).

Такие изменения не наблюдаются в исходе приступа при моделировании по прототипу.

Другим недостатком прототипа является то, что обратимость модели затрудняет оценку экспериментальной терапии, т. к. выздоровление у животных наступает самостоятельно без лечения.

Целью изобретения является создание модели эндолимфатического гидропса, приближающейся к течению болезни Меньера за счет высокой воспроизводимости в исходе приступа дегенеративно-дистрофических явлений в ушном лабиринте, типичных для межприступного периода болезни Меньера.

Эта цель достигается путем изменения обменных процессов в организме животных в виде усиления перекисного окисления липидов и истощения факторов антиоксидантной защиты, происходящих в результате содержания животных на липидном рационе.

Подтверждением указанных положений является эксперимент, в котором эндолимфатический гидропс воспроизводили по заявляемому способу.

Подробное описание способа.

Эксперимент проводили на беспородных белых крысах. Контрольную группу составляли 12 животных, у которых эндолимфатический гидропс воспроизводили по прототипу на фоне обычного пищевого рациона. Другие 12 животных составили вторую опытную группу, в которой эндолимфатический гидропс воспроизводили по заявляемому способу. Предварительно, в течение 3-х недель, животные второй группы содержались на липидном рационе и были рассажены по 3 особи в стандартные клетки. На каждую клетку готовилась суточная порция пищевой массы (90 г свиного сала слабого посола, не копченого и 10 г "злаковой муки"). Для приготовления муки использовались 3 равные части ячменя, овса и проса, которые мелко перемалывались в электрической кофемолке. Использование одновременно 3-х видов злаков взаимообогащало состав аминокислот, углеводов, витаминов и минералов в пище. Сало резалось мелкими кусочками и смешивалось со "злаковой мукой" в механической мясорубке, и такая пищевая масса распределялась по 100 г на клетку. Таким образом, каждой крысе представлялось необходимое суточное количество корма, которое для взрослого животного составляет 30 - 60 грамм (БМЭ. Крысы. М., 1960. Т. 14. с. 883). Конструкция поилок обеспечивала свободный доступ к воде.

После 3-х недель содержания на липидном рационе у крыс наблюдалась потеря массы тела на 10 - 15%, вялость, пожелтение и выпадение шерсти (признаки гиповитаминоза E).

Для нарушения кровоснабжения внутреннего уха под эфирным наркозом орошали хлорэтилом в объеме 4 - 6 мл за 8 - 12 секунд боковую поверхность шеи крыс справа, в области 4-5-6 позвонков, в проекции позвоночной артерии. После охлаждения проводилась регистрация поведенческих реакций животных.

Охлаждение хлорэтилом у животных обеих групп вызывало симптомы острой вестибулярной дисфункции (манежные движения вправо с дополнительной точкой опоры на брюшко, отклонения при попытке встать на задние лапы вправо). У крыс опытной группы, по сравнению с контрольной, признаки вестибулярной дисфункции были выражены сильнее и длились в два раза дольше, они тяжелее перенесли воздействие эфирного наркоза и хлорэтила.

В последующие 3 - 5 суток у животных контрольной группы явления вестибулярной дисфункции постепенно регрессировали и через 5 дней не определялись.

У животных второй - опытной группы регресс симптомов острой вестибулярной дисфункции был более длительным. На 5-е сутки животные активно передвигались по клетке, но при попытке встать на задние лапы отклонялись вправо, что является признаком раздраженного состояния лабиринта на стороне охлаждения. На 7-е сутки признаки гипертонуса мышц правой половины туловища сохранялись. При исследовании передвижения по столу животные поворачивали вправо, что также подтверждает раздражение лабиринта на стороне охлаждения. Через 10 суток в опытной группе нарушения функции равновесия не определялись.

Такая динамика поведенческих реакций животных свидетельствует о компенсации клинических проявлений заболевания (в заявляемом способе через 10 суток), что характерно для болезни Меньера.

В последующем, по 4 животных из каждой группы забивались декапитацией под эфирным наркозом соответственно на 4-е, 8-е и 21-е сутки от момента охлаждения, и по общепринятой методике изготавливались гистологические препараты внутреннего уха.

При гистологическом исследовании внутреннего уха у всех животных контрольной группы (только холодовое воздействие, по прототипу) максимальная выраженность признаков эндолимфатического гидропса отмечалась на 4-е сутки от момента воздействия. В этот период (фиг. 1) обнаруживались пикноз ядер (2), просветление и вакуолизация цитоплазмы поддерживающих клеток (1), как признак внутриклеточного отека. Определялся межклеточный отек. В пери- и эндолимфатическом пространствах выпадал зернисто-сетчатый эозинофильный осадок, что по данным F. Antoli-Candela. (The Histopathology of Meniere's Disease//Acta otolaryngol. - 1976 - Suppl. 340/ - P. 5 - 41) является признаком значительного изменения химического состава жидкостей лабиринта. В непосредственной близости от сосудистой полоски появлялись бесструктурные шаровидные образования как признак, свидетельствующий по данным Cl.F. Werner (Protoplasmakugeln in Cortichen Organ bei exptrimenteller Schaullschadigung//Arch. Ohr. - Nas. - u. Kehlk. - Heilk. - 1958 - Bd. 172. - S. 221 - 230) о глубоком повреждении эпителия сосудистой полоски. Капилляры сосудистой полоски были расширены с признаками сладжирования крови (склеивание ее форменных элементов). Затем гидропические явления уменьшались и на 8-е сутки (фиг. 3) проявлялись только внутриклеточным отеком поддерживающих клеток (5). Через 21 день (фиг. 5) патологические изменения полностью исчезли и характер гистологической картины ушного лабиринта соответствовал норме. Четко определялись наружный туннель (а) и пространство Нуэля (б).

В группе опытных животных, когда пусковое холодовое воздействие производилось на фоне липидного рациона по заявляемому способу, выявлено иное течение эндолимфатического гидропса: на 4-е сутки признаки гидропса в опытной группе были выражены сильнее, чем в контрольной, и проявлялась сильным межклеточным (4) и внутриклеточным (3) отсеком поддерживающих клеток, имеющих просветленную цитоплазму (фиг. 2). В последующие дни эксперимента их интенсивность неуклонно нарастала. На 8-е сутки у опытных крыс отмечался "пик" гидропических изменений (фиг. 4). Появлялось гомогенное гипохромное окрашивание ядер поддерживающих клеток, что является признаком углубляющейся дистрофии. Межклеточные пространства из-за отека были резко расширены (6). Цитоплазма поддерживающих клеток из-за внутриклеточного отека (7) значительно просветлена. В сосудистой полоске определялось большое количество полнокровных сосудов. В перепончатом канале улитки увеличивалось количество шаровидных эозинофильных масс (8), как проявление усиливающейся дистрофии эпителия сосудистой полоски. Регистрировался отек клеток спирального ганглия.

Через 21 день после воздействия у всех животных опытной группы отмечались субатрофические изменения спирального органа (фиг. 6). Сохранялись выраженный отек поддерживающих клеток (9), пикноз (10) и лизис (11) их ядер, вакуолизация цитоплазмы (12) и гибель отдельных рецепторных клеток. Появились признаки дистрофических изменений спирального ганглия (фиг. 7) в виде уменьшения размеров ядер нейроцитов, их пикноза (13) и уплотнения хроматина, появления клеток-теней (14).

В ходе эксперимента получен пролонгированный эндолимфатический гидропс, при котором приступ острой вестибулярной дисфункции сопровождают прогрессирующие дистрофические изменения в перепончатом лабиринте и нервном ганглии. Эти изменения соответствуют данным аутопсий лиц, страдающих болезнью Меньера и представлены: - в виде эндолимфатического гидропса, т. е. увеличения количества эндолимфатической жидкости внутреннего уха, что проявляется в нашей модели наличием межклеточного и внутриклеточного отека (Струков А.И., Серов В.В. Патологическая анатомия. М., 1979, с. 90); - изменениями клеток спирального органа - дистрофическими (отек и вакуолизация) и дегенеративными (пикноз ядер и гибель клеток); - изменениями сосудистой полоски - дистрофическими (в виде появления эозинофильных шаровидных масс) и дегенеративными (гибель отдельных клеток); - изменениями в спиральном ганглии дистрофическими (в виде вакуолизации цитоплазмы) и дегенеративными (пикноз ядер, появление клеток-теней).

Преимущества заявляемого способа моделирования по сравнению с прототипом состоят в том, что формирование патологического фона в виде усиления перекисного окисления липидов и истощения факторов антиоксидантной защиты технически легко достигается с помощью липидного рациона, пролонгирует эндолимфатический гидропс, усиливает тяжесть его клинических и морфологических проявлений и приводит к развитию в исходе приступа необратимых субатрофических изменений в спиральном органе и нервном ганглии, типичных для межприступного периода болезни Меньера. Предлагаемая нами модель позволит более качественно оценивать эффективность экспериментальной патогенетической терапии.

Формула изобретения

Способ моделирования эндолимфатического гидропса путем охлаждения боковой поверхности шеи крысы хлорэтилом в объеме 4 - 6 мл в течение 8 - 12 с, отличающийся тем, что предварительно экспериментальному животному в течение трех недель ежедневно в суточный рацион питания вводят свиное сало, из расчета 9 частей сала и 1 часть злаков.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7