Способ получения биостимулятора из плаценты коров

 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к получению тканевых препаратов из натурального животного сырья. Жидкую составляющую из плаценты отделяют путем нагрева в микроволновой печи в специальной посуде с перфорированным дном, при этом жидкая составляющая отделяется самотеком, а нагрев производят не выше 60^oС, причем в качестве разбавляющей среды для жидкой фазы используют 0,9%-ный раствор натрия хлорида. Способ позволяет сократить количество технологических операций и общее время получения препарата при сохранении его качества. 2 з.п.ф-лы.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к ветеринарному акушерству, точнее к технологии получения и применения лекарственных средств и тканевых препаратов из натурального сырья, взятого от здоровых животных.

Известен "Способ получения биостимулятора "Пом" из плаценты коров" (См. а. с. N 1730762, A 61 K 35/12; Опубл. 20.07.96. Бюл. N 20). По этому способу после охлаждения и выдержки плаценту измельчают на мясорубке и гомогенизируют, после гомогенизации фарш из ткани плаценты смешивают с мочевиной в соотношении 0,4-0,5: 1,0 и добавляют формалин, а экстракцию осуществляют путем нагревания полученной смеси до 100^oC, а затем добавляют дистиллированную воду, отстаивают, контролируют и фасуют.

Биостимулятор "ПОМ" из плаценты коров применяют для профилактики задержаний последов субинволюции матки и эндометритов у коров в ранний послеотельный период, а также для стимулирования стадии возбуждения полового цикла у коров и телок, не приходящих в охоту, Однократная доза биостимулятора "ПОМ" - 20 мл. Для стимуляции охоты: 3-5 раз через 48 часов.

Недостатками такого способа получения биостимулятора является то, что в препарате "ПОМ" содержатся нежелательные для организма животных дополнительные компоненты, как метиллол-мочевина до 18% и мочевина до 12%, что при введении животным может вызывать нежелательные осложнения. Кроме этого, препарат получается в виде расслаивающейся суспензии, которую перед введением животным требуется подогревать и встряхивать, что усложняет процесс применения такого препарата.

Известен также способ получения и применения тканевого препарата биостимульгин, который готовят из последов, взятых от здоровых коров. Послед помещают в холодильник на 6-7 дней. Затем ткань пропускают через мясорубку, взвешивают и заливают физиологическим раствором из расчета 5 литров на 1 кг фарша. Полученную массу тщательно перемешивают и помещают в холодильник для экстрагирования. Через сутки массу процеживают, фильтрат кипятят 9-10 минут. Остывшую взвесь центрифугируют в течение 30 минут. Надосадочную жидкость отделяют, расфасовывают и стерилизуют (см. Справочник. Ветеринарные препараты. - М.: Колос, 1981. - С. 404).

Тканевый препарат биостимульгин, полученный по такому способу, применяют при эндометритах, вагинитах, сальпингитах, при задержании последа, для стимулирования стадии возбуждения полового цикла у коров, телок и свиноматок, не приходящих в охоту. Однократная доза препарата 30 мл.

Недостатками этого способа получения биостимульгина является длительность процесса и то, что ткань последа с плацентой при переработке подвергается механическому измельчению на мясорубке, при котором сырье контактирует с металлом и может окисляться, вследствии чего возможно снижение активности препарата и кроме того, технология приготовления сложная, громоздкая, имеет много операций и связана с большим отходом сырья, а при применении такого биостимульгина рекомендуется использовать высокие дозы препарата (30 мл.).

Задачей изобретения является разработка способа получения тканевого препарата - биостимулятора типа "Биостимульгин" из плаценты коров, при котором бы не использовались дополнительные химические компоненты, нежелательные для организма животных, а препарат получался бы в виде состава, легко вводимого животным, причем технология получения биостимулятора должна исключать механическое измельчение сырья на мясорубке и его контакт с металлами, при этом технология должна иметь минимум операций и осуществляться при минимальных затратах труда и времени, а для осуществления способа использовались бы выпускаемые промышленностью аппараты и техника, причем качество и эффективность действия нового препарата не уступали бы существующим тканевым препаратам - биостимуляторам из плаценты коров.

Задача решается тем, что послед, взятый от коровы после охлаждения и выдержки в холодильнике, помещают в специальную посуду из радиопрозрачного материала и для отделения жидкой составляющей от тканей плаценты без механического травмирования плаценты, обрабатывают микроволновым излучением частотой (2450 ± 50) МГц, применяемой в бытовых СВЧ-печах, при нагреве сырья не выше 60^oC, а жидкость, выделившуюся в процессе СВЧ-обработки сырья, отделяют от тканей плаценты самотеком в количестве от 30 до 60% от исходной массы сырья, смешивают с разбавляющим раствором и используют для приготовления биостимулятора.

Способ осуществляется следующим образом в хозяйствах, благополучных по заболеваниям, от здоровой коровы берут, отделившийся в первые 4-6 часов после отела послед, не имеющий патологических изменений ткани. Послед разделяют на транспортабельные части, погружают в специально подготовленную стеклянную посуду, плотно закрывают и обертывают пергаментной бумагой и помещают в холодильную камеру. Выдерживают от 4 до 7 суток при температуре 2-4^oC, после чего направляют на переработку по предлагаемому способу.

Охлажденную и выдержанную плаценту достают из емкости, проводят визуальный осмотр и помещают в специальную посуду из радиопрозрачного материала с перфорированным дном. Плаценту укладывают ровным слоем, закрывают стеклянной крышкой и емкость ставят на устройство для сбора жидкости. Собранную таким образом посуду помещают в рабочую камеру микроволновой печи, работающей на частоте СВЧ излучения (2450 ± 50) МГц. На пульте управления микроволновой печи набирается программа СВЧ-обработки материала и СВЧ печь включают в работу. Под воздействием микроволнового излучения частотой 2450 ± 50 МГц сырье с плацентой равномерно прогревается и из него выделяется жидкая составляющая, которая самотеком через перфорированное дно посуды стекает в нижнюю емкость для сбора жидкости. После окончания цикла СВЧ-обработки микроволновая печь отключается, посуду вынимают из рабочей камеры и скопившуюся в нижней емкости жидкую составляющую сливают в стерильную мерную посуду. Сырье перемешивают, замеряют температуру обрабатываемой массы, чтобы не перегреть, не допустить коагуляции белков. Посуду снова помещают в рабочую камеру СВЧ-печи и цикл СВЧ-обработки повторяют. Количество циклов СВЧ-обработки сырья с плацентой зависит от величины исходной массы и качества сырья последа. СВЧ-обработку заканчивают, когда после очередного цикла обработки объем слитой жидкой фазу будет менее 50 миллилитров, а общий объем полученной жидкости составит от 30 до 60% от исходной массы сырья. Оставшуюся после СВЧ-обработки обезвоженную массу сырья с плацентой используют отдельно от жидкой фазы. Жидкую фазу, слитую в процессе СВЧ-обработки, охлаждают до комнатной температуры и смешивают с разбавляющей средой в виде физраствора в соотношении от 1:4 до 1:5 и далее обрабатывают центрифугированием, фильтруют и контролируют аналогично технологии приготовления тканевого препарата "Биостимульгин" по общепринятой методике. За счет того, что отделение жидкой фазы от сырья с плацентой производят без механического измельчения тканей и не производят дополнительного экстрагирования смеси в холодильнике, время получения препарата сокращается практически на сутки, а сам препарат получают с меньшим числом операций и более однородного состава, который при хранении не образует плотного осадка, что положительно влияет на физические свойства биостимулятора и облегчает введение препарата животным, а по контрольным показателям эффективности препарат, полученный по предлагаемому способу, не уступает биостимульгину, полученному до общепринятой в настоящее время технологии (см. "Биостимульгин". Технические условия ТУ 10-07-032-88 взамен ТУ 46-12-691-79). Лечебный препарат, изготовленный из плаценты коров по предлагаемому способу с применением СВЧ отделения жидкости, условно назван "Биостимульгин-С", или СВЧ обработанный.

Пример 1. Взятый от здоровой коровы послед общей массой порядка 5 кг, разделили на части и разложили по подготовленным стеклянным банкам емкостью по 3 литра. Банки плотно закрыли и обернули пергаментом и поместили в холодильную камеру с температурой 4^oC. После выдержки в течение 5-ти суток банки с сырьем доставили в лабораторию на переработку.

Часть последа с плацентой массой 2 кг (из одной емкости 3 л) использовали для получения биостимулятора по предлагаемому способу. Оставшаяся часть последа с плацентой в виде контрольного варианта переработана до существующей общепринятой технологии. Послед с плацентой массой 2 кг, после визуального осмотра и контроля, поместили в перфорированную корзину объемом 2,5 литра из термостойкой пищевой пластмассы пароварки французской фирмы "Puroflam". Корзину с сырьем закрыли стеклянной крышкой и установили на фарфоровую кастрюлю объемом 2,5 л для сбора жидкости. Сборную конструкцию с загруженной плацентой поместили в рабочую камеру лабораторной микроволновой печи, работающей на частоте (2450 ± 50) МГц. Объем рабочей камеры СВЧ печи 32 литра. Активная мощность СВЧ излучения 900 ватт. Потребляемая мощность СВЧ печи 1400 ватт. Для осуществления предлагаемого способа получения биостимулятора из плаценты коров в данном примере провели три цикла СВЧ обработки по 20 минут. Общий объем выделившейся жидкой фазы составил 1100 миллилитров или 55% от массы взятого исходного сырья. Температура сырья по циклам поддерживалась в пределах 45-58^oC. К слитой жидкой фазе после охлаждения до комнатной температуры добавили 4200 мл 0,9% раствора натрия хлорида (физраствора) для получения соотношения 1: 4. Так как после объединения слитых фракций и взятия образца для контроля и анализов, осталось 1050 мл жидкости. Довели pH смеси 30% NaOH (4 мл) от 6,85 до 8,45 (норма по ТУ 7,5-9.0) и прокипятили в течение 10 минут. Экстракт охладили до комнатной температуры в проточной воде, отцентрифугировали при 4,5 тыс. об/мин 0,5 часа. Центрифугат с pH 8,55 профильтровали и розлили в флаконы по 200 мл, предварительно подготовленные и простерилизованные. Флаконы укупорили резиновыми пробками и закатали алюминиевыми колпачками.

Полученный препарат автоклавировали при 1,5 атм 1 час.

Выход препарата 4570 мл, pH после автоклавирования 8,05. Препарат стерильный.

Контроль качества полученного по предлагаемому способу препарата и определение его биологической активности параллельно с препаратом, полученным по существующему способу в полном объеме и в соответствии с ТУ 10-07-032-88 "Биостимульгин. Технические условия." По заключению лаборатории тканевых препаратов НИВС (научно-исследовательской ветеринарной станции) Свердловской области "Биостимульгин-С" соответствует контрольным параметрам по ТУ 10-07-032- 88, а биологическая активность препарата на 15% выше обычного препарата "Биостимульгин".

Опытная партия препарата "Биостимульгин-С" направлена в хозяйства области для производственной проверки на фермах КРС.

Пример 2. Послед общей массой 4,8 кг после выдержки в холодильнике обработали в СВЧ печи аналогично примеру 1. Обработку провели в три приема порциями плаценты в 1,6 кг. Температура прогрева в СВЧ печи составляла 45-50^oC. Общий выход жидкой составляющей составил 2,4 килограмма (50%). Выход препарата "Биостимульгин-С" составил порядка 9,6 кг. Расфасовка в стеклянные флаконы по 200 мл, закрытые резиновыми пробками и закатанные алюминиевыми колпачками. Общий вид препарата - опалесцирущая жидкость светло-коричневого цвета с молочным оттенком. При хранении наблюдается выпадение небольшого осадка, легко разбивающегося при встряхивании. РН-определенная на потенциометре РН-340 составляет после автоклавирования 8,05. Срок годности "Биостимульгина-С" аналогично препарату "Биостимульгин" принят 6 месяцев со дня изготовления при условии хранения в затемненном месте при T = 4-10^oC.

Представленные примеры показывают техническую осуществимость предложенного способа получения биостимулятора из плаценты коров при использовании существующих микроволновых печей и посуды, при этом сокращается количество технологических операций, общее время получения препарата, а качество препарата соответствует техническим условиям.

Таким образом, принимая во внимание вышеизложенные результаты, предложенный способ может рассматриваться как альтернативный существующему способ получения тканевого препарата из плаценты коров "Биостимульгин".

Формула изобретения

1. Способ получения биостимулятора из плаценты коров, включающий отбор последа от здорового животного, охлаждение и выдержку, отделение жидкой составляющей, смешивание жидкой составляющей с разбавляющей средой, перемешивание, центрифугирование, отделение надосадочной жидкости, расфасовку и стерилизацию, отличающийся тем, что отделение жидкой составляющей из плаценты производят путем обработки микроволновым излучением с частотой (2450 ± 50) МГц при нагреве сырья не выше 60^oC, причем жидкую составляющую отделяют самотеком.

2. Способ получения биостимулятора из плаценты коров по п.1, отличающийся тем, что в процессе микроволнового прогрева сырья жидкую фазу отделяют в количестве 30 - 60% по массе от исходного сырья, причем микроволновый прогрев производят циклами по 15 - 20 мин, а выделившуюся за цикл жидкую составляющую сливают, объединяют и используют все слитые фракции.

3. Способ получения биостимулятора из плаценты коров по пп.1 и 2, отличающийся тем, что в качестве разбавляющей среды для отделенной жидкой фазы из плаценты используют 0,9%-ный раствор натрия хлорида при соотношении с жидкой фазой 1 : 4 - 1 : 5 по массе.