Способ получения витамина е из гексановой фракции нативного сапропеля

 

Изобретение относится к медицине. Проводят последовательное извлечение водорастворимых веществ из нативного сапропеля 96%-ным этанолом, 40-45-минутную экстракцию гексаном и центрифугирование в течение 8-10 мин при 1600-2000 об/мин. Гексановый экстракт концентрируют и последовательно хроматографируют в 2-х системах: гексан и гексан-этилацетат (37:3). Способ позволяет сократить время получения продукта и более полно выделять продукт.

Изобретение относится к бальнеологии, а именно к способам получения отдельных компонентов концентратов липидных комплексов, содержащих смеси жирорастворимых витаминов, и может быть использовано при производстве отдельных компонентов гексановой фракции на мазевой основе при лечении ожогов и кожных заболеваний в практике лечебных учреждений.

Витамин E в составе липидного комплекса лечебных сапропелей является жирорастворимым антиоксидантом биологического происхождения или биоантиоксидантом, по присутствию которого можно контролировать качество природного сырья. Большая роль в создании антиокислительного фона сапропелей витамина E - антиокислителя фенольной природы определяется его способностью связывать активные свободные радикалы, наряду с аскорбиновой кислотой и рутином он является важным компонентом антиокислительной системы грязевых субстратов. Известна наиболее часто встречаемая форма витамина E в растениях -α-токоферол. Биопродуцентами витамина E лечебных грязей являются харовые или рдестовые водоросли, зеленые части прибрежных макрофитов и т.д.

Чаще всего повышенная концентрация витамина E в сапропелях сочетается с высоким содержанием липидной фракции, обладающей антимикробной активностью. В сапропелевых грязях неомыляемые вещества липидного комплекса обладают противовоспалительной и антибактериальной активностью в отношении некоторых штаммов микроорганизмов (золотистого стафилококка N 209, синегнойной и кишечной палочек N 675 и М₁₇, сарцине и микоиде). Нерастворимая в гексане фракция (хлороформная или неполярная) состоит из фосфолипидов, спиртов, стеринов, жирных кислот, пигментов. Зкспериментальные исследования свидетельствуют о выраженном противовоспалительном, рассасывающем и стимулирующем эффекте суммарных липидов и хлороформной фракции иловых сульфидных грязей.

Известен способ получения витамина E из суммарного липидного комплекса нативного сапропеля путем его 3-х-кратной экстракции смесью этанол-хлороформ и последующего извлечения из него α-формы витамина E. Недостатками способа являются многоступенчатость операций и высокий расход исходного объема лечебной грязи [1].

Известен также способ получения гексановой фракции из иловых сульфидных грязей, выбранный автором в качестве прототипа, согласно которому при идентификации в гексанорастворимой (неполярной части) обнаружено лишь 30-50% всех липидов, среди которых идентифицированы в основном углеводородные соединения (парафины, сквален, каротины). {1}. Однако указанный способ имеет ряд недостатков, а именно: извлекается только половина количества всех липидов, бальнеологически ценные компоненты которых оказываются неразделенными. Способ является незавершенным в отношении более узкого разделения хлороформной и гексановой фракций и выделения из них некоторых классов, заведомо способных вызывать лечебный эффект, что предполагает поиск препаратов со специфическим действием.

Задачей изобретения является уменьшение времени поучения суммарного липидного комплекса и извлечение из него одной из форм витамина Е. Поставленная цель достигается тем, что из нативного сапропеля удаляют водорастворимые вещества при добавлении 96% этанола, выдерживают 24 ч и проводят энергичное встряхивание 10-15 мин, затем получают гексановую фракцию при добавлении н-гексана и экстракцией им смеси на протяжении 40-45 мин; содержимое переносят в пробирки для центрифугирования и центрифугируют 8-10 мин при 1500-2000 об/мин, после расслоения смеси извлекают гексановый экстракт. Все операции выполняют в посуде из темного стекла. Результатом этих операций является получение суммарного липидного комплекса, который содержит основные жирорастворимые БАК-хлорофиллы, каротины каротиноида, витамины A и E и др.

Аликвоту концентрированного гексанового экстракта наносят на пластинку с закрепленным слоем силуфола и помещают в хроматографическую камеру с движущейся фазой - гексаном. После достижения фронтом растворителя верхнего края пластинку извлекают, просушивают в естественных условиях, затем вторично помещают в камеру с системой гексан-этилацетат (37:3) [2]. После 5-минутного просушивания при комнатной температуре проявляют по стандартному раствору свидетеля (раствор токоферола в масле) после окрашивания его в розовый цвет под действием раствора дипиридила и хлорного железа в абсолютном этаноле. Хроматограмму просматривали при длине волны 260-290 нм под ртутно-кварцевой лампой КФК-50. Пятна имели фиолетовое окрашивание и Rf на уровне свидетеля. Экстракция гексаном менее 40 мин нежелательна ввиду неполного извлечения липидного комплекса сапропеля. При использовании скорости центрифугирования 1000 об/мин конечный результат достигнут не был, а именно: разделения каротинов и витамина E при хроматографировании не происходило. В случае применения однократного хроматографирования в какой-либо из вышеупомянутых систем пятна витамина E при идентификации обнаружены не были, а просушивание хроматографических пластинок в сушильных шкафах приводило к потере бальнеологически ценных компонентов.

Пример 1. 100 г лечебной грязи средне- или высокозольной водорослевого происхождения заливают, примерно, 100 мл 96% этанола до покрытия грязи, выдерживают сутки, делят на несколько порций и проводят постоянное встряхивание в течение 15 мин. Жидкую фазу осторожно сливают и фильтруют через предварительно обезжиренный фильтр с сульфатом натрия до полного обезвоживания, затем объединяют с твердой фазой и проводят экстракцию объединенных извлечений после добавления 5 мл н-гексана 45 мин. Содержимое, разделенное на фазы, переносят в центрифужные пробирки и подвергают центрифугированию в течение 10 мин при 2 тыс. об/мин. Полученный объем гексанового экстракта (около 50 мл) концентрируют в ротационном испарителе до объема 3-5 мл и готовят аликвоты по 0,1 - 0,2 мл для хроматографирования.

Пример 2. К 100 г нативного сапропеля маслянистой консистенции с высоким содержанием жироподобных и восковых веществ добавляют около 10 мл 96% этанола и проводят энергичное встряхивание в течение 15 мин в пробирке из темного стекла. Затем быстрым движением добавляют 5 мл н-гексана и проводят экстракцию на протяжении 45 мин. Наблюдают расслоение экстракта, полученную смесь центрифугируют 8 мин при 1500 об/мин. Отбирают пипеткой гексановый слой, который и анализируют методом тонкослойной хроматографии.

Результат: cпособ значительно сокращает время операций для выделения суммарного липидного комплекса и уменьшает расход исходного объема лечебной грязи по сравнению с известными способами.

Преимущества заявляемого способа заключаются в следующем.

Способ позволяет в несколько раз сократить исходный объем лечебной грязи, уменьшить материальные затраты на приобретение реактивов, снизить время на получение витамина E из суммарного липидного комплекса для создания препаратов на мазевой основе для лечения больных с ожогами, кожными и др. заболеваниями.

Литература 1. Матис Е.Я., Стариков Н.М., Кураколова Е.А., Буркова В.Н., Титов В.И., Низкодубова C.B. Получение липидного концентрата из пелоидов //Вопросы курортологии и физиотерапии, N 2.- 1985. - С. 63-65.

2. Э.Хефтман //Хроматография, ч.1, М., 1986.- с. 327.

Формула изобретения

Способ получения витамина Е из гексановой фракции нативного сапропеля, включающий извлечение липидного концентрата органическими растворителями, отличающийся тем, что из сапропеля последовательно удаляют водорастворимые вещества 96% этанолом, затем получают гексановую фракцию экстракцией в течение 40-45 мин при скорости 1600-2000 об/мин, которую концентрируют, хроматографируют для выделения витамина Е в двух системах гексан и гексан - этилацетат (37 : 3).