Способ профилактики пролиферативной витреоретинопатии

 

Изобретение относится к медицине, офтальмологии. Используют препарат с антиоксидантной активностью - карцинин. Карцинин вводят парабульбарно 1 раз в сутки в течение 5 дней. Способ предупреждает разрушение внутренней пограничной мембраны сетчатки. 2 з.п. ф-лы, 8 ил.

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано при разработке методов профилактики ПРОЛИФЕРАТИВНОЙ ВИТРЕОРЕТИНОПАТИИ (ПВР).

ПВР - сложный многофакторный процесс, сопровождающийся формированием эпиретинальной мембраны с контрактильными свойствами, приводящими к ретракционной отслойке сетчатки.

Профилактика и лечение этого заболевания не разработаны.

Доказано, что в основе цитопатогенеза ПВР ключевую роль играют макрофаги, активно секретирующие хемоаттрактанты, факторы роста. В процессе функциональной деятельности макрофагов происходит выделение активных форм кислорода, в результате чего активизируются окислительные процессы и процессы перекисного окисления липидов с появлением токсических гидроперекислов жирных кислот. Не исключена возможность, что образовавшиеся гидроперекислы играют роль в повреждении внутренней пограничной мембраны сетчатки с последующим развитием эпиретинальной мембраны сетчатки. Поэтому применение препаратов с антиоксидантными свойствами будет способствовать сохранению внутренней пограничной мембраны сетчатки и в связи с этим являться ингибирующим фактором в развитии ПВР.

Среди препаратов с антиоксидантной активностью, применяемых в медицине, известность получил природный антиоксидант карнозин, обладающий липидной пероксидазной активностью и способностью ингибировать гидроксильные радикалы.

Карнозин применяется в офтальмологии при лечении гнойных язв роговицы для стимуляции процессов заживления (Майчук Ю.Ф., Формазюк В.Е., Сергиенко В.И. Вестник офтальмологии 1997, 113, 6, 27-31) и как профилактическое средство, направленное на ингибицию прогрессирования старческой катаракты (Boldirev A. A. , Dupin A.M., Bunin A.Ya., Babizhayev M.A. and Severin S.E. The antioxidative properties of carnosine, a natural histidine containing dipeptide. Biochemical Intern. 1987, 15, 1105-1113). Существенным недостатком карнозина является его нестойкость к водной среде, где он быстро гидролизуется и теряет свою активность. Кроме того, карнозин быстро разрушается под действием ферментов (карнозиназы и других дипептидаз).

Техническим результатом изобретения является ингибиция развития ПВР в глазу с помощью парабульбарного введения карцинина. Карцинин был открыт в ткани сердечной мышцы (Carcinus maenas). (M.A. Babizhayev, M.S. Seguin, J. Gueyne, R. P. Evstigneeva, E. A. Ageyeva, and Zheltukhina. L Carnosine β-alanyl - L - histidine) and carcinine β-alanylhistidine) act as natural antioxidants with hydroxyl radical scavening and lipid peroxidase activities. Biochemical journ. 1994, 304, 509-516).

Карцинин так же, как и карнозин, является природным универсальным водорастворимым антиоксидантном с липидной пероксидазной активностью и ингибирующей активностью к гидроксильным радикалам. В отличие от карнозина карцинин является стойким к действию ферментов, что обуславливает пролонгированный характер его действия. Карцинин был получен от фирмы EXSYMOL SAM (MONACO) для экспериментально-клинической апробации.

Технический результат достигается путем направленного действия карцинина на предупреждение разрушения внутренней пограничной мембраны сетчатки, которое является начальным звеном в развитии ПВР. Возможно, наряду с многими причинами, лежащими в основе разрушения внутренней пограничной мембраны, определенную роль играют процессы перекисного окисления липидов, возникающие при активной функциональной деятельности макрофагов с выделением кислорода. По-видимому карцинин, защищая гидрофильные и липофильные структуры внутренней пограничной мембраны сетчатки от окислительного стресса, предупреждает ее разрушение, (фиг. 8) Для получения экспериментальной модели ПВР с участием преимущественно макрофагальных элементов, отражающих особенности патогенеза, мы использовали естественный комплекс цитокинов (ЕКЦ), (свиной вариант), ЕКЦ получен на кафедре иммунологии РГМУ, состоял из комплекса эндогенных иммунопептидов, выделенных из крови животного. В состав ЕКЦ входили: интерлейкин-1, интерлейкин-6, фактор некроза опухоли, трансформирующий фактор роста β-1 (Gancovscaya L.V., Kovalchuk L.V., Gvozdeva N.A. et al. Protocol to prepare cytokines, inhibiting migration of neitrophils and macrophages. Certificate of authorship 1494274 Moscow 1989).

ЕКЦ вводился в стекловидное тело в дозе 600 мкм в 0,15 мл через pars plana цилиарного тела в оба глаза кроликов породы шиншилла с массой тела 2,0-2,5 кг.

Особенность модели заключалась в том, что введение в стекловидное тело ЕКЦ инициировало воспалительную реакцию, аттрактируя из кровяного русла преимущественно моноцитарные элементы, которые оседали на мембранах коллагенового каркаса стекловидного тела и на внутренней пограничной мембране сетчатки. Клинически определялась картина кратковременного слабого увеита с формированием пленчатых помутнений в стекловидном теле. Через месяц глаза успокаивались. На внутренней поверхности сетчатки в нелеченых случаях формировались тяжи эпиретинальных мембран с развитием складчатости сетчатки и ее отслойкой. К концу месяца животные забивались, глаза энуклеировались и подвергались гистологическому исследованию.

Гистологически на внутренней пограничной мембране сетчатки образовывались конгломераты макрофагов, под которыми определялась ограниченная ее деструкция (фиг. 1 и фиг. 2). В этой зоне формировались пролифераты из глиальных и фибробластических элементов - начальная стадия ПВР (фиг. 3). Разрастание очагов пролиферации приводило к формированию эпиретинальной мембраны, которая вызывала складчатость сетчатки и ее ретракционную отслойку (фиг. 4).

В качестве ингибитора ПВР использовали природный дипептид карцинин.

Исследование проводили следующим образом.

1. Моделирование ПВР путем введения в полость стекловидного тела свиного ЕКЦ в дозе 600 мкм объемом 0,15 мл в оба глаза кроликов.

2. I серия опытов. Одновременно с экспериментальным моделированием ПВР в левый глаз парабульбарно вводили карцинин в дозе 20 мМ объемом 0,5 мл. Правый глаз оставался контрольным, где парабульбурно вводился физиологический раствор в том же объеме. Парабульбарные инъекции повторялись в течение последующих 5 дней, один раз в сутки.

3. II серия опытов. Через 3 дня после начала моделирования в левый глаз парабульбарно вводился карцинин в дозе 20 мМ объемом 0,5 мл с повторными инъекциями в течение последующих 5 дней один раз в сутки. Правый глаз оставался контрольным, парабульбарно вводился физиологический раствор в том же объеме, что и карцинин.

4. III серия опытов. Одновременно с экспериментальным моделированием в левый глаз интравитреально вводился карцинин в дозе 20 мМ, объемом 0,5 мл. Правый глаз оставался контрольным.

Предложенный способ был применен на 13 кроликах, 26 глазах.

Клиническое наблюдение во всех экспериментах проводилось в течение месяца. Через месяц животные забивались, энуклеированные глаза подвергались гистологическому исследованию.

Результаты эксперимента показали следующее.

I серия. 3 кролика, 6 глаз. Моделирование согласно описанной методике. Одновременно в правый глаз парабульбарно вводили 0,5 мл физиологического раствора, в левый глаз - парабульбарно 0,5 мл карцинина в дозе 20 мМ. Лечение проводили один раз в сутки в течение 5 дней.

Клинически на обоих глазах развилась картина легкого увеита. В дальнейшем на правом глазу развивалась картина ПВР, на левом - сетчатка у всех животных была интактной. Гистологически у всех животных выявлена картина ингибиции ПВР в левом глазу по сравнению с контрольным.

Таким образом, способ осуществляют следующим образом. Для профилактики пролиферативной витреоретинопатии парабульбарно вводят карцинин в концентрации 20 мМ в 0,5 мл в течение 5 дней, один раз в сутки. При необходимости возможно повторение курса лечения.

Пример 1. Кролик 106 (протокол патогистологического исследования 1086 - правый глаз; 1087 - левый глаз).

Моделирование: интравитреально вводили свиной ЕКЦ 0,15 мл (600 мкм). Сразу после моделирования в правый глаз парабульбарно вводили 0,5 мл физиологического раствора, в левый глаз парабульбарно 0,5 мл карцинина в дозе 20 мМ в течение 5 дней.

Через месяц кролик забит. Глаза энуклеировались, подвергались гистологическому исследованию: фиксация в 10% формалине, обезвоживание в спиртах восходящей крепости, заливка в парафин, парафиновые срезы окрашивались гематоксилин-эозином.

При гистологическом исследовании. На правом глазу - картина ПВР с формированием эпиретинальной мембраны и складчатости сетчатки (фиг. 5). На левом глазу сетчатка была интактивной (фиг. 6).

Заключение. Выявлена выраженная ингибиция ПВР под влиянием карцинина в левом глазу после парабульбарных инъекций.

II серия. 3 кролика, 6 глаз.

Моделирование: в оба глаза вводился 0,15 мл свиного ЕКЦ (600 мкм). Через 3 дня после моделирования в правый глаз парабульбарно вводился 0,5 мл физиологического раствора, в левый глаз парабульбарно вводился карцинин 0,5 мл в дозе 20 мМ. Инъекции повторялись один раз в сутки, 5 дней.

Через месяц животные забивались. Глаза энуклеировались и подвергались гистологическому исследованию.

При гистологическом исследовании как в опытных, так и в контрольных глазах развивалась картина ПВР с формированием выраженной эпиретинальной мембраны.

Заключение. Отсроченное, через 3 дня введение карцинина не оказывало ингибирующего действия. В контроле и в опыте развивалась картина ПВР.

Ill серия. 7 кроликов, 14 глаз.

Моделирование: в оба глаза интравитреально вводили 0,15 мл свиного ЕКЦ (600 мкм). Сразу после моделирования интравитреально в правый глаз вводили 0,15 мл физиологического раствора (контроль), в левый глаз - 0,15 мл карцинина в дозе 20 мМ (опыт).

Через месяц животные забивались, глаза энуклеировались и подвергались гистологическому исследованию.

При гистологическом исследовании: на правом контрольном глазу выявлялась картина развитой ПВР с хорошо выраженной эпиретинальной мембраной. На левом глазу у большинства животных обнаружены пролиферативные процессы в сетчатке лишь в начальной стадии своего развития. То есть пролиферативные процессы были значительно слабее выражены по сравнению с контролем.

Пример 2. Кролик 111 (Протокол патогистологического исследования: 1128 - правый глаз (контроль), 1129 - левый глаз (опыт)).

Моделирование: вводили свиной ЕКЦ 0,15 мл (600 мкм) интравитреально в оба глаза. Одновременно с моделированием в левый глаз интравитреально вводили карцинин в дозе 20 мМ (0,51%) в 0,15 мл, правый глаз оставался контрольным.

Клинически в обоих глазах в течение последующей недели отмечалась картина слабого увеита, который исчезал через две недели. К концу месяца на правом глазу выявились тяжи на поверхности сетчатки с частичной ретракционной отслойкой, на левом глазу тяжистость также отмечалась, но была выражена заметно слабее.

Через месяц кролик был забит. Глаза энуклеировались и подвергались обработке для гистологического исследования.

При гистологическом исследовании на правом глазу выявилась картина типичной ПВР. На левом глазу пролиферативные процессы были слабее выражены и представляли лишь начальные явления ПВР. Отмечались очаги деструкции внутренней пограничной мембраны, соответственно которой небольшие пролифераты глиальных клеток (фиг. 7), тяжи в стекловидном теле.

Заключение. Отмечалась частичная ингибиция ПВР после интравитреальной инъекции карцинина. Пролифераты были менее распространенными и более тонкими, чем в контроле, характеризуя лишь начальную стадию развития ПВР.

Общее заключение.

В экспериментах на кроликах, где главным критерием оценки было гистологическое исследование, показано ингибирующее действие карцинина на ПВР.

Наиболее эффективным было парабульбарное введение препарата, который можно вводить повторно, создавая необходимую терапевтическую концентрацию.

При парабульбарном введении карцинина одновременно с экспериментальным моделированием ингибирующее действие на ПВР получено в 100% случаев.

Более позднее введение препарата после начала моделирования не оказывало профилактического действия на развитие ПВР.

Интравитреальное введение карцинина, проводимое ввиду его травматичности лишь однократно, значительно уменьшало интенсивность пролиферативных процессов в сетчатке, но полностью не ингитбировало их развитие.

Учитывая то, что экспериментальная модель ПВР является адекватной клиническим проявлениям болезни, возможно использование данного способа профилактики у больных, относящихся к категории риска развития ПВР.

Формула изобретения

1. Способ профилактики пролиферативной витреоретинопатии, включающий использование препарата с антиоксидантной активностью, отличающийся тем, что в качестве антиоксидантного препарата используют Карцинин, который вводят парабульбарно в концентрации 20 мМ в объеме 0,5 мл.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что Карцинин вводят в течение 5 дней.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что Карцинин вводят один раз в сутки.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8