Способ получения средства, обладающего кардиопротекторной активностью

 

Изобретение относится к области фармации. Измельченный растительный материал - листья какалии копьевидной экстрагируют 70% этанолом дважды при соотношении сырье:экстрагент 1:16 в течение 16 и 10 ч, концентрируют, упариванием под вакуумом. Сырье после спиртовой экстракции дополнительно экстрагируют кипящей водой дважды по 60 мин при соотношении сырье:экстракт 1:15. Водные экстракты упаривают, объединяют с водным остатком спиртовой экстракции, доупаривают и сушат в вакуум-сушильном аппарате. Выход готового продукта составляет 40.3% от массы растительного материала. Изобретение позволяет реализовать указанное назначение. 7 табл.

Изобретение относится к области фармации и касается способа получения средства из растительного сырья, обладающего кардиопротекторной активностью.

Известен способ получения настойки боярышника, в основу которого положена противоточная 3-ступенчатая экстракция сырья 70% этанолом в батарее из трех перколяторов [Бреднева Н.Д., Муравьев И.А. Разработка технологии производства настойки из свежесобранных плодов боярышника // Фармация. - 1987. - т.XXXVI. - №4. - C.33-37]. Недостатками известного метода являются длительность производства (6 дней) и низкий выход экстрактивных веществ (2.5%).

Технический результат изобретения - получение средства из листьев какалии копьевидной, обладающего выраженной кардиопротекторной активностью, которая достигается за счет увеличения выхода действующих веществ.

Для достижения указанного технического результата измельченный растительный материал (листья какалии копьевидной) экстрагируют 70% этанолом в соотношении сырье:экстрагент 1:(16-18) с учетом коэффициента водопоглощения при комнатной температуре и постоянном помешивании. Извлечение фильтруют в сборник. Экстракцию повторяют дважды. Время экстракции при 1-м контакте фаз - 16 ч, 2-м контакте фаз - 10 ч. Спиртовые извлечения объединяют и упаривают до 1/4 первоначального объема. Шрот после спиртовой экстракции дополнительно экстрагируют водой при 100°С в соотношении сырье:экстрагент 1:(15-20) с учетом коэффициента водопоглощения и постоянном помешивании. Извлечение фильтруют в сборник. Экстракцию повторяют дважды. Время экстракции при 1-м и 2-м контактах фаз - по 60 мин. Водные извлечения объединяют со спиртовыми и упаривают до 1/3 первоначального объема. Полученный продукт очищают сепарированием, высушивают в вакуум-сушильном аппарате и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Выход готового продукта составляет 40.3%.

Выявленные отличительные признаки позволяют сделать вывод о соответствии предлагаемого технологического решения критерию "новизна".

Предложенный способ позволяет получить субстанцию, представляющий собой рассыпчатый аморфный негигроскопичный порошок коричневого цвета с горько-кислым вяжущим вкусом и своеобразным запахом. Потеря массы при высушивании составляет 2.14%.

Способ иллюстрируется нижеследующими примерами.

Пример 1

1 кг листьев какалии копьевидной измельчают на мельнице до размера частиц диаметром (сито №50 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревателем и заливают 16 л 70% этанола. Экстрагируют при комнатной температуре и периодическом помешивании в течение 16 ч. Извлечение фильтруют в сборник. Проводят еще одну экстракцию в тех же условиях в течение 10 ч, подавая в экстрактор 70% этанол в количестве, равном объему слитого. Первый слив - 12.4 л, второй - 11.8 л. Объединенные спиртовые извлечения упаривают примерно на 1/4 первоначального объема. Сырье после спиртовой экстракции заливают 15 л воды. Экстрагируют при 100°С и постоянном помешивании 60 минут. Извлечение фильтруют в сборник. Проводят еще одну экстракцию в тех же условиях, подавая в экстрактор воду в количестве, равном объему слитого извлечения. Первый слив - 14.2 л, второй слив - 14.0 л. Спиртовые и водные извлечения объединяют, упаривают примерно до 1/3 первоначального объема. Кубовый остаток из четырех извлечений подвергают очистке сепарированием и сушат на нержавеющих противнях в вакуумной сушилке при температуре 60°С в течение 8 часов и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 0.403 кг готового продукта, что составляет 40.3% экстрактивных веществ от массы исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой рассыпчатый аморфный негигроскопичный порошок коричневого цвета с горько-кислым вяжущим вкусом и приятным ароматическим запахом. Потеря массы при высушивании составляет 2.14%.

Пример 2

1 кг листьев какалии копьевидной измельчают на мельнице до размера частиц диаметром (сито №50 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревателем и заливают 14 л 70% этанола. Экстрагируют при комнатной температуре и периодическом помешивании в течение 10 ч. Извлечение фильтруют в сборник. Проводят еще одну экстракцию в тех же условиях в течение 8 ч, подавая в экстрактор 70% этанол в количестве, равном объему слитого. Первый слив - 10.7 л, второй - 10.2 л. Объединенные спиртовые извлечения упаривают примерно на 1/4 первоначального объема. Сырье после спиртовой экстракции заливают 20 л воды. Экстрагируют при 100°С и постоянном помешивании 60 минут. Извлечение фильтруют в сборник. Проводят еще одну экстракцию в тех же условиях, подавая в экстрактор воду в количестве, равном объему слитого извлечения. Первый слив - 18.5 л, второй слив - 18.2 л. Спиртовые и водные извлечения объединяют, упаривают примерно до 1/3 первоначального объема. Кубовый остаток из четырех извлечений подвергают очистке сепарированием и сушат на нержавеющих противнях в вакуумной сушилке при температуре 60°С в течение 8 часов и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 0.396 кг готового продукта, что составляет 39.6% экстрактивных веществ от массы исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой рассыпчатый аморфный негигроскопичный порошок коричневого цвета с горько-кислым вяжущим вкусом и приятным ароматическим запахом. Потеря массы при высушивании составляет 2.00%.

Пример 3

1 кг листьев какалии копьевидной измельчают на мельнице до размера частиц диаметром (сито №50 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревателем и заливают 14 л 60% этанола. Экстрагируют при комнатной температуре и периодическом помешивании в течение 12 ч. Извлечение фильтруют в сборник. Проводят еще одну экстракцию в тех же условиях в течение 10 ч, подавая в экстрактор 60% этанол в количестве, равном объему слитого. Первый слив - 10.0 л, второй - 9.8 л. Объединенные спиртовые извлечения упаривают примерно на 1/4 первоначального объема. Сырье после спиртовой экстракции заливают 18 л воды. Экстрагируют при 100°С и постоянном помешивании 75 минут. Извлечение фильтруют в сборник. Проводят еще одну экстракцию в течение 30 минут в тех же условиях, подавая в экстрактор воду в количестве, равном объему слитого извлечения. Первый слив - 16.5 л, второй слив - 15.8 л. Спиртовые и водные извлечения объединяют, упаривают примерно до 1/3 первоначального объема. Кубовый остаток из четырех извлечений подвергают очистке сепарированием и сушат на нержавеющих противнях в вакуумной сушилке при температуре 60°С в течение 8 часов и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 0.392 кг готового продукта, что составляет 39.2% экстрактивных веществ от массы исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой рассыпчатый аморфный негигроскопичный порошок коричневого цвета с горько-кислым вяжущим вкусом и приятным ароматическим запахом. Потеря массы при высушивании составляет 2.16%.

1. Нами проведен фитохимический анализ сухого экстракта. На основании качественного фитохимического анализа сухого экстракта установлено наличие:

1) органических кислот

Методом хроматографии на бумаге (FN-16, 10°С, восходящий ток растворителя) в системах растворителей бутанол - муравьиная кислота - вода (18:2:5) (I направление), этиловый эфир - муравьиная кислота - вода (18:5:9) (II направление) после обработки 0.5% раствором бромфенолового синего (рН 9.2) обнаружены винная кислота - R_f=0.32 (I), R_f=0.45 (II); лимонная кислота - R_f =0.48 (I), R_f=0.56 (II); щавелевая кислота - R _f=0.53 (I), R_f=0.60 (II); яблочная кислота - R_f=0.68 (I), R_f=0.63 (II); фумаровая кислота - r_f=0.82 (I), R_f=0.96 (II); янтарная кислота - R_f=0.85 (I), R_f=0.90 (II); пировиноградная кислота - R_f=0.91 (I), R_f=0.98 (II). Идентификацию проводили в сравнении с аутентичными образцами.

2) β-каротина

0.05 г полученного экстракта растворяют в 10 мл гексана, к 2 мл раствора прилить 2 мл насыщенного раствора хлорида сурьмы (III) в хлороформе, сильно встряхнуть, развивается синее окрашивание (β-каротин).

Методом хроматографии в тонком слое сорбента (пластинки марки "Sorbfil ПТСХ-П-А-УФ") в системе хлороформ - этиловый спирт (19:1) при проявлении хроматограмм 10% раствором фосфорномолибденовой кислоты в этиловом спирте и выдерживании в сушильном шкафу при температуре 80°С 5 минут обнаружено 2 зоны синего цвета на желто-зеленом фоне с R_f=0.87 (β-каротин) и с R_f=0.92 (неидентифицирован).

3) фенолокислот

Методом хроматографии на бумаге (FN-6, восходящий ток растворителя) в системах растворителей бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:2) (I направление), 2% уксусная кислота (II направление) при просматривании хроматограммы в УФ-свете до и после обработки 10% раствором гидроксида калия в 96% этаноле обнаружены кофейная кислота - R_f=0.80 (II), R_f=0.30 (II); хлорогеновая кислота - R_f=0.63 (I), R_f=0.56 (II). Идентификацию проводили в сравнении с аутентичными образцами.

4) дубильных веществ

0.05 г полученного экстракта растворяют в 5 мл воды очищенной, к 2 мл раствора добавляют 10 мл 10% раствора уксусной кислоты и 5 мл 10% раствора свинца уксуснокислого, образуется осадок (гидролизуемые дубильные вещества). Реакционную смесь фильтруют, к фильтрату добавляют 2 капли 1% раствора железоаммонийных квасцов и 0.1 г свинца уксуснокислого, развивается черно-зеленое окрашивание (конденсированные дубильные вещества).

5) кумаринов

Методом хроматографии в тонком слое сорбента (пластинки марки "Silufol") в системе хлороформ - этиловый спирт (9:1) после обработки хроматограмм реактивом Паули и выдерживании в сушильном шкафу при температуре 105°С 10 минут обнаружено три зоны красного цвета с R_f=0.50 (эскулетин), R _f=0.76 (умбеллиферон), R_f=0.88 (скополетин). Идентификацию проводили в сравнении с аутентичными образцами.

2. Разработана методика количественного определения суммы органических кислот (в пересчете на яблочную кислоту) с применением потенциотитриметрического метода.

Около 0.200 г (точная навеска) сухого экстракта помещают в коническую плоскодонную колбу вместимостью 250 мл с притертой пробкой, прибавляют 100 мл дистиллированной воды, нагревают содержимое колбы на водяной бане до 70°С и поддерживают эту температуру в течение часа. После охлаждения извлечение фильтруют в мерную колбу вместимостью 200 мл через бумажный фильтр, который промывают 10 мл дистиллированной воды и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой (раствор А).

10 мл раствора А пропускают через ионообменную колонку, которую промывают 50 мл воды. Элюат и промывные воды переносят в стаканчик для потенциометрического титрования. Титрование проводят 0.1 N раствором NaOH до значения рН 7.0. Титр раствора NaOH устанавливают по гидрофталату калия (Государственная фармакопея т.11. - вып.1. - 1990).

Содержание суммы органических кислот Х (%) в сухом экстракте в пересчете на яблочную кислоту вычисляют по формуле

где V_NaOH - объем 0.1 N NaOH, пошедшего на доведение рН исследуемого раствора до значения 7.0, мл;

V' - объем раствора сухого экстракта, мл (200 мл);

V'' - объем пробы, пропущенной через ионообменную колонку, мл (10 мл);

К - поправка на титр 0.01 N NaOH;

0.0067 - количество яблочной кислоты в г, соответствующее точно 1 мл 0,1 N NaOH;

m - масса навески сухого экстракта, г;

W - потеря в массе при высушивании сырья, %.

Найдено 25.5±0.23%

3. Разработана методика количественного определения суммы каротиноидов (в пересчете на β-каротин) с применением спектрофотометрического метода.

Около 0.200 г (точная навеска) сухого экстракта помещают в коническую плоскодонную колбу вместимостью 250 мл с притертой пробкой, прибавляют 50 мл гексана, тщательно перемешивают на встряхивателе в течение часа. После этого извлечение фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажный фильтр, который промывают 10 мл гексана и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой (раствор А).

Оптическую плотность раствора измеряют на спектрофотометре при длине волны 450 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют гексан.

Содержание суммы каротиноидов Х (мг%) в пересчете на β-каротин в сухом экстракте вычисляют по формуле

где D - оптическая плотность исследуемого раствора;

V - объем раствора сухого экстракта, мл (100 мл);

m - масса навески сухого экстракта, г;

W - потеря в массе при высушивании сырья, %;

2770 - удельный показатель поглощения β-каротина при длине волны 450 нм в гексане.

Найдено суммы каротиноидов в пересчете на β-каротин 560 мг%.

Предлагаемый способ получения не требует сложной схемы очистки, позволяет извлечь максимальное количество действующих веществ благодаря применению двух экстрагентов, позволяет получить продукт постоянного состава. Технология может быть внедрена на предприятиях по выпуску лекарственных препаратов и оздоровительных средств.

Для установления оптимальных технологических режимов было изучено влияние основных факторов: состава и природы экстрагента, его соотношение с сырьем, температурного режима, степени измельчения сырья, продолжительности и кратности экстракций на процессы экстрагирования растительного материала.

Количественная оценка велась по сумме органических кислот (в пересчете на яблочную кислоту) и сумме каротиноидов (в пересчете на β-каротин).

Метрологическая характеристика определения суммы органических кислот и суммы каротиноидов проводилась на образцах листьев какалии копьевидной, собранных в Мухоршибирском районе республики Бурятия в 2002 году (таблица 1).

Одним из основных факторов, определяющих полноту экстракции, является тип и концентрация экстрагента, который действует как активный компонент системы, оказывая существенное влияние на качество, полноту и скорость экстракции биологически активных веществ из растительного материала. В качестве экстрагентов были использованы горячая вода и этиловый спирт следующих концентраций: 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 95%. Результаты представлены в таблице 2.

Установлено, что при экстракции этиловым спиртом в концентрации выше 70% выход каротиноидов заметно не увеличивается; горячая вода экстрагирует максимальное количество органических кислот. Исходя из полученных результатов, для экстракции каротиноидов выбран 70% этанол, а для экстракции органических кислот - горячая вода.

Измельчение твердого продукта с целью ускорения процесса диффузионного извлечения биологически активных веществ является одной из важных стадий подготовки сырья, которая обеспечивает полноту выхода экстрактивных веществ. Для изучения влияния степени измельченности растительного материала на выход суммы органических кислот и суммы каротиноидов сырье подвергалось измельчению до частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 0.5; 1.0; 2.0; 3.0; 5.0 мм. Установлено, что оптимальной степенью измельченности для данного вида сырья является размер частиц 0.5-1.0 мм (таблица 3).

Проведено изучение зависимости выхода БАВ от соотношения сырья и экстрагента, в результате чего были подобраны оптимальные соотношения для экстракции спиртом 1:(16:18) и для экстракции водой 1:(15-20) (таблица 4).

Для интенсификации процессов перехода биологически активных веществ из растительного сырья необходимо учитывать фактор температуры. С повышением температуры экстракции растворимость компонентов увеличивается. На основании данных анализа установлено, что оптимальным экстрагентом для извлечения органических кислот является кипящая вода, в то время как для экстракции спиртом выбрана комнатная температура во избежание образования артефактов и разрушения термолабильных каротиноидов (таблица 5).

Для определения продолжительности и кратности числа экстракций изучена зависимость времени достижения равновесной концентрации в системе сырье:экстрагент для спиртовой (А) и водной (Б) экстракции.

А. Проводили экстракцию измельченного сырья 70% этиловым спиртом в соотношении 1:16 при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Через заданные промежутки времени (1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 24 ч) извлечение фильтровали (1 контакт фаз), упаривали до водного остатка, приливали гексан и определяли сумму каротиноидов в пересчете на β-каротин. Аналогичным образом проводили две последующие экстракции отжатого сырья, прибавляя каждый раз 70% этиловый спирт в объеме, равном слитому (2-й и 3-й контакты фаз), при этом также анализировали содержание суммы каротиноидов.

Б. Проводили экстракцию измельченного сырья кипящей водой в соотношении 1:15 на водяной бане с обратным холодильником при 100°С и постоянном помешивании. Через заданные промежутки времени (30, 45, 60, 75, 90, 120 мин) извлечение фильтровали (1 контакт фаз) и определяли сумму органических кислот в пересчете на яблочную кислоту. Аналогичным образом проводили две последующие экстракции отжатого сырья, прибавляя каждый раз воду в объеме, равном слитому (2-й и 3-й контакты фаз), при этом также анализировали содержание суммы органических кислот.

Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что равновесное состояние наступает при первом контакте фаз через 16 ч и втором контакте фаз через 10 ч в случае спиртовой экстракции (таблица 6); при первом и втором контакте фаз через 60 мин в случае водной экстракции (таблица 7).

В случае спиртовой и водной экстракций в течение первого контакта фаз экстрагируется около до 75 и 60% суммы каротиноидов и органических кислот (соответственно), второго - до 25 и 35%, третьего до 5%, т.е. до 95% каротиноидов и органических кислот извлекается в течение первых двух контактов фаз, поэтому в целях экономии применение третьего контакта фаз посчиталось нецелесообразным для обоих экстрагентов.

Предлагаемый способ по сравнению с известными позволяет получить препарат постоянного состава с выраженной кардиопротекторной активностью, что обуславливается значительно большим содержанием действующих веществ.

Рассчитать экономическую целесообразность предлагаемого способа в настоящее время не представляется возможным, однако вышеуказанные преимущества в сочетании с простой схемой получения способствуют рациональному использованию лекарственного растительного сырья и определяют перспективность внедрения данного способа в фармацевтическую промышленность.

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЭКСТРАКТА ИЗ ЛИСТЬЕВ КАКАЛИИ КОПЬЕВИДНОЙ.

Кардиопротекторное действие экстракта какалии копьевидной

Эксперименты проведены на 50 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г. Объектом исследования был сухой экстракт, выделенный из листьев какалии копьевидной. Для оценки его фармакологической активности было воспроизведено острое повреждение миокарда катехоламинами [Бартыков, 1999]. Модель адреналинового некроза миокарда вызывали однократным внутримышечным введением в область бедра животных 0,1% раствора адреналина гидрохлорида в дозе 2 мг/кг массы крысы. С фармакотерапевтической целью опытной группе крыс интрагастрально вводили 1 раз в сутки экстракт из листьев какалии копьевидной в дозе 5 мг/кг массы крысы, в виде водного раствора в объеме 1 мл, за 5 дней до введения адреналина и далее в течение 3 суток до окончания наблюдения. В качестве препарата сравнения был использован амиодарон в дозе 9 мг/кг [Машковский, 1993]. Контрольная группа животных получала дистиллированную воду в эквиобъемной количестве по аналогичной схеме. Исследования функционального состояния миокарда животных проводили через 2, 8, 24 и 72 ч после введения адреналина.

Для оценок функционального состояния миокарда и фармакотерапевтического влияния экстракта из листьев какалии копьевидной были использованы следующие методы: а) определение биохимических показателей сыворотки крови: активность аспартатаминотрансферазы (АсАТ) и аланинаминотрансферазы (АлАТ), лактатдегидрогеназы и ее фракции ЛДГ₁, а также рассчитывали коэффициент де Ритиса общепринятыми методами [Меньшиков и др., 1987]; б) изучение уровня содержания малонового диальдегида (МДА) в гомогенате сердечной мышцы [Стальная и др., 1977], диеновых конъюгатов (ДК) [Гаврилов и др., 1983] и МДА в сыворотке крови [Темирбулатов и др., 1981]; в) исследование содержания в сыворотке крови холестерина и общих липидов общепринятыми методами [Меньшиков и др., 1987]; г) регистрация электрокардиографических показателей на электрокардиографе ЭК1К - 1 в шести стандартных отведениях. При этом оценивали частоту и ритмичность сердечных сокращений, изменения комплекса QRS, сегмента ST и зубца Т [Зюзенков, 1998; Мурашко и др., 1998]; д) определение органовесовых коэффициентов при изучении антистрессорной активности испытуемого средства [Автандилов, 1976; Selye, 1950]; е) изучение механизма свертывания крови с помощью антикоагулянтного теста Беркарда, модифицированного Баркаганом [Методы исследования гемостаза, 1993]; ж) изучение развития и выраженности стрессорной реакции. При этом учитывались критерии: увеличение массы надпочечников, инволюция тимуса, появление язвенных поражений в слизистой оболочке желудка.

Полученные в ходе экспериментов данные обработаны методом вариационной статистики с применением t-критерия Стьюдента [Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. - М.: ГЭОТАР-МЕД. 2001. - 256 с.].

В ходе эксперимента установлено, что уже через 2 часа после введения белым крысам сухого экстракта данного растения в указанной дозе наблюдалось снижение токсического действия адреналина на миокард. Отмечали снижение интенсивности процессов ПОЛ: уменьшение МДА в гомогенате сердечной мышцы, МДА и ДК в сыворотке крови у животных на 6, 47, 46% соответственно, чем у крыс в контроле. Наряду с этим, наблюдали тенденцию к снижению активности АсАТ, и уменьшался коэффициент де Ритиса на 23% по сравнению с контролем. Кроме того, активность ЛДГ снизилась на 16% и ее сердечной фракции - на 19% у крыс, получавших сухой экстракт. Отмечается на этом фоне также холестерин- и липидснижающее действие экстракта на 21 и 14% соответственно по сравнению с контролем. Отмеченное благоприятное влияние исследуемого экстракта на функцию миокарда у крыс наблюдается через 8-24 часа после введения адреналина. Через 72 часа наблюдения изучаемое фитосредство способствует снижению активности АсАТ и АлАТ на 36 и 23%, уменьшению содержания в сыворотке крови МДА и ДК на 5 и 34% соответственно. Кроме того, отмечено у животных снижение уровня активности ЛДГ и ЛДГ ₁ на 22 и 43%, уменьшение количества холестерина и общих липидов на 36 и 67% соответственно при введении сухого экстракта какалии копьевидной. Препарат сравнения амиодарон значительно уступал по степени влияния на аналогичные показатели функции миокарда у крыс с повреждением миокарда.

При электрокардиографическом исследовании наблюдали, что в контрольной группе животных в 1 случае из 5 в первые 2 часа после введения адреналина отмечены признаки трансмурального инфаркта миокарда (увеличение зубца S и формирование отрицательного зубца типа QS). Во всех других случаях отмечалась выраженная ишемия миокарда - подъем сегмента ST над изолинией на 2,5-4 мм и инверсия зубца Т, отражающие дисффузные нарушения метаболизма в миокарде белых крыс. Регистрировали нарушение ритма в виде одиночных и групповых экстрасистол, вплоть до фибрилляции желудочков. В опытных группах, на фоне применения экстракта и амиодарона, число экстрасистол уменьшалось в 3 и 4 раза по сравнению с контролем. Формирование зубца QS не отмечалось в группах животных, получавших амиодарон и исследуемое фитосредство. Признаки ишемии миокарда были менее выраженными на фоне применения этих средств, подъем ST составлял 1-3 мм, а инверсия зубца Т фиксировалась с меньшим постоянством.

При исследовании механизма свертывания крови установлено, что на 2 ч опыта у животных контрольной группы снижается скорость образования тромбопластина и тромбина на 16%. На фоне введения сухого экстракта и амиодарона ускоряется свертывание плазмы крови. Через 8 ч от начала введения адреналина в контрольной группе крыс отмечается активация фибринолиза на фоне умеренной активации свертывания плазмы. При введении указанных средств (экстракта и препарата сравнения) обеспечивается сопряженность свертывающей и фибринолитических систем. На 24 ч от начала введения адреналина в контрольной группе крыс отмечается высокая свертывающая активность плазмы. При введении сухого экстракта какалии копьевидной жидкостное состояние крови обеспечивалось более высоким гемостатическим потенциалом. При введении экстракта отмечается торможение образования тромбопластина и тромбина на 76% по сравнению с контролем. Препарат сравнения амиодарон уступал сухому экстракту по аналогичному действию.

Формула изобретения

Способ получения средства, обладающего кардиопротекторной активностью, путем экстрагирования этанолом и водой, упариванием и сушкой, отличающийся тем, что предварительно измельченное до размера частиц 0,5-1,0 мм сухое растительное сырье - листья какалии копьевидной - дважды экстрагируют при комнатной температуре 70%-ным этанолом при соотношении сырье:экстрагент (1:16) втечение 16 ч и 10 ч, соответственно, с последующим объединением экстрактов, отгоном этанола, и дважды по 60 мин кипящей водой при соотношении сырье:экстрагент (1:15) с последующим объединением экстрактов, фильтрованием, объединением с водным остатком спиртового извлечения, упариванием и сушкой в вакуум-сушильном аппарате.