Способ прогнозирования энцефалопатии новорожденного
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству. Для осуществления способа исследуют ткань плаценты, из которой готовят 10% гомогенат и определяют активность НАДФН-оксидазы по восстановлению 2,6-дихлорфенилиндофенола в присутствии НАДФН. Результаты реакции учитывают спектрофотометрически при длине волны 600 нм. При величине активности НАДФН-оксидазы, равной 13,5 ед. оптической плотности и выше, прогнозируют развитие энцефалопатии у новорожденного. Способ нетравматичен, позволяет с высокой точностью прогнозировать развитие энцефалопатии новорожденного.
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству, и найдет широкое применение для объективного прогнозирования развития энцефалопатии новорожденного.
Проблема энцефалопатии плода и новорожденного, а также ее последствия для детей в раннем неонатальном периоде - одна из самых важных в перинатологии. Повреждения центральной нервной системы, являющиеся ведущими причинами перинатальной заболеваемости и смертности, отмечаются у 20-65% новорожденных (Афонин А.А. Адаптация и развитие детей, рожденных женщинами с индуцированной беременностью и обоснование системы превентивных и реабилитационных мероприятий. Автореф. дис....докт. мед. наук. - 1993, - 40 с.).
Анализ патентной и научно-медицинской литературы позволил установить, что существующие методы прогнозирования поражения ЦНС (энцефалопатии) у новорожденных относятся в основном к травматическим.
Известен способ прогнозирования перинатального повреждения ЦНС (энцефалопатии) (патент РФ N 2121682, 1995) по определению относительного содержания в пуповинной крови теофилинчувствительных клеток, наличие которых отражает сохранение неврологической симптоматики к концу первого года жизни.
Известен способ диагностики энцефалопатии новорожденного (патент РФ N 2067420, 1996) по аудиторскому и спектрографическому анализу плача ребенка, где учитывается также спектр крика.
Известен способ диагностики энцефалопатии (патент РФ N 2123670, 1998), по которому последовательно регистрируют температуру теплового излучения 52 точек поверхности черепа, а также наружных слуховых проходов. Снижение температуры, соответствующей 1,0-2°С, и наличие «температурной мозаики» свидетельствуют об ишемическом поражении мозга.
Известен «Способ оценки структурных изменений мозга при гипоксически-ишемическом поражении ЦНС у новорожденных (патент РФ N 2148262, 2000) путем определения в ликворе у новорожденного ребенка на 2-е и 6-е сутки его жизни содержания малонового диальдегида (МДА). Повышение уровня МДА на 6-е сутки в 2 раза относительно нормы свидетельствует о сохранении патологического процесса в мозге.
Известен способ прогнозирования развития энцефалопатии у доношенного новорожденного (патент РФ N 2167608, 2000), по которому рассчитывают коэффициенты градации ультразвукового исследования маточных артерий, артерии пуповины и средней мозговой артерии плода.
Известен способ диагностики стадий дисциркуляторной энцефалопатии (патент РФ N 2207570, 2003), согласно которому в высушенной при определенных условиях капле сыворотки крови фиксируют наличие штриховых трещин в ее краевой зоне, центре или краевой и центральной зонах, что позволяет определить различные стадии энцефалопатии.
Основными недостатками описанных выше способов диагностики и прогнозирования энцефалопатии новорожденных являются, прежде всего, или травматичность, или необходимость использования дорогостоящей аппаратуры, что ограничивает применение методов в практической медицине. К существенным недостаткам в ряде случаев можно отнести сложность расчета и длительность их проведения.
Прототипом данного изобретения избран способ прогнозирования энцефалопатии у новорожденных (патент РФ N 2157534, 1999).
Сущность способа-прототипа состоит в том, что в пуповинной крови определяются антигены локусов А, В, DR системы HLA, и при наличии одного из антигенов А32, В8, В27, DR3 или их сочетания прогнозируют перинатальную гипоксически-ишемическую энцефалопатию у новорожденных.
Данный способ обладает рядом несовершенств:
1. Метод неспецифичен (наличие антипов различных локусов HLA-системы, в частности В27, имеет место при синдроме Рейтера, B8 - при синдроме Бехчета, синдроме красной волчанки, нарушениях функционального состояния щитовидной железы, аутоиммунном гепатите, при таком неврологическом заболевании, как Myastenia gravis (Клиническая иммунология и аллергология. М.: Медицина. 1990. Т.2. Под ред. Л.Йегера).
2. Метод очень трудоемкий.
3. Для выполнения метода требуется высококвалифицированный специалист-иммунолог.
Указанные недостатки устраняются в заявляемом изобретении. Задача изобретения: разработка неинвазивного способа, позволяющего с высокой точностью прогнозировать развитие энцефалопатии новорожденного ребенка.
Поставленная задача решается следующим образом: на заключительной стадии родов после отделения плаценты берут навески ткани (500 мг), готовят 10% гомогенат, в котором определяют активность НАДФН-оксидазы, и при величине, равной 13,5 ед. оптической плотности и выше прогнозируют развитие энцефалопатии у новорожденного.
Важная роль плаценты в функционировании биологической системы плацента-плод подтверждена многочисленными исследованиями. Установлено также, что плацентарная недостаточность часто приводит к прерыванию беременности и является одной из причин перинатальных нарушений состояния плода. Основным патогенетическим звеном поражения мозга плода при плацентарной недостаточности является нарушение интенсивности кровообращения в функциональной системе «плацента-плод», сопровождающееся симптомами хронической кислородной недостаточности плода, при которой его постоянный уровень оксигенации ниже оптимального.
Последнее время все больше ученых относят к причинам отклонений социальной и биологической дезадаптации в неонатальном и более позднем детстве перенесенное поражение мозга, обусловленное внутриутробным кислородным дефицитом.
Общепринятая концепция возникновения патологических сдвигов при поражении мозга на клеточном и молекулярном уровнях включает положение о нарушении процессов энергообразования. В основе последних лежит модификация окислительно-восстановительных реакций, сопровождающихся увеличением количества восстановленных форм НАДФН, уровень которых зависит от активности НАДФН-окидазы.
Учитывая ведущую роль метаболизма плаценты в характере церебральных нарушений у новорожденного, проблему прогнозирования энцефалопатии можно решать, изучая обменные процессы в ней в послеродовом периоде, так как эти методы являются неинвазивными и будут способствовать выяснению патогенеза заболевания новорожденного (Погорелова Т.Н., Орлов В.И., Друккер Н.А., Крукиер И.И. Молекулярные аспекты плацентарной недостаточности. Ростов-на-Дону. Изд-во РГУ, 1997).
Такой подход может служить существенным фактором, позволяющим при разработке тактики лечения энцефалопатии у новорожденных применять патогенетическое лечение.
Пример 1. З-ая, 27 лет. История болезни N298. Поступила в родильное отделение 29.12.2000 г. Дз.: беременность 39-40 недель, фетоплацентарная недостаточность. 1 период родов.
30.12.2000 г. произошли спонтанные роды. Родился ребенок женского пола, масса тела 3200,0, оценка по шкале Апгар - 8 баллов.
В 10% гомогенате плаценты определена активность НАДФН-оксидазы, которую изучали по восстановлению 2,6-дихлорфенилиндофенола (ДХФИФ) в присутствии НАДФН.
Опытные пробы содержали 2 мл фосфатного буфера (рН - 7,2), 0,2 мл 0,05% раствора MgCl2×6Н2О и 0,1 мл 0,05% раствора ДХФИФ. К данной смеси добавляли 0,1 мл 10% гомогената плаценты, в качестве субстрата использовали 0,2 мл 0,006 М НАДФН. Контрольной пробой служили смеси без добавления субстрата. Результаты реакции учитывали в течение 2-2,5 минут непосредственно в кювете спектрофотометра при длине волны 600 нм. Расчет проводили в условных единицах оптической плотности. Коэффициент молярности экстинции для НАДФН (6,22×106 см×м-1) и для 2,6-ДХФИФ (21×106 см×м-1).
Активность НАДФН-оксидазы соответствовала 13,5 ед. оптической плотности, что позволило прогнозировать развитие энцефалопатии у новорожденного. Ребенок осмотрен педиатром и невропатологом через два месяца. Клиническая картина характеризовалась общим двигательным беспокойством, повышением мышечного тонуса и сухожильных рефлексов, тремором верхних конечностей, горизонтальным и вертикальным нистагмом. Данная картина заболевания свидетельствовала о наличии энцефалопатии.
Пример 2. Ив-ва, 29 лет. История родов N181. Поступила в родильное отделение 24.12.2000 г. Дз.: беременность 39-40 недель, 1 период родов. Произошли спонтанные роды. Родился ребенок мужского пола, масса тела 3650,0, оценка по шкале Апгар - 9 баллов.
В 10% гомогенате плаценты определена активность НАДФН-оксидазы, которая составила 13,4 ед. оптической плотности, что свидетельствовало об отсутствии возможности развития энцефалопатии при величинах активности НАДФН-оксидазы ниже граничных.
По заявляемому способу активность НАДФН-оксидазы определена в плаценте у 181 родильницы, среди которых у 122 - величина ее составила от 7,3 до 13,4 ед. опт. плотности., а у 59 - была от 13,5 до 18,9 ед. опт. плотности. У всех детей, в плаценте матерей которых активность НАДФН-оксидазы была от 13,5 ед. оптической плотности и выше, обнаружена энцефалопатия на первом году жизни. Дети, родившиеся у женщин с активностью НАДФН-оксидазы в плаценте 13,4 ед. и ниже, были здоровы.
Вышеизложенное подтверждает прогностическую ценность заявляемого метода.
Таким образом, заявляемый способ более эффективен по сравнению с известными и обладает рядом преимуществ:
1. Обладает высокой точностью. В 100% случаев была прогнозирована энцефалопатия.
2. Нетравматичен.
3. Исключает необходимость многократного проведения исследования.
4. Клиническое применение способа позволит своевременно провести превентивную терапию поражений центральной нервной системы у новорожденных.
Способ прогнозирования энцефалопатии у новорожденного, включающий исследование биологического материала, отличающийся тем, что в ткани плаценты, из которой готовят 10%-ный гомогенат, определяют активность НАДФН-оксидазы по восстановлению 2,6-дихлорфенилиндофенола в присутствии НАДФН, результаты реакции учитывают спектрофотометрически при длине волны 600 нм и при величине активности НАДФН-оксидазы, равной 13,5 ед. оптической плотности и выше, прогнозируют развитие энцефалопатии у новорожденного.
