Способ диагностики мембранодеструктивного эффекта противотуберкулезной химиотерапии

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, и применяется для диагностики мембранодеструктивного эффекта противотуберкулезной химиотерапии. Для этого проводят хроматографическое исследование липидного спектра плазмы крови. Далее у больных туберкулезом легких, получающих противотуберкулезную химиотерапию, определяют относительное содержание фракции лизофосфатидилхолина плазмы крови. При значениях выше 12% диагностируют мембранодеструктивный эффект противотуберкулезной химиотерапии. Изобретение может быть использовано в диагностических целях для раннего выявления мембранодеструктивного эффекта противотуберкулезной химиотерапии и определения показания к проведению корригирующей терапии. 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии.

Противотуберкулезная химиотерапия токсична для организма человека и вызывает различные нежелательные побочные эффекты [1, 2, 3]. Основой мембран всех клеток организма, определяющей их структуру и функциональное состояние является липидный бислой. Любое изменение в составе мембран клеток отражается на липидном спектре плазмы крови и является чувствительным маркером патологических процессов происходящих в организме [RU 2184964, опубл. 10.07.2002].

Из уровня техники известен способ диагностики вирусной этиологии поражения печени [RU 2184964, опубл. 10.07.2002], который позволяет диагностировать вирусную этиологию поражения печени путем определения относительного содержания фракции лизофосфатидилхолина в сыворотке крови в пределах 5-7%.

Известен способ выявления токсического эффекта противотуберкулезной химиотерапии (Рясенский Д.С., Гришкина Н.А., Асеев А.В. Влияние туберкулезной инфекции и противотуберкулезной химиотерапии на липидный состав плазмы крови // Эпидемиология и инфекционные болезни. – 2018. – Т.3, №5. – С. 220-224), путем определения полного липидного и фосфолипидного спектра плазмы крови. Недостатком данного способа является высокая трудоемкость, связанная с необходимостью выделения и идентификации множества фракций как фосфолипидов, так и общих липидов. Кроме того, в данном способе не проводится выделение фракции токсичного лизофосфатидилхолина, а анализируется фракция суммарных лизофосфолипидов.

Наиболее близким по технической сущности к заявленному решению является способ определения особенностей липидного спектра мембран моноцитов у больных туберкулезом легких до лечения и на фоне приема противотуберкулезных препаратов (Рясенский Д.С., Асеев А.В., Эльгали А.И. Особенности липидного спектра мембран моноцитов у больных туберкулезом легких до лечения и на фоне приема противотуберкулезных препаратов // Врач-аспирант. – 2017 – №6.4 (85) – С. 458-463), путем определения фосфолипидного спектра мононуклеаров периферической крови. Недостатками данного способа является то, что в данном способе не проводится выделение фракции лизофосфатидилхолина, а определяется суммарная фракция лизофосфолипидов. Так же в данном способе определяется липидный спектр мембран мононуклеаров, который не отражает состояние мембран других клеток организма.

Задача, на решение которой направлено заявленное изобретение заключается в разработке способа, который позволил бы диагностировать мембранодеструктивный эффект противотуберкулезной химиотерапии, отражающийся на изменении липидного состава мембран клеток и как следствие накопления лизофосфатидилхолина в плазме крови, на ранних сроках противотуберкулезной химиотерапии.

Технический результат заключается в повышении точности прогнозирования течения туберкулезного процесса, позволяющего назначить корригирующую терапию в конце интенсивной фазы противотуберкулезной химиотерапии при выявлении уровня относительного содержания лизофосфатидилхолина в плазме крови выше 12%.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе диагностики мембранодеструктивного эффекта противотуберкулезной химиотерапии, включающем хроматографическое исследование липидного спектра плазмы крови, у больных туберкулезом легких, получающих противотуберкулезную химиотерапию, определяют относительное содержание фракции лизофосфатидилхолина плазмы крови и при значениях выше 12% диагностируют мембранодеструктивный эффект противотуберкулезной химиотерапии. В случае выявления мембранодеструктивного эффекта больным назначают корригирующую терапию и тем самым повышают эффективность противотуберкулезного лечения.

Новыми ранее неизвестными признаками заявленного способа диагностики мембранодеструктивного эффекта противотуберкулезной химиотерапии являются:

1. Определение фракции лизофосфатидилхолина плазмы крови больных туберкулезом легких на фоне противотуберкулезной химиотерапии.

2. Определение пределов значения фракции лизофосфатидилхолина плазмы крови у больных туберкулезом легких, получающих и не получающих противотуберкулезные препараты.

3. Разработан и предложен уровень содержания фракции лизофосфатидилхолина плазмы крови, выше которого диагностируют мембранодеструктивный эффект противотуберкулезной химиотерапии.

Диагностику проводят путем хроматографического определения относительного содержания фракции лизофосфатидилхолина плазмы крови. Рассчитывают значение фракции лизофосфатидилхолина в процентах от суммы всех фракций фосфолипидов, выделенных из плазмы крови больного туберкулезом, получающего противотуберкулезную химиотерапию. При значениях фракции лизофосфатидилхолина более 12% диагностируют мембранодеструктивный эффект противотуберкулезной химиотерапии.

Способ разработан на основе анализа данных фосфолипидного спектра плазмы крови 184 больных туберкулезом легких в конце интенсивной фазы химиотерапии (приём 60 доз комбинации противотуберкулезных химиопрепаратов).

Предлагаемый способ диагностики мембранодеструктивного эффекта противотуберкулезной химиотерапии осуществляют в следующей последовательности.

Кровь для исследования забирают в объеме 10мл, утром до завтрака из локтевой вены в вакуумную пробирку без наполнителя. В пробирки добавляют цитрат натрия 1 мл на 10 мл крови. Пробирки отстаивают при температуре 15°С в течении 120 мин, при этом цельная кровь разделяется на 2 слоя. Верхний слой отбирают и центрифугируют на скорости 7000 об/мин. Оставшиеся клеточные элементы оседают на дно центрифужной пробирки, а полученную плазму крови в объеме 3 мл используют для получения липидного экстракта. Экстракцию проводят в течение суток в 5 мл хлороформ-метаноловой смеси (1:2 по объему) при температуре 15°С. Для очистки от крупнодисперсных примесей экстракты центрифугируют на скорости 7000 об/мин в течении 15 мин. Далее к экстрактам приливают 0,02%-ный раствор хлорида кальция. Пробирки в течение 5 минут интенсивно встряхивают. После этого их центрифугируют в течение 5 мин на скорости 7000 об/мин. Содержимое пробирок разделяется на 2 фазы: хлороформенную и водно-метаноловую. Водно-метаноловую фазу удаляют. Для тонкослойной хроматографии фосфолипидов используют систему растворителей, состоящую из хлороформа, метанола и аммиака в соотношении 13,4:4,6:1. Составляющие смеси смешивают непосредственно перед хроматографией. Хроматографические пластинки используют с силикагелем размером частиц от 0,044 мм до 0,037 мм, что соответствует 350-400 меш. Длина пластинок не менее 20 см. Заполненной камере с хроматографической пластинкой дают насытиться в течение 10-15 мин. При хроматографическом разделении фосфолипидов используют непрерывное градиентное элюирование. Ток растворителей продолжают в течение 2,5 часов при температуре окружающей среды 30°С, добиваясь разделения минорных фракций лизофосфолипидов. После хроматографические пластинки извлекают и высушивают при температуре 30°С в течение 20 минут.

Для окрашивания хроматографических зон хроматографическую пластинку выдерживают в парах концентрированной серной кислоты, под действием которой при дальнейшем нагревании происходит обугливание липидов, содержащихся в хроматографических зонах. Для этого используют термостойкую стеклянную камеру размером 22х14х5 см. На дно камеры наливают 2 мл концентрированной серной кислоты и устанавливают параллельно друг другу стеклянные трубочки диаметром 8 мм. Камеру разогревают до 180°С, при этом она насыщается парами кислоты. Перед помещением в нее хроматографической пластинки последнюю также нагревают до 100°С. Через 20 минут хроматографические пластинки извлекают и сканируют в отраженном свете. Денситометрирование проводят с учетом интенсивности окраски фона по участку между хроматографическими зонами. Получают денситометрическую кривую описывающую распределение оптической плотности на участках хроматограммы соответствующих фракциям фосфолипидного спектра мононуклеаров периферической крови. Для расчета площади пиков с частичным наложением их друг на друга используют аппроксимацию. Рассчитанные площади пиков денситометрической кривой пропорциональны содержанию липидов в соответствующих фракциях. Для определения процентного содержания лизофосфатидилхолина сумма площади всех пиков денситометрической кривой делят на площадь пика соответствующего фракции суммарных лизофосфолипидов.

Исследование мононуклеаров периферической крови описанным способом позволило определить, что у 36 здоровых добровольцев (без диагностированной инфекционной или соматической патологии) уровень лизофосфатидилхолина находился в пределах от 8% до 9%. У больных туберкулезом легких (184 пациента) до назначения противотуберкулезной химиотерапии данный показатель находился в пределах от 6% до 7%. Назначение противотуберкулезной химиотерапии сопровождалось повышением относительного содержания лизофосфатидилхолина и его значения находились в пределах от 12% до 17%. Статистическая обработка полученных результатов у здоровых лиц и больных туберкулезом легких до лечения и после назначения противотуберкулезной химиотерапии и сравнение средних показывает достоверное увеличение относительного содержания лизофосфатидилхолина плазмы крови у пациентов получавших противотуберкулезную химиотерапию (p<0,05).

Предлагаемый способ позволяет диагностировать мембранодеструктивный эффект противотуберкулезной химиотерапии при накоплении лизофосфатидилхолина в плазме крови свыше 12%.

Пример 1. Больной Григорьев Г.К. Диагноз: Инфильтративный туберкулез легких в фазе диссеминации, S1-S2. Диагноз подтвержден культуральным и рентгенологическим методами. Бациловыделение методом посева +, выявлена чувствительность МБТ к препаратам первого ряда. Проводимое лечение: основной курс химиотерапии по первому стандартному режиму. Химиотерапевтические препараты: изониазид, рифампицин, пиразинамид, этамбутол. До начала химиотерапии уровень лизофосфатидилхолина плазмы крови 6%. После проведения интенсивной фазы химиотерапии (60 доз комбинации препаратов) уровень лизофосфатидилхолина составил 12%, что позволяет диагностировать мембранодеструктивный эффект противотуберкулезной химиотерапии и назначить корригирующую терапию.

Пример 2. Больная Косаткина Л.М. Диагноз: Очаговый туберкулез легких в фазе инфильтрации, S1-S2/S1. Диагноз подтвержден молекулярно-генетическим и рентгенологическим методами. Бациловыделение методом посева -, ПЦР мокроты +, выявлена чувствительность МБТ к изониазиду и рифампицину. Проводимое лечение: основной курс химиотерапии по первому стандартному режиму. Химиотерапевтические препараты: изониазид, рифампицин, пиразинамид, этамбутол. До начала химиотерапии уровень лизофосфатидилхолина плазмы крови 7%. После проведения интенсивной фазы химиотерапии (60 доз комбинации препаратов) уровень лизофосфатидилхолина составил 16%, что позволяет диагностировать мембранодеструктивный эффект противотуберкулезной химиотерапии и назначить корригирующую терапию.

Пример 3. Больной Лобачев К.К. Диагноз: Очаговый туберкулез легких в фазе инфильтрации, S1-S2. Диагноз подтвержден молекулярно-генетическим и рентгенологическим методами. Бациловыделение методом посева +, ПЦР мокроты +, выявлена чувствительность МБТ к изониазиду и рифампицину. Проводимое лечение: основной курс химиотерапии по первому стандартному режиму. Химиотерапевтические препараты: изониазид, рифампицин, пиразинамид, этамбутол. До начала химиотерапии уровень лизофосфатидилхолина плазмы крови 6%. После проведения интенсивной фазы химиотерапии (60 доз комбинации препаратов) уровень лизофосфатидилхолина составил 7%, что позволяет диагностировать мембранодеструктивный эффект противотуберкулезной химиотерапии. Специфическая корригирующая терапия не требуется.

Таким образом, у всех больных со значением фракции лизофосфатидилхолина в плазме крови свыше 12% была начата корригирующая терапия.

Изобретение может быть использовано в диагностических целях для раннего выявления мембранодеструктивного эффекта противотуберкулезной химиотерапии и определения показания к проведению корригирующей терапии.

Литература

1. Перельман М.И. Молекулярная медицина и лечение туберкулеза / М.И. Перельман, Ю.Н. Хомяков, В. И. Киселев и др. // Проблемы туберкулеза. – 2001. - № 5. – С. 5-7.

2. Маслаускене Т.П., Николаева С.В., Побочное действие противотуберкулезных препаратов // Сибирский медицинский журнал. -2005. - №3. – С. 13 – 19.

3. Есимова И.Е. Структурные особенности мембран и интенсивность процессов перекисного окисления липидов в мононуклеарах крови при диссеминированном туберкулезе легких / И.Е. Есимова, В.В. Новицкий, А.К. Стрелис и др // Фундаментальные исследования. – 2006. - №2. – С. 75 – 76.

Способ диагностики мембранодеструктивного эффекта противотуберкулезной химиотерапии, включающий хроматографическое исследование липидного спектра плазмы крови, отличающийся тем, что у больных туберкулезом легких, получающих противотуберкулезную химиотерапию, определяют относительное содержание фракции лизофосфатидилхолина плазмы крови и при значениях выше 12% диагностируют мембранодеструктивный эффект противотуберкулезной химиотерапии.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к способу оценки состояния мононуклеаров периферической крови, включающий определение фосфолипидного спектра мембран мононуклеаров периферической крови.
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования исхода проникающего ранения глазного яблока у взрослого населения в момент его первичного обращения к врачу-офтальмологу.
Изобретение относится к медицине, в частности к лабораторной диагностике, ревматологии, ортопедии и травматологии, и может быть использовано для диагностики молекулярных фенотипов остеоартрита.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии. Предложен способ комбинированного лечения немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) IB - III стадии.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гинекологии и репродуктологии, и касается прогнозирования готовности эндометрия к успешной имплантации эмбриона у женщин с маточной формой бесплодия.

Изобретение относится к патологической анатомии и может быть использовано для полуколичественной визуальной оценки синтеза регуляторного белка PDCD4 в гистологических срезах ткани иммуногистохимическим методом с детекцией в ядре и цитоплазме.
Группа изобретений относится к фармации и медицине. Предложено применение композиции в получении жидкого продукта для профилактики или лечения индивидуума, имеющего нарушенные уровни в плазме одного или нескольких полярных липидов: фосфатидилхолина (РС) PC aa C36:6, PC aa C38:0, PC aa C38:6, PC aa C40:6, PC ae C40:6 и ряда других, причём указанная композиция включает по меньшей мере один витамин группы В, выбранный из витамина B6, витамина B12 и витамина B9 (варианты).

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и инфектологии, и касается прогнозирования развития неспецифических осложнений острых кишечных инфекций с синдромом гемоколита у детей.

Изобретение относится к медицинской иммунологии и может быть использовано для определения функциональной активности классического пути системы комплемента. Для этого проводят реакцию лизиса эритроцитов барана, сенсибилизированных антителами кролика (ЕА), с 1% сывороткой крови человека.

Изобретение относится к области медицины, а именно профилактической медицине, и раскрывает способ прогнозирования значений концентрации холинэстеразы в сыворотке крови у работающих в условиях экспозиции винилхлоридом со стажем более 5 лет.

Изобретение относится к области медицины и может найти применение в диагностике стадии фиброза печени у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С (ХВГС). Согласно предлагаемому способу определяют методом ДНК комет степень повреждений ДНК лимфоцитов периферической крови, осуществляют клинический и общетерапевтический биохимический анализ крови, с использованием предсказательной математической модели по результатам анализов пациентов с ХВГС находят коэффициенты порядковой логистической регрессии с регуляризацией, с помощью которых рассчитывают значение вспомогательных показателей es1 и es2 по формулам es1=exp(-0,933-0.0498*Возраст+0,410*Эритроциты-0,0128*АСТ-0,014*АЛТ-0,053*Глобулины-0,023*%ДНК в хвосте кометы+0,0278*Гемоглобин); es2=exp(-6,497-0,043*Возраст+2,417*Эритроциты-0,012*АСТ-0,014*АЛТ-0,053*Глобулины-0,023*%ДНК в хвосте кометы+0,0,27*Гемоглобин), где ехр - экспоненциальная функция; возраст - возраст пациента (в годах); Эритроциты – содержание эритроцитов; ACT – аспартатаминотрансфераза; АЛТ – аланинаминотрансфераза; Глобулин – содержание глобулина в периферической крови, г/л; %ДНК в хвосте кометы – содержание ДНК в хвосте кометы лимфоцитов периферической крови у i-того пациента (%). Затем вычисляют значения вероятности P для каждой стадии фиброза по формулам и устанавливают ту стадию фиброза печени, которая соответствует максимальному значению вероятности. Изобретение обеспечивает повышение достоверности и точности определения стадии фиброза печени и характеризуется малой инвазивностью и безопасностью для пациентов. 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу сравнительного исследования эффективности локальных кровоостанавливающих средств (ЛКС) в эксперименте in vitro, отличающемуся тем, что из полотна ЛКС с помощью Dermo-Punch получают цилиндр диаметром, равным внутреннему сечению Dermo-Punch и вакутайнера, образцы ЛКС и вакутайнеры выдерживают в термостате при +37°С 10 минут, после чего забирают кровь вакуумным способом и в течение 15 секунд на дно вакутайнера погружают локальные кровоостанавливающие средства, пробирки закупоривают и инкубируют 30 минут при +37°С, затем центрифугируют для получения сыворотки крови, исследуют концентрацию кальция в плазме крови и сравнивают значения в контрольной группе, в которой не производилось погружение образца в кровь донора, и группах исследования, и если значения концентрации кальция в группе исследования меньше, чем в контрольной и других группах, то это свидетельствует о выраженной эффективности локального кровоостанавливающего средства. Изобретение обеспечивает повышение точности и объективизацию исследований при разработке экспериментальных образов гемостатических средств локального действия. 1 табл., 1 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к способу получения В-клеток, секретирующих антиген-специфические антитела. Для получения B-клеток проводят следующие этапы: получение B-клеток из крови кролика; мечение IgG+-B-клеток и/или CD138+-B-клеток; инкубацию B-клеток при температуре 37°C в течение одного часа в среде для совместного культивирования перед размещением меченых B-клеток в виде одиночных клеток с последующим совместным культивированием с фидерными клетками в среде для совместного культивирования; выбор B-клетки, пролиферирующей на этом этапе; получение B-клетки. Способ также может включать этап центрифугирования размещенных по отдельности В-клеток перед совместным культивированием. Фидерными клетками являются мышиные клетки EL-4 B5, а фидерная смесь содержит интерлейкин-1-бета, фактор некроза опухоли альфа, клетки золотистого стафилококка штамма Cowan, BAFF, интерлейкин-2, и/или интерлейкин-10, и/или интерлейкин-6, и/или интерлейкин-4. Для получения антител берут популяцию зрелых B-клеток, полученную из крови кролика; проводят мечение IgG+-B-клеток и/или CD138+-B-клеток по меньшей мере одной флуоресцентной меткой; инкубируют B-клетки при температуре 37°C в течение одного часа в среде для совместного культивирования перед размещением одиночных клеток из популяции меченых B-клеток в отдельные контейнеры; культивируют размещенные по отдельности B-клетки в присутствии фидерных клеток и фидерной смеси; определяют специфичность связывания антител и аминокислотную последовательность вариабельных доменов легкой и тяжелой цепей специфически связывающихся антител путем ПЦР с обратной транскрипцией; вводят нуклеиновую кислоту, кодирующую вариабельные домены легкой и тяжелой цепей моноклонального антитела для экспрессии антитела; вводят нуклеиновую кислоту в клетку; культивируют клетку и выделяют антитело из клетки или клеточного супернатанта. Группа изобретений позволяет быстро охарактеризовать специфичность связывания моноклональных антител, полученных из отдельных В-клеточных клонов, полученных из крови кролика. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 13 табл., 22 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, и применяется для диагностики мембранодеструктивного эффекта противотуберкулезной химиотерапии. Для этого проводят хроматографическое исследование липидного спектра плазмы крови. Далее у больных туберкулезом легких, получающих противотуберкулезную химиотерапию, определяют относительное содержание фракции лизофосфатидилхолина плазмы крови. При значениях выше 12 диагностируют мембранодеструктивный эффект противотуберкулезной химиотерапии. Изобретение может быть использовано в диагностических целях для раннего выявления мембранодеструктивного эффекта противотуберкулезной химиотерапии и определения показания к проведению корригирующей терапии. 3 пр.

Наверх