Питательная среда для размножения на стадии пролиферации крыжовника сорта "розовый-2"

Изобретение относится к области биотехнологии. Предлагается питательная среда, которая содержит следующие компоненты (мг/л): аммоний азотнокислый 200-360, калий азотнокислый 750-1550, кальций азотнокислый 650-800, магний сернокислый 120-250, калий фосфорнокислый 300-370, борная кислота 6,0-6,4, цинк сернокислый 8,0-9,2, калий йодистый 0,075-0,085, натрий молибденовокислый 0,2-0,3, медь сернокислая 0,02-0,03: кобальт хлористый 0,02-0,03, железный(П) комплекс гидроксиэтилидендифосфоновой кислоты 15,2-60,8, миоинозит 100, тиамин гидрохлорид 0,5, пиродоксин гидрохлорид 0,5, никотинамид 0,5; глицин 1000, 6-бензиламинопурин 0,3, сахароза 30000, агар 6000, остальное вода до 1 л. Питательная среда обеспечивает увеличение коэффициента размножения крыжовника сорта «Розовый-2» в 1,36 - 1,82 раза по сравнению со средой Кворина-Лепуавра, при этом в 1,3-2,0 раза увеличивается и средняя длина побегов. 2 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области биотехнологии и сельского хозяйства, а именно касается питательных сред различного минерального и органического состава, предназначенных для культивирования ягодных и плодовых культур, которые непосредственно могут быть использованы в процессе микроклонирования крыжовника сорта «Розовый-2» на стадии его пролиферации.

Описаны питательные среды различного минерального и органического состава, предназначенные для культивирования ягодных и плодовых растений [Murashige Т., Skoog F.A revised for rapid growth and bioassays with tobako tissue culture // Physiol. Plantarum. 1962. V. 15. №3. P. 473-497; RU 2063682, A01H 4/00, 1996; Hunkova С.М., Libiakova G., Fejer J., Vugovic T. //Genetika.2018.V. 50. №1, P. 351-356].

Вместе с тем также известно, что даже для каждого сорта в рамках одного вида, исходя из его биологических требований, необходимо подбирать определенный питательный состав [Hedtrich С.М., Feucht W. Die Bedeutung der Meristem-Vermehrung-der derzeitige Stand beim Beeren-Obst//Obstbau (Bonn). 1981. V. 6. №3. P. 82-86]. Однако среди выявленных аналогов не выявлены питательные среды, позволяющие именно для крыжовника сорта Розовый-2 на стадии пролиферации при микроразмножении получить высокие коэффициенты размножения и длину побегов.

Аналогом предлагаемой в заявке питательной среды является известная питательная среда для размножения различных ягодных и плодовых культур, представляющая собой модифицированный сиреневой кислотой состав Мурасиге-Скуга, включающий макро- и микро-элементы в виде минеральных солей, а также смесь сернокислого железа и динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (Na2ЭДТА), позиционируемые как комплекс FеЭДТА, и специальные органические добавки для интенсификации микроразмножения [RU 2063682, А01Н 4/00, 1996]. Данная питательная среда содержит аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, кальций азотнокислый, магний сернокислый, марганец сернокислый, калий фосфорнокислый, железо сернокислое, (Na2ЭДТА), борную кислоту, цинк сернокислый, калий йодистый, натрий молибденовокислый, медь сернокислую, кобальт хлористый, сиреневую кислоту, миоинозит, тиамин гидрохлорид, пиродоксин гидрохлорид, никотиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, 6-бензиламинопурин, сахарозу, агар-агар, остальное - вода.

Данная питательная смесь при рН 5,5-5,7 нагревается до растворения агара, разливается по сосудам и автоклавируются при давлении 0,9 атм. при температуре 119-121°С, после чего осуществляется высаживание экспоната.

Наиболее близким аналогом заявляемой питательной среды, выбранным в качестве прототипа, является питательная среда для размножения различных ягодных и плодовых культур, описанная в протоколе Кворина-Лепуавра [Quoirin М., Lepoivre P.// Acta Horticulture. 1977. V. 78. Р. 437-442]. Данная среда содержит макро- и микро-элементы, а именно: аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, магний сернокислый, кальций азотнокислый, калий фосфорнокислый, железо(П) сернокислое и (Na2ЭДТА), позиционируемые, как уже было замечено выше, как железный комплекс ЭДТА, цинк сернокислый, калий йодистый, натрий молибденовокислый, медь сернокислую, кобальт хлористый, борную кислоту, воду. К данной минеральной составляющей питательной среды добавляются общепринятые органические препараты, активирующие микроразмножение, включающие миоинозит, тиамин гидрохлорид, пиродоксин гидрохлорид, никотиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, 6-бензиламинопурин, сахарозу, агар-агар. Составы, описанные в протоколе Кворина-Лепуавра, были дополнительно проверены на эффективность выращивания крыжовника сорта «Розовый-2». При использовании составов, содержащих этилендиаминтетраацетат натрия Na2ЭДТА и железо сернокислое, а также другие указанные выше компоненты в качестве питательной среды для размножения крыжовника сорта «Розовый-2», были получены показатели, характеризующие эффективность этого состава при его использовании, а именно выявлено, что коэффициент размножения составляет 1,1, среднее число побегов (штук)-1,1, средняя длина побегов (см)-1,2.

Как показали дополнительные исследования питательной среды-прототипа, в процессе микроразмножения на этой среде в большинстве случаев не удается достичь высоких коэффициентов размножения и длины образуемых побегов крыжовника сорта «Розовый-2», поскольку у растений часто наблюдается железный хлороз и некроз тканей. При развитии микрорастений в стерильных условиях при использовании указанной выше питательной среды наблюдается снижение общего коэффициента размножения и производительности процесса, причиной чего, по всей вероятности, является отсутствие в питательной среде уже готового, хорошо усваиваемого комплекса железа (Ш).

Для повышения эффективности питательной среды, применяемой для выращивания крыжовника сорта «Розовый-2», а именно увеличения коэффициента его размножения и длины побегов, предлагается новый состав питательной среды для размножения на стадии пролиферации крыжовника сорта «Розовый-2», содержащий следующие компоненты (мг/л): аммоний азотнокислый 200-360, калий азотнокислый 750-1550, кальций азотнокислый 650-800, магний сернокислый 120-250, калий фосфорнокислый 300-370, борная кислота 6,0-6,4, цинк сернокислый 8,0-9,2, калий йодистый 0,075-0,085, натрий молибденовокислый 0,2-0,3, медь сернокислая 0,02-0,03: кобальт хлористый 0,02-0,03, железный(П) комплекс гидроксиэтилидендифосфоновой кислоты 15,2-60,8, миоинозит 100, тиамин гидрохлорид 0,5, пиродоксин гидрохлорид 0,5, никотинамид 0,5; глицин 1000, 6-бензиламинопурин 0,3, сахароза 30000, агар 6000, остальное вода до 1 л.

Сопоставительный анализ предлагаемого состава с составом-прототипом показывает, что заявляемая питательная среда, как и известная, выбранная в качестве прототипа, содержит макро- и микро-элементы, регуляторы роста и другие органические добавки, однако она отличается от известной тем, что в качестве комплекса железа(П) в ней используется комплекс гидроксиэтилидендифосфоновой кислоты- Fe(П)HEDP, в отличие от прототипа, где используется железо(П) сернокислое и этилендиаминтетраацетат натрия, позиционируемый как железный комплекс EDTA.

Дополнительные исследования питательных растворов, в которых вместо предлагаемого комплекса железа(П) с гидроксиэтилидендифосфоновой кислотой - Fe(П)HEDP содержатся комплексы железа(Ш) с аминоуксусными кислотами, такими как этилендиаминтетрауксусная кислота(ЕDТА), диэтилентриаминпентауксусная кислота (DTPA), этилендиаминди(2-гидроксифенил)уксусная кислота (EDHHA)], показали, что в интервале предлагаемых концентраций компонентов в составах высокая эффективность получаемой питательной среды не достигается. Кроме того, известно, что комплексы железа(П) с карбоксилсодержащими комплексонами не образуются, поскольку в процессе комплексообразования при взаимодействии солей железа(П) с EDTA, DTPA, EDDH железо(П) окисляется в железо(Ш).

Процесс микроклонирования крыжовника сорта «Розовый-2» на стадии его пролиферации с использованием предлагаемой питательной среды проводится по следующей схеме: в питательную среду вносятся компоненты в подобранных оптимальных концентрациях (табл.1, среда 2-4), добавляется вода, и объем раствора доводится до 1 л, затем устанавливается рН 5,5-5,7 и проводится нагревание до полного растворения агара. После этого питательная среда разливается по культуральным сосудам и автоклавируется при давлении 0,1 мПа (при температуре 119-121°С) в течение 20-25 мин. После этого в каждый сосуд высаживается по 5 микрочеренков длиной 2-3 узла. Культуры инкубируются в световой комнате при интенсивности освещения 2500 люкс, 16-ти часовом фотопериоде и температуре 20-22°С.

Ниже предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами и таблицами: Таблица 1 «Концентрация компонентов питательных сред», Таблица 2 «Влияние состава питательной среды на микроразмножение крыжовника сорта Розовый-2 на стадии пролиферации».

Пример 1. В питательную среду вносят компоненты в указанных концентрациях (табл. 1, среда 2). Объем раствора доводят до 1 л, устанавливают рН 5,5-5,7 и при нагревании добиваются растворения агара. Питательную среду разливают по культуральным сосудам и автоклавируют при давлении 0,1 мПа (при температуре 119-121 С) в течение 20 мин. После этого в каждый сосуд высаживают по 5 микрочеренков длиной 2-3 узла. Культуры инкубируют в световой комнате при интенсивности освещения 2500 люкс, 16-ти часовом фотопериоде и температуре 20-22°С. Морфометрические показатели микропобегов рассматривали на 60-тый день субкультивирования.

Использование разработанной питательной среды обеспечивает увеличение коэффициента размножения крыжовника сорта «Розовый-2» в 1,82 раза по сравнению со средой Кворина-Лепуавра, что на стадии пролиферации в первую очередь определяет эффективность питательной среды (табл. 2).

Пример 2. Осуществляют аналогично примеру 1. Концентрации компонентов указаны в табл. 1. (Среда 3). Результаты размножения на предлагаемой среде представлены в табл. 2. Предложенная среда обеспечивает увеличение коэффициента размножения в 1,36 раза и средней величины побегов в 1,18 раз по сравнению со средой Кворина-Лепуавра.

Пример 3. Осуществляют аналогично примеру 1. Концентрация компонентов указана в табл. 1 (Среда 4). Результаты размножения на разных средах представлены в табл. 2. На разработанной среде по сравнению со средой Кворина-Лепуавра наблюдается увеличение коэффициента размножения в среднем в 1,64 раза и средней длины побегов в 1,18 раз.

Как показали исследования, при более высоких концентрациях питательных веществ (среда 5) и более низких (среда 1) по сравнению с предложенным диапазоном концентраций рост эксплантов ухудшается и, следовательно, подобные питательные растворы менее эффективны (табл. 2).

Таким образом, применение предлагаемой питательной среды позволяет получить новый эффект: увеличить коэффициент размножения и длину побегов по сравнению с известной средой, обеспечивая увеличение коэффициента размножения крыжовника сорта Розовый-2 в 1,36-1,82 раза, что на стадии пролиферации является основным показателем эффективности действия предлагаемой питательной среды.

Питательная среда для размножения на стадии пролиферации крыжовника сорта «Розовый-2», содержащая аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, магний сернокислый, калий фосфорнокислый, комплексное соединение железа(П), борную кислоту, цинк сернокислый, калий йодистый, натрий молибденовокислый, медь сернокислую, кобальт хлористый, кальций азотнокислый, органическую составляющую и воду, отличающаяся тем, что в качестве комплексного соединения железа(П) питательная среда содержит железный(П) комплекс гидроксиэтилидендифосфоновой кислоты Fe(П)HEDP при следующем весовом соотношении компонентов, мг/л:

Аммоний азотнокислый 200-360
Калий азотнокислый 750-1550
Кальций азотнокислый 650-800
Магний сернокислый 120-250
Калий фосфорнокислый 300-370
Борная кислота 6,0-6,4
Цинк сернокислый 8,0-9,2
Калий йодистый 0,075-0,085
Натрий молибденовокислый 0,2-0,3
Медь сернокислая 0,02-0,03
Кобальт хлористый 0,02-0,03
Железный(П) комплекс гидроксиэтилидендифосфоновой кислоты 15,2-60,8
Миоинозит 100
Тиамин гидрохлорид 0,5
Пиридоксин гидрохлорид 0,5
Никотинамид 0,5
Глицин 1000
6-Бензиламинопурин 0,3
Сахароза 30000
Агар 6000
Вода остальное до 1 л



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения подвойного материала (Л-2) в условиях in vitro, черенкование пробирочных растений и высадку одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро- и микроэлементы и витамины на основе прописи питательной среды, Fe-хелат, агар-агар, сахарозу, при этом в питательную среду добавляют высокую концентрацию солей (Хелат - Fe 50 мг/л и Ca(NO3)2 1000 мг/л) и для растительной активности растения пересаживают на питательную среду содержанием 1 мг 6 БАП и 0,05 г/л янтарной кислоты, при этом концентрация микросолей: ZnSO4*7H2O - 4.3 мг/л и Н3ВО3 - 3.1 мг/л, источник кальция тоже изменен в форме (от CaCl2*2H2O на Ca(NO3)2*4H2O), пересадку проводят через 3 недели, при размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, при этом оптимальными условиями культивирования Л-2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2500-5000 лк, при 16-часовом фотопериоде.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу идентификации растения сои, которое проявляет повышенную устойчивость к гнили корня и стебля, обусловленной Phytophthora (PRSR). Также раскрыт способ селекции с помощью маркера.
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов из язычковых цветков хризантем in vitro, предназначенный для культивирования in vitro язычковых цветков растений хризантемы, и может быть использовано для массового получения генетически однородного посадочного материала ценных сортов и гибридов хризантем, где в качестве первичного экспланта используют язычковые цветки, которые культивируют на питательной среде, содержащей минеральные соли по прописи Мурасиге и Скуга, а также гормоны 6-бензиламинопурин (БАП) в концентрации 1 мг/л и индолилуксусная кислота (ИУК) 0,5 мг/л и препарат Аминовен 15%-ный в концентрации 3 мл/л.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ, включающий высадку микрорастений на питательную среду по прописи Мурасиге и Скуга (MS) с минеральными солями для этапа пролиферации, дополнительно в питательную среду добавляют препараты кинетин (0,1 мг/л) и ИМК (0,1 мг/л) и микрорастения в течение 50-60 дней инкубируют в световой комнате при интенсивности освещения 2500 люкс, 16-часовом фотопериоде и температуре 20-22°С.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ длительного депонирования in vitro растений малины ремонтантной относится к области сельского хозяйства, в частности к биотехнологии растений, и может быть использован для длительного беспересадочного хранения микрорастений малины ремонтантной.

Способ относится к биотехнологии и может быть использован для получения нового исходного материала для создания сортов. Способ включает изолирование соцветий и культивирование пыльников и завязей на питательной среде.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ снижения витрификации микрорастений ореха грецкого в культуре in vitro.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения в культуре in vitro сортов Amelanchier alnifolia (Nutt.) Nutt.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ длительного беспересадочного хранения растений малины, еживики и малино-еживичных гибридов в условиях in vitro, включающий в себя предварительное культивирование микропобегов растений на среде MS с добавлением сахарозы 25-30 г/л, агар-агара 9 г/л, витаминов MS 1 мл/л, AgNO3 1-5 мг/л, 6-Бензиламинопурина 0,5-0,8 мг/л, с последующей инкубацией растений в течение 2 недель при интенсивном (примерно 5000 люкс) длиннодневном режиме освещения (16 ч день/8 ч ночь) при температуре +22°С и переносом растений в условия длительного хранения на +4°С при пониженной интенсивности освещения (примерно 2000 люкс) и режиме короткого дня (8 ч день/16 ч ночь).

Изобретение относится к области биотехнологии растений. Способ включает культивирование микропобегов в условиях in vitro.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ, включающий в себя чередование культуральных сред и условий освещения на этапе размножения с использованием разных фитогормонов: 6-Бензиламинопурина, зеатина и 6-Бензиламинопурина и индолилмасляной кислоты; и интенсивности освещения 1500-2000 люкс и 800-1000 люкс. Изобретение позволяет значительно повысить эффективность размножения микрорастений, что обеспечивает повышение коэффициента мультипликации, а также влияет на укоренение, увеличивая частоту укоренения в условиях in vitro. 2 табл.
Наверх