Способ получения адриамицина

 

О П И С А Н И Е 33I537

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Со сз Советских

Социалистических

Республик и ПАТЕИТУ

Зависимый от патента №

Заявлено 10.1V.1969 (№ 1319914 23-4) М. Кл. С 07с 15/32

Приоритет 12.IV.19á8, № 15159А/б8, Италия

Комитет по делам иэобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 547.6.07(088.8) Опубликовано 07,lll,1972, Б|оллетень ¹ 9

Дата опубликования описания 18,V.1972

Лвторы изобретения

Иностранцы

Федерико Аркамоне, Джованни Францесчи и Сергио Пенко (Италия) Иностранные фирмы

«Фармиталия» (Италия) 1 и «Сосьета Фармацеутики Италия» (Италия) 3 аявители

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АДРИАМИЦИНА производные формулы

0 Ог!

Изобретение относится к области получения антибиотика адрнамицина, обладающего ценными свойствами.

Известен микробиологический способ получения адриамицина с помощью микроорганизма Streptomyces peucetius var caesius.

Предлагаемый химический способ получения адриамицина формулы

СН»

СО

0Н

V ) 9т,ттЗ 0 Отт 0

= . 3

В.

О ОН

СН ОН

СО

011, 15

KH3 O

К где

ОН или

=СИ где R имеет формулу

20 бН бн

Х вЂ”.

Н COCF подвергают взаимодействию с йодом или бромом в среде инертного органического раство25 рителя и на полученное соответствующее его 14-галогенпронзводное действуют ацетатом

NH3 ОН

1 — СН вЂ” СН2 — СН вЂ” СН вЂ” СН вЂ” СН8, О заключаются в том, что дуаномицин или где R имеет формулу

NX ОН

1 — СН вЂ” СН2 — СН вЂ” СН вЂ” СН вЂ” СН3, О

331537 щелочного металла в среде полярного органического растворителя с последующим щелочным гидролизом полученного 14-ацетоксипроизводного, отщеплением защитной группы и выделением целевого продукта известными приемами.

В случае галогенирования дуаномицина йодом желательно, чтобы реакция протекала в основной среде, например в присутствии окиси кальция. Указанная реакция идет преимущественно при комнатной температуре, но ее можно проводить и при нагревании, лучше в среде инертного газа.

Найдено, что аминогруп пу аминосахара дауномицина целесообразнее защищать соответствующей защитной группой, особенно когда в качестве галогенирующего агента выступает йод. С этой целью можно использовать одну из известных групп, способны.;. защищать аминогрупну, например ацилпроизводное либо основание Шиффа. Чожно также защитить эту группу образованием соединения трифторацетилпроизводного либо соответствующего основания Шиффа с салициловым альдегидом.

Трифторацетилпроизводное дауномицина получают известным способом взаимодействием дауномицина в виде свободного основания с трифторуксусным ангидридом в присутствии органического растворителя, а основание Шиффа — взаимодействием хлоргидрата дауномицина с салициловым альдегидом.

При реакции галогенирования с бромом или йодом получают соответственно 14-бром- или йодпроизводное, которое взаимодействует с ацетатом щелочного металла, например ацетатом калия, в присутствии полярного растворителя такого, как ацетон. Реакция протекает при нагревании в течение короткого промежутка времени либо на холоду, что удлиняет ее продолжительность. В результате образуется 14-ацетоксипроизводное дауномицина, которое после гидролиза в щелочной среде превращается в соответствующее 14-оксипроизводное.

В случае использования 14-бромпроизводного соответствующее 14-оксипроизводное можно получить при непосредственном воздействии щелочи на это 14-бромпроизводное.

Когда берут дауномицин с аминогруппой аминосахара, защищенной соответствующей защитной группой, перед тем как отделить конечный продукт, эту защитную группу удаляют уже известным способом.

Удаление салицилиденовой группы происходит в результате гидролиза М-салицилиденадриамицина в кислой среде, а трифторацетильной группы — после обработки N-трифторацетиладриамицина этиловым о-муравьиным эфиром и и-толуолсульфокислотой для получения N-трифторацетиладриамицин-9,14этил-о-муравьиного эфира, из которого затем трифторацетильную группу удаляют гидролизом в щелочной среде.

После гидролиза адриамицин-9,14-этил-о5

35 40

65 муравьиного эфира в кислой среде получают свободный адриамицип.

Пример 1. 1,3 г хлоргидрата дауномицнна в 30 лл метилового спирта и 100 ял безводного диэтилового эфира обрабатывают

3,3 лл раствора 10 г брома в 100,ял хлороформа. Получеш1ую реакционную смесь выдерживают 4 час при комнатной температуре, унаривают досуха при пониженном давлении, полученный осадок растворяют в 5 — 10 ял хлороформа и добавляют к этому раствору трех-пятикратный объем этилового эфира.

Хлоргидрат бромдауномицина выпадает в виде осадка с выходом 1,1 г. После перекристаллизации из смеси растворителей хлороформ — метанол он имеет т. пл. 177 — 178 С.

Раствор 1 г хлоргидрата 14-бромдауномицина в 150 л л метилового спирта обрабатывают 70 ял дистиллированной воды, добавляют к этому раствору 0,1 и. раствор гидрата окиси натрия доводят рН до 10,3, и выдерживают pIO при таком рН 20 .вин. Все процессы ведут в среде азота.

Затем после разбавления полученного раствора дистиллированной водой его многократно экстрагируют хлороформом до тех пор, пока все окрашивающие вещества не будуг извлечены р астворителем.

Объединенные хлороформные экстракты высушивают над безводным сульфатом натрия, упаривают при пониженном давлении до небольшого обьема, смешивают с 1,8 мл 0,6 н. раствора соляной кислоты в безводном метаноле и обрабатывают десятикратным объемом этилового эфира.

Получают 0,72 г аморфного осадка, который выкристаллизовывается из смеси метанол — пропанол. При этом выход хлоргидрата адриамицина 0,45 г и т. пл. 205 — 210 С (c разл.).

Пример 2. Полученную по примеру 1 суспензию 6,6 г хлоргидрата 14-бромдауномицина в 200 яя безводного ацетона смешивают с 1,8 г плавленого и тонкоизмельченного ацетата калия, фильтруют после нагревания ее с обратным холодильником в течение 45 мин и полученный раствор досуха упаривают при пониженном давлении. Осадок, растворенный в хлороформе, обрабатывают этиловым эфиром и очищают 0,45 г осадка фильтрацией его через колонку, наполненную салициловой кислотой (система растворителя включает хлористый метилен — метанол — воду, взятых в соотношении 120: 20: 2). В результате получают 150 лг 14-ацетоксидауномицина с т. пл. 196 — 198 С.

Раствор 0,1 г 14-ацетоксидауномицина в

30 лл смеси ацетон — метанол (2: 1) смешивают с 10 лл 5 /О-ного раствора бикарбоната натрия. Смесь выдерживают 3 час при комнатной температуре и затем после разбавления ее водой экстрагируют хлороформом.

Полученные хлороформные экстракты соединяют вместе и высушивают над безводным сульфатом натрия, затем упаривают до полу331537

45

55

65 чения небольшого объема при пониженном давлении. Упаренный раствор смешивают с

0,15 мл 0,6 н. раствора соляной кислоты в безводном метаноле, а затем с трехкратным объемом этилового эфира. Аморфный осадок пропускают через колонку, наполненную 40 г порошка целлюлозы. Его элюируют системой растворителей пропанол — этилацетат — вода, находящихся в соотношении 7: 1: 2 (по объему) .

Фракции, содержащие адриамицин, объединяют и упаривают досуха. Получают 43 мг хлоргидрата адриамицина с т. пл. 204 — 210 С (с разл.).

Пример 3. 4,6 г свободного основания дауномицина в 390 мл хлороформа и 155 мл безводного эфира обрабатывают 9,3 мл трифторуксусного ангидрида. Реакционную смесь выдерживают при комнатной температуре

30 мин, экстрагируют водой и органическую фазу упаривают досуха под вакуумом. Осадок растворяют в 100 мл безводного метанола и нагревают с обратным холодильником 10 мин.

Раствор метанола упаривают досуха, и осадок, выкристаллизованный из смеси растворителей тетрагидрофуран — петролейный эфир, дает выход 4,5 г N-трифторацетилдауномицина с т. пл. 169 — 171 С.

0,6 г N-трифторацетилдауномицина в 30 мл тетрагидрофурана и 20 мл безводного метанола смешивают с 0,5 г йода и 0,5 г тонкоизмельченной окиси кальция. Смесь выдерживают в среде азота при одновременном встряхивании 5 час, затем ее фильтруют и раствор, разбавленный хлороформом, взбалтывают вместе с водой при подкислении соляной кислотой до изменения окраски лакмусового индикатора. Органическую фазу упаривают досуха под вакуумом, осадок растворяют в небольшом количестве хлороформа и затем подвергают хром атогр афическому р азделению при элюировании хлороформом, содержащим повышенные количества этил ацетата.

Целевой продукт элюируют хлороформом, в котором концентрация этилацетата составляет примерно 10%. Получают 0,25 г 14-йодN-трифторацетилдауномицина с т. пл. 172—

175 С.

0,8 г этого соединения в течение 15 мин нагревают с обратным холодильником вместе с 60 мл безводного ацетона в присутствии

1,5 г плавленого и тонкоизмельченного ацетата калия. После фильтрации этот раствор в хлороформе взбалтывают с водой при медленном подкислении разбавленной соляной кислотой (до изменения цвета лакмусового индикатора) . Органическую фазу упаривают почти досуха под вакуумом и к осадку добавляют петролейный эфир. При осаждении получают 0,62 г 14-ацетокси-N-трифторацетилдауномицина с т. пл. 150 — 153 С.

1,4 г этого продукта, растворенного в смеси

50 мл метанола и 100 мл ацетона, смешивают со 100 мл 5% -ного водного раствора бикарбоната натрия. Полученную смесь выдерживают 3 час при комнатной температуре и в среде азота, затем смешивают с водой, подкисляют водным раствором винной кислоты до тех пор, пока рН не станет равным 5 — 6, и многократно экстрагируют хлороформом при общем количестве используемого растворителя 350 м.ч. Органические фазы объединяют и упаривают при пониженном давлении.

При этом образуется 0,95 г твердого осадка, который растворяют в хлороформе и разделяют в хроматографической колонке. Полученный таким образом N-трифторацетиладриамицин элюируют хлороформом, содержащим

15% этилацетата. При объединении элюатов и последующем их упаривании получают

0,56 г целевого продукта с т. пл. 174 †1 С.

0,45 г N-трифторацетиладриамицина в 80 мл диэтилового эфира смешивают с 10 мл этилового о-муравьиного эфира и 3 мг а-толуолсульфокислоты. После выдержки в течение

48 час при комнатной температуре реакционную смесь разбавляют хлороформом и промывают водой прп интенсивном взбалтывании в делительной воронке. Органическая фаза, упаренная до небольшого объема, образует

35 г осадка при добавлении петролейного эфира. Полученный продукт разделяют в хроматографической колонке, заполненной 7 г салициловой кислоты, при элюировании хлорофор «ом, содержащим 10% этилацетата.

При упариванпп элюата образуется 80 лtã

9,14-N- трифторацетиладриамицинэтилхлормуравьиного эфира с т. пл. 162 — 164 С.

0,2 г этого соединения растворяют в смеси

10 мл ацетона и 40 льг 0,1 н. раствора гидроокиси натрия в среде чистого азота. После выдерживания раствора в течение 20 мин при комнатной температуре добавлением 1 н. раствора соляной кислоты доводят рН до

8,6 и этот раствор многократно экстрагируют

50 мл хлороформа до тех пор, пока все красящие вещества не перейдут в растворитель.

Объединенные хлороформные экстракты упаривают, пока не останется небольшой объем, и подвергают хроматографическому разделению в колонке, заполненной 4 г салициловой кислоты. Элюирование осуществляют смесью растворителей хлористы и метилен— метанол — вода в соотношении 50: 10: 1. При упаривании элюата получают 0,11 г адриамицин-9,14-этил-о-муравьиного эфира с т. пл.

203 †2 С.

Раствор 0,1 г этого соединения в 9 мл, ацетона смешивают с 1 мл 1 н. раствора соляной кислоты. Этот раствор выдерживают при комнатной температуре 20 час. Полученный осадок, выкристаллпзованный из системы растворителей метанол — пропанол, дает 40 .иг хлоргидрата адриамицина с т. пл. 204 — 210 С (с разл.).

Пример 4. Раствор 1 г хлоргидрата дауномицина в 30 мл дистиллированной воды смешивают с 0,1 и. раствором гидроокисп натрия до рН 8,6, а затем его раствор обрабатывают 10 мл 10%-ного раствора салпци331537

О ОН

h;,!

Ц! ф!

ОСН,О ОН

10.-СН,ОН

СО

ОН, О

СНЗ

СО

ОН

Зо

Н30 ОН О ! y

40 где

ОН н х —.

Н или

COCF, Редактор Л. Ильина Составитель Г. Жукова

Корректоры: Е. Исакова и Т. Бабакина

Заказ 1333/5 Изд. № 554 Тираж 448 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий прн Совете Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 415

Типография, нр. Сапунова, 2 лового альдегида в метаноле. Осадок извлека1от и промывают водой, затем его кристаллизуют из этанола и в результате получают

0,97 г салицилидендауномицина с т. пл. 168—

1700С.

Раствор 0,5 г салицилидендауномицина в

20 лил тетрагидрофурана смешивают с 10 лил безводного метанола, 1 г йода и 1 г окиси кальция. Смесь медленно нагревают с обратным холодильником 40 лик, фильтруют и упаривают досуха при пониженном давлении.

Осадок растворяют в 22 л л хлороформа. Хлороформный раствор, промытый водой при взбалтывании и высушенный, упаривают, оставляя небольшой его объем, и смешивают с петролейным эфиром для полного осаждения продукта. Получают 0,41 г сырого 14-йодсалицилидендауномицина.

Этот продукт растворяют в 20 лл безводного ацетона, обрабатывают 80 г плавленого и тонкоизмельченного ацетата калия и нагревают с обратным холодильником 20 мин. Затем эту суспензию охлаждают, фильтруют и фильтрат досуха упаривают в вакууме. Осадок, состоящий из 14-ацетоксисалицидендауномицина, растворяют в смеси равных частей растворителей метанола — ацетона и смешивают с 18 л1л 5о о-ного водного раствора бикарбоната натрия. Эту реакционную смесь экстрагируют хлороформом при комнатной температуре в течение 3 час. Хлороформный экстракт упаривают до тех пор, пока не останется примерно 10 л1л, и подвергают разделению в хроматографической колонке, заполненной 3 г салициловой кислоты. Элюирование осуществляют смесью растворителей хлористый метилен — петролейный эфир — метанол в соотношении 10: 50: 5.

Фракции, содержащие исходный продукт и прочие примеси, сливают, а остальные собирают и упаривают, в результате чего получают

65 яг салицилиденадриамицина с т. пл. 194 С (с разл.).

Раствор 0,2 г салицилиденадриамицина в

20 л1л хлороформа трехкратно экстрагируют

0,1 и. раствором соляной кислоты, добавляя каждый раз по 10 л1л. Окрашенный продукт полностью переходит в водную фазу, который в среде азота подщелачивают гидратом окиси натрия до рН 8,6 и экстрагируют хлороформом вплоть до полного обесцвечивания экстрактов. Эти экстракты объединяют и сушат над безводным сульфатом натрия, упаривают при пониженном давлении до тех пор, пока не останется 5 лл, и смешивают с 0,5 мл

0,6 н. раствора соляной кислоты и десятикратным объемом безводного этилового эфира. Получают 0,12 г хлоргидрата адриамицина с т. пл. 205 — 210 С (с разл.) ..

Предмет изобретения

Способ получения адриамицина формулы где R имеет формулу

NH, ОН ! — СН вЂ” СН вЂ” СН вЂ” СН вЂ” СН вЂ” (ьНз, ! О ! отличающийся тем, что дауномицин или его

25 производньlе формулы

35 где R имеет формулу

NX ОН ! — СН вЂ” СН вЂ” СН вЂ” СН вЂ” СН вЂ” CH3, 1

О ! подвергают взаимодействию с йодом или бромом в среде инертного органического растворителя и на полученное соответствующее

14-галогенпроизводное действуют ацетатом

50 щелочного металла в среде полярного органического растворителя с последующим щелочным гидролизом полученного 14-ацетоксипроизводного, снятием защитной группы и выделением целевого продукта известными

55 приемами.